Name: Generatie van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen uit perifeer bloed Met behulp van de STEMCCA lentivirale vector (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-31T23:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Leer hoe je menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen genereert uit perifeer bloed met behulp van de STEMCCA lentivirale vector. Deze methode vereenvoudigt celherprogrammering voor regeneratieve geneeskunde.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studies werden deels gefinancierd door NIH UO1HL107443-01 Award uit aan GJM en GM.

1. Isolatie en expansie van perifere mononucleaire bloedcellen (PBMCs) DAG 0 <ol><li> Trek 4 ml van perifeer bloed in een BD Vacutainer CPT Cell Voorbereiding Buis met natriumcitraat. Inverteer de buis 8 tot 10 keer en centrifugeer bij 1800 g gedurende 30 min bij kamertemperatuur. Idealiter zou deze stap gedaan worden binnen 2 uur na afname. </li><li> Verzamel de mononucleaire cellen (MC&#39;s) door pipetteren de buffy coat (cellaag tussen gel barrière en plasma) in een steriele 15 ml conische centrifugebuis. Breng totale volume op 10 ml met steriel fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), invertsuiker herhaaldelijk en centrifugeer bij 300 xg gedurende 15 minuten. </li><li> Resuspendeer de cellen in 10 ml steriel PBS en voer cellen. Breng 1 tot 2x10 6 cellen in een steriele 15 ml conische centrifugebuis en centrifugeer bij 300 xg gedurende 10 minuten. </li><li> Resuspendeer de cellen in 2 ml expansie medium (EM) (QBSF-60 Stem Cell medium dat 50 ug / ml Ascorbic Acid, 50 ng / ml SCF, 10 ng / ml IL-3, 2 U / ml EPO, 40 ng / ml IGF-1, 1 uM dexamethason en 100 ug / ml primocin of 1% Pen / Strep) en overbrengen in een putje van een 12-well plaat. Incubeer de cellen in een 37 ° C, 5% CO2 incubator. </li><li> Centrifugeer overige cellen bij 300 x g gedurende 10 min en vries ~ 2x10 6 cellen / flacon in FBS bevattende 10% DMSO. </li><li> Het protocol die ingevroren PBMCs starten ontdooien 1 injectieflacon cellen in 10 ml van QBSF medium en centrifugeer bij 300 xg gedurende 10 minuten. Resuspendeer de cellen in 2 ml EM en overgedragen naar een putje van een 12-well plaat. Incubeer de cellen in een 37 ° C, 5% CO2 incubator. </li></ol> Dag 3 en dag 6 <ol start="17"><li> Breng de cellen naar een steriele 15 ml conische buis en eenmaal wassen en met 1 ml van QBSF-60 Stem Cell Medium voor hechtende cellen te verzamelen. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 300 g gedurende 10 minuten. </li><li> Resuspendeer de cellen in 2 ml EM en goed naar een van een 12-Well plaat. Incubeer de cellen in een 37 ° C, 5% CO2 incubator. </li></ol> 2. Transductie van PBMCs met STEMCCA Lentivirus DAG 9 <ol><li> Breng de cellen naar een steriele 15 ml conische buis en eenmaal wassen en met 1 ml van QBSF-60 Stem Cell Medium voor hechtende cellen te verzamelen. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 300 g gedurende 10 minuten. </li><li> Resuspendeer de cellen in 1 ml vers EM met 5 pg / ml polybreen en STEMCCA lentivirus (MOI = 1 tot 10) en overbrenging naar een putje van een 12-well plaat. (Het protocol beschrijft de productie van lentivirale deeltjes is te vinden op <a href="http://www.bumc.bu.edu/stemcells/protocols/" target="_blank">http://www.bumc.bu.edu/stemcells/protocols/</a> ) </li><li> Draai de plaat bij 2250 rpm bij 25 ° C gedurende 90 minuten. </li><li> Na het centrifugeren, voeg een extra 1 ml vers EM met 5 pg / ml polybreen voor een totaal van 2 ml medium en incubeer de plaat in een 37 ° C,5% CO2 incubator. </li></ol> DAG 10 <ol start="16"><li> Breng de cellen naar een steriele 15 ml conische buis en eenmaal wassen en met 1 ml van QBSF-60 Stem Cell Medium voor hechtende cellen te verzamelen. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 300 g gedurende 10 minuten. </li><li> Resuspendeer de cellen in 2 ml EM en overbrengen in een well van een 12-well plaat. Incubeer de cellen in een 37 ° C, 5% CO2 incubator. </li></ol> 3. Plating getransduceerde cellen op MEF DAG 11 <ol><li> Coat de putjes van een 6-wells plaat met 0,1% gelatine en plaat geïnactiveerd muis embryonale fibroblasten (MEF) op 2x10 5 cellen / putje in MEF medium (IMDM dat 10% FBS, 1% niet-essentiële aminozuren, 100 pM β- mercaptoethanol, 2 mM L-glutamine, 100 ug / ml primocin of 1% Pen / Strep). Bereid 3 wells per infectie. </li></ol> DAG 12 <ol start="2"><li> Breng de cellen naar een steriele 15 ml conische buis<html> en eenmaal wassen en met 1 ml van QBSF-60 Stem Cell Medium voor hechtende cellen te verzamelen. </li><li> Resuspendeer de cellen in 3 ml van MEF medium dat 10 ng / ml bFGF en ascorbinezuur en groeifactoren in dezelfde concentraties als gebruikt in EM medium (50 ug / ml ascorbinezuur, 50 ng / ml SCF, 10 ng / ml IL -3, 2 U / ml EPO, 40 ng / ml IGF-1, 1 uM dexamethason). </li><li> Plaat 1 ml cellen per putje van een 6-wells plaat met MEFs. Voeg 1,5 ml van MEF media met bFGF, ascorbinezuur en groeifactoren voor een totaal van 2,5 ml medium / putje. </li><li> Draai de plaat bij 500 rpm bij 25 ° C gedurende 30 minuten. Incubeer de plaat in een 37 ° C, 5% CO2 incubator. </li></ol> DAG 14 <ol start="6"><li> Feed cellen om de dag met 2,5 ml van MEF medium dat 10 ng / ml bFGF en 50 ug / ml ascorbinezuur (geen groeifactoren). Zuig en gooi drijvende cellen met elke feed. </li><li> Voeg extra MEFs als nodig (meestal een keer per week). </li></ol>p &quot;&gt; ~ DAG 20 <ol start="8"><li> Zodra kleine kolonies verschijnen, voer cellen dagelijks met 2 ml van menselijke embryonale stamcellen (hESC) medium (DMEM/F12 dat 20% Knockout Serum vervanging, 1% niet-essentiële aminozuren, 100 uM β-mercapto-ethanol, 2 mM L-glutamine , 100 ug / ml primocin of 1% Pen / Strep en 10 ng / ml bFGF). </li></ol> 4. Picking en uitbreiding van IPSC Clones ~ DAG 30 tot 40 <ol><li> Extra elke kolonie in afzonderlijke putjes van een 12-well plaat vooraf geënt met geïnactiveerd MEFs die 1 ml / putje hESC medium plus 10 pM Stemolecule Y27632 (ROCK inhibitor). </li><li> Dagelijks voeden cellen daarna met 1 ml van hESC medium (geen ROCK inhibitor). </li></ol> 5. Immunofluorescentiekleuring voor Pluripotentie Markers <ol><li> Kleuring werd uitgevoerd met de kit &quot;ES Cell Marker Sample Kit&quot; van Millipore en volgens protocollen van de fabrikant. </li></ol> 6. Excisie van Integnominaal STEMCCA Vector <ol><li> Excisie van herprogrammering cassette wordt bereikt met behulp van een Cre-IRES-Puro expressie vector na transfectie en kortstondige puromycineselectie als beschreven 6. </li></ol>

<ol><li>Lowry, W. E., Richter, L., Yachechko, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Generation of human induced pluripotent stem cells from dermal fibroblasts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 2883-2888 (2008).</li>
<li>Park, I. H., Zhao, R., West, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+of+human+somatic+cells+to+pluripotency+with+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors.</a> Nature. 451, 141-146 (2008).</li>
<li>Takahashi, K., Tanabe, K., Ohnuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li>
<li>Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> Science. 318, 1917-1920 (2007).</li>
<li>Stadtfeld, M., Hochedlinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotency%3A+history%2C+mechanisms%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotency: history, mechanisms, and applications.</a> Genes Dev. 24, 2239-2263 (2010).</li>
<li>Somers, A., Jean, J. C., Sommer, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgene-free+lung+disease-specific+human+induced+pluripotent+stem+cells+using+a+single+excisable+lentiviral+stem+cell+cassette%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette.</a> Stem Cells. 28, 1728-1740 (2010).</li>
<li>Loh, Y. H., Hartung, O., Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+of+T+cells+from+human+peripheral+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming of T cells from human peripheral blood.</a> Cell Stem Cell. 7, 15-19 (2010).</li>
<li>Seki, T., Yuasa, S., Oda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+terminally+differentiated+circulating+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of induced pluripotent stem cells from human terminally differentiated circulating T cells.</a> Cell Stem Cell. 7, 11-14 (2010).</li>
<li>Staerk, J., Dawlaty, M. M., Gao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+of+human+peripheral+blood+cells+to+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Reprogramming of human peripheral blood cells to induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7, 20-24 (2010).</li>
<li>Chou, B. K., Mali, P., Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+human+iPS+cell+derivation+by+a+non-integrating+plasmid+from+blood+cells+with+unique+epigenetic+and+gene+expression+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient human iPS cell derivation by a non-integrating plasmid from blood cells with unique epigenetic and gene expression signatures.</a> Cell Res. 21, 518-529 (2011).</li>
<li>vanden Akker, E., Satchwell, T. J., Pellegrin, S., Daniels, G., Toye, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+majority+of+the+in+vitro+erythroid+expansion+potential+resides+in+CD34%28-%29+cells%2C+outweighing+the+contribution+of+CD34%28%2B%29+cells+and+significantly+increasing+the+erythroblast+yield+from+peripheral+blood+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">The majority of the in vitro erythroid expansion potential resides in CD34(-) cells, outweighing the contribution of CD34(+) cells and significantly increasing the erythroblast yield from peripheral blood samples.</a> Haematologica. 95, 1594-1598 (2010).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

We beschrijven hierin de toepassing van de STEMCCA lentivirale vector menselijke iPSCs van mononucleaire cellen geïsoleerd uit enkele milliliters van vers verzameld perifeer bloed genereren. Het protocol kan ook gebruikt worden om ingevroren PBMCs (rechtstreeks verkregen uit de buffy coat), een detail van aanzienlijke praktische implicaties herprogrammeren bij gebruik donor cellen verkregen van een verre locatie. Voor de inductie van herprogrammering moet ondergaan geïsoleerde PBMCs een kritische expansiestap dat een ge...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> BD Vacutainer CPT Cell Voorbereiding Buis met natriumcitraat </td><td> BD Biosciences </td><td> 362760 </td><td></td></tr><tr><td> QBSF-60 Stem Cell Medium </td><td> Kwaliteit Biologische </td><td> 160-204-101 </td><td></td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen </td><td> 12440 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 11330 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S10250 </td><td></td></tr><tr><td> Knockout Serum vervanging </td><td> Invitrogen </td><td> 10828 </td><td></td></tr><tr><td> Primocin </td><td> Invivogen </td><td> ant-uur-2 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Invitrogen </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> Niet-essentiële aminozuren </td><td> Invitrogen </td><td> 11140 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoethanol </td><td> MP Biomedicals </td><td> 190242 </td><td></td></tr><tr><td> Ascorbinezuur </td><td> Sigma </td><td> A4544 </td><td></td></tr><tr><td> IGF-1 </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 291-G1 </td><td></td></tr><tr><td> IL-3 </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 203-IL </td><td></td></tr><tr><td> SCF </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 255-SC </td><td></td></tr><tr><td> EPO </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 286-EP </td><td></td></tr><tr><td> Dexamethason </td><td> Sigma </td><td> D4902 </td><td></td></tr><tr><td> Polybreen </td><td> Sigma </td><td> H-9268 </td><td></td></tr><tr><td> bFGF </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 233-FB </td><td></td></tr><tr><td> Stemolecule Y27632 </td><td> Stemgent </td><td> 04-0012 </td><td></td></tr><tr><td> ES Cell Marker Sample Kit </td><td> Millipore </td><td> SCR002 </td><td></td></tr></tbody></table>

generatie van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen uit perifeer bloed met behulp van de stemcca lentivirale vector

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

Door ectopische expressie van vier transcriptiefactoren, Oct4, Klf4, SOX2 en cMyc kunnen menselijke somatische cellen worden omgezet pluripotent toestand genereren zogenaamde geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) 1-4. Patiënt-specifieke iPSCs missen de ethische bezwaren die embryonale stamcellen (SER&#39;s) omringen en mogelijk zou afstoting te omzeilen. Zo zijn iPSCs veel aandacht voor de ziekte modelstudies de screening van farmacologische verbindingen en regeneratieve therapieën 5. We hebben aangetoond dat de generatie van transgene-vrije menselijke iPSCs van patiënten met verschillende longaandoeningen met een enkele accijnsproducten polycistronisch lentivirale Stem Cell Cassette (STEMCCA) dat codeert voor het Yamanaka factoren 6. Deze iPSC lijnen werden gegenereerd uit huidfibroblasten, de meest voorkomende celtype gebruikt voor het herprogrammeren. Normaal verkrijgen fibroblasten heeft een huid biopsie punch gevolgd door expansie van de cels in de cultuur voor een paar passages. Belangrijker is dat een aantal groepen rapporteerden de herprogrammering van humane perifere bloedcellen in iPSCs 7-9. In een studie werd een induceerbare Tet versie van de vector gebruikt STEMCCA 9, welk de bloedcellen gelijktijdig geïnfecteerd met een constitutief actieve lentivirus codeert omgekeerde tetracycline transactivator. In tegenstelling tot fibroblasten, kunnen perifere bloedcellen worden verzameld via minimaal invasieve procedures, wat veel ongemak en pijn van de patiënt. Een eenvoudige en effectieve protocol voor het herprogrammeren van bloedcellen met behulp van een constitutieve enkele accijnsgoederen vector kan versnellen van de toepassing van IPSC-technologie door het toegankelijk voor een breder onderzoeksgemeenschap. Bovendien herprogrammering van perifere bloedcellen maakt het genereren van iPSCs van individuen waarin huidbiopsies worden vermeden (dwz. Afwijkende littekens) of door reeds bestaande aandoeningen preventing toegang tot stansbiopsieën. Hier laten we zien een protocol voor het genereren van menselijke iPSCs van perifeer bloed mononucleaire cellen (PBMC) met een floxed-accijnsgoederen lentivirale vector constitutief tot expressie de 4 factoren. Vers verzameld of ontdooide PBMC&#39;s worden uitgebreid voor 9 dagen, zoals beschreven 10,11 in medium bevattende ascorbinezuur, SCF, IGF-1, IL-3 en EPO alvorens getransduceerd met de STEMCCA lentivirus. Cellen worden vervolgens uitgeplaat op MEFs en ESC-achtige kolonies te visualiseren twee weken na infectie. Tenslotte worden geselecteerde klonen uitgebreid en getest op de expressie van markers pluripotentie de SSEA-4, Tra-1-60 en Tra-1-81. Dit protocol is eenvoudige, robuuste en zeer consistent, een betrouwbare methode voor het genereren van menselijke iPSCs uit gemakkelijk toegankelijke 4 ml bloed.

We tonen een eenvoudige en effectieve protocol voor het genereren van menselijke iPSCs van PBMCs met een lentivirale vector. Figuur 1A toont een schematische weergave van het protocol. Het bloed wordt verzameld in een BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube met natriumcitraat en na centrifugeren, mononucleaire cellen kunnen worden verzameld uit het raakvlak tussen de polyester gel en het plasma (buffy coat) (Figuur 1B). De geïsoleerde PBMC worden dan uitgezet in cultuur 9 dagen. <strong...

Hier laten we een eenvoudige en effectieve protocol voor het genereren van menselijke iPSCs 3-4 ml van perifeer bloed met een lentivirale vector herprogrammering. Herprogrammering van direct beschikbare bloedcellen belooft om het gebruik van IPSC technologie te versnellen door het toegankelijk voor een breder onderzoeksgemeenschap.

Generatie van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen uit perifeer bloed Met behulp van de STEMCCA lentivirale vector

Door de ectopische expressie van vier transcriptiefactoren, Oct4, Klf4, Sox2 en cMyc, kunnen menselijke somatische cellen worden omgezet naar een pluripotente staat, ...

Het protocol demonstreert hoe menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen efficiënt kunnen worden gegenereerd uit vier milliliters perifeer bloed. Isoleer en expandeer op dag nul de mononucleaire cellen uit het perifere bloedmonster. Transduceer de primaire cellen met de herprogrammerings-stem-co-vector.Ga op dag negen over tot het uitplaten van de getransduceerde cellen op geïnactiveerde embryonale fibroblasten van muis en kweek deze gedurende ongeveer drie weken. Selecteer de HESC-achtige kolonies voor expansie en karakterisering. Resultaten van immunofluorescentiekleuring voor de expressie van pluripotentiemarkers zoals SSEA4, TRA-1-60 en TRA-1-81.Demonstreer de efficiënte generatie van geïnduceerde humane pluripotente stamcellen. Het gebruik van de stemcel-antivirale vector om humane geïnduceerde pluripotente stamcellen te genereren biedt verschillende voordelen ten opzichte van andere bestaande methoden. Wellicht het meest aantrekkelijk is de algehele eenvoud van de benadering, aangezien deze enkel toegang tot donorweefsel vereist, waarmee ik bedoel gemakkelijk verkrijgbare monsters van perifeer bloed.De belangrijkste kenmerken van deze methode zijn de efficiëntie van de r

generation-human-induced-pluripotent-stem-cells-from-peripheral-blood

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Tonen we het protocol voor het genereren van geïnduceerde pluripotente stamcellen uit menselijke somatische cellen met behulp van lentivirus-gemedieerde levering van de menselijke factoren Oct4, Sox2, NANOG, en Lin28. Pluripotentie werd bevestigd door morfologie en de aanwezigheid van embryonale stamcellen (ES) cel-specifieke merkers.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen van menselijke fibroblasten herprogrammeren met de Stemgent Human TF lentivirus Set

Bron: Rim, Y. A., et al. Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016).Deze video demonstreert de generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) uit mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed met behulp van Sendai-virus-gemedieerde herprogrammering. De virale transcriptiefactoren activeren pluripotentienetwerken en onderdrukken lineage-genen, waardoor een subset van de cellen adhesie-eigenschappen...

Sendai-virus-gemedieerde herprogrammering van menselijke bloedcellen tot geïnduceerde pluripotente stamcellen

Hier beschrijven we een protocol voor het genereren van humane geïnduceerde pluripotente stamcellen uit perifeer bloed met behulp van een episoom gebaseerd herprogrammering strategie en histondeacetylaseremmers.

Efficiënte iPS Cell Generation van Blood behulp episomen en HDAC-remmers

We beschrijven een protocol voor het afleiden van op lentivirus gebaseerde, gereprogrammeerde en gekarakteriseerde factorvrije humane geïnduceerde pluripotente stamcellen en de omzetting hiervan in vermeende klinische-kwaliteitscondities.

Afleiden en karakterisatie van een Transgene gratis humane geïnduceerde pluripotente Stem Cell Line en de omschakeling naar Defined Klinisch-grade Voorwaarden

Een werkwijze werd ontwikkeld om direct voort humane neurale stamcellen van hematopoïetische progenitorcellen verrijkte uit perifere bloedcellen.

Direct Inductie van Human neurale stamcellen uit perifeer bloed hematopoïetische voorlopercellen

Geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) vormen een bron van patiënt-specifieke weefsels voor klinische toepassingen en fundamenteel onderzoek. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol voor humane perifere bloed mononucleaire cellen (PBMNCs) die van bevroren buffy coats in viraal-vrije iPSCs met niet-integrerende episomale plasmiden herprogrammeren.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen van Frozen Buffy Coats behulp van niet-integrerende Episomaal plasmiden

Dit protocol beschrijft de efficiënte inductie van hemogene endotheel en multipotente hematopoietische progenitorcellen van menselijke pluripotente stamcellen via de geforceerde expressie van transcriptiefactoren.

Direct Inductie van Hemogenic Endotheel en Bloed door overexpressie van transcriptiefactoren in menselijke pluripotente stamcellen

Dit protocol beschrijft hoe geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's) kunnen worden gegenereerd uit menselijke perifere T-cellen onder feeder-vrije omstandigheden door gebruik te maken van een combinatie van matrigel en Sendai-virusvectoren die reprogrammeringsfactoren bevatten.

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen uit menselijke perifere T-cellen met behulp van Sendai Virus in Feeder gratis Voorwaarden

We stellen een protocol voor voor het herprogrammeren van perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) naar geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's). Door de getransduceerde bloedcellen te plaatsen op met matrix beklede platen met behulp van centrifugatie, worden iPSC's met succes geïnduceerd uit zwevende cellen. Deze techniek suggereert een eenvoudig en effectief herprogrammeringsprotocol voor cellen zoals PBMC's en CBMC's.

Geïnduceerde pluripotente stamcellen Generation van Blood Cells Met behulp van Sendai Virus en Centrifugeren

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor efficiënte generatie van integratievrije iPSC's uit menselijke volwassen perifere bloedcellen. Met behulp van vier oriP/EBNA-gebaseerde episomale vectoren om de herprogrammeringsfactoren, KLF4, MYC, BCL-XL, of OCT4 en SOX2 tot expressie te brengen, kunnen duizenden iPSC-kolonies worden verkregen uit 1 mL perifeer bloed.

Generatie van Integratie-free geïnduceerde pluripotente stamcellen uit menselijke perifere mononucleaire bloedcellen behulp Episomaal Vectors

Hier presenteren we een protocol om precies te vormen hemogenic endoteel van menselijke pluripotente stamcellen in een feeder-en xeno-vrije voorwaarde. Deze methode zal hebben brede toepassingen in ziektemodel lering en screening voor therapeutische verbindingen.

Hemogenic endoteel differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen in een voeder-en xeno-vrije gedefinieerde voorwaarde

Leer hoe je menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen genereert uit perifeer bloed met behulp van de STEMCCA lentivirale vector. Deze methode vereenvoudigt celherprogrammering voor regeneratieve geneeskunde.

Generatie van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen uit perifeer bloed Met behulp van de STEMCCA lentivirale vector

Meer video's verkennen