Data-acquisitie en analyse in hersenstam evoked respons-Audiometrie bij muizen

Dit protocol biedt gedetailleerde informatie over het plannen, uitvoeren en analyseren van klik- en toonstormreacties bij muizen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het zorgt voor complexe en snelle auditieve profilering van farmacologische en gemuteerde muismodellen. De nieuwe inzichten in alt-er-ed early APP en bijbehorende verandering in de auditieve verwerking bij muizen en ratten kunnen worden vertaald naar de mens.

Daarom is deze methode van centraal belang in de karakterisering en de fenotypering van auditieve, neurologische en ziekten. Deze methode is het belangrijkst voor de identificatie van dysacusis, hypoacusis en ancusis. Bijvoorbeeld in leeftijdsgebonden, door lawaai veroorzaakte metabolische, aangeboren en aspi-met-acury gehoorverlies en bij gehoorstoornissen als gevolg van misvormingen of misvormingen, verwondingen en neoplasma's.

Gebruikers die nieuw zijn op de techniek, moeten speciale aandacht besteden aan een goede elektro-plaatsing en pre-experimentele kalibratie van het systeem. Visuele demonstratie van de methode is van cruciaal belang om anesthesie, ABR-opname, ABR-filterprocessen en geautomatiseerde ABR neur-o-lass-es te illustreren. Begin met het inschakelen van de voorversterker die op de microfoon is aangesloten, ten minste vijf minuten voor de kalibratie, om de equilibratie van het systeem mogelijk te maken.

Zet de oscilloscoop aan. Plaats vervolgens de microfoon, aangesloten op een voorversterker in het geluid dat het kubusvormige geluid verzwakt, om het experimentele murine-oor na te bootsen. Open vervolgens de commercieel beschikbare verwerkings- en acquisitiesoftware en programmeer de stimulusprotocollen voor de klikken en toonuitbarstingen.

Begin met de klikstimulusentiteit om klikdrempels te analyseren en te bepalen. Gevolgd door ABR symmetrie van het linker- en rechteroor. En ABR amplitudes en latencies later.

Gebruik vervolgens dezelfde software om het toonbarstenstimulatieprotocol te verifiëren met behulp van Sig-Gen RZ stimulus ontwerpsoftware. En controleert stimulus instellingen, onder Bio-Sig RZ acquisitie software. Programmeer het juiste frequentiebereik dat moet worden getest, afhankelijk van de wetenschappelijke vraag, en zorg ervoor dat de toe te passen frequentiebereiken voldoen aan de technische mogelijkheden van de luide luidspreker.

Voor gemiddeld stelt u het aantal sequentiële akoestiekstimuli, klikken of toonuitbarstingen bijvoorbeeld, in op 300 keer, met een snelheid van 20 per seconde; een gemiddelde duur van 25 milliseconden en de versterkingsfactor van de voorversterker, 20 keer. Controleer vervolgens de juiste samplingrate voor de aankoop van ABR-gegevens en geef vervolgens het filter door met behulp van een filter met zes poll boterwaarde. Activeer indien nodig het inkepingsfilter.

Start de gekakepkalibratie door het kalibratie:CAL200K-bestand te selecteren;binnen de software om de kalibratieconfiguratiemodus te activeren. En kies perimeters volgens de experimentele omstandigheden. Gebruik het processorsysteem om de kalibratieprocedure uit te voeren.

Zorg ervoor dat de technische specificaties van de microfoon en luide luidspreker, in termen van geluidsdrukniveau of SPL-limieten, frequentiebereik en distributie, harmoniseren. Selecteer vervolgens het vooraf gedefinieerde klikstimulatieprotocol en start u. Voer een enkele klik SPL om te controleren of het spectrum van geluidsstimuli wordt geanalyseerd door online snelle vier-ay transformatie van de oscilloscoop, voldoet aan de eisen.

Selecteer en start het vooraf gedefinieerde toonbarstingstimulatieprotocol, binnen het bereik van één tot 42 kilohertz. Bevestig het frequentiespectrum van de geregistreerde akoestische teststimuli met behulp van een oscilloscoop en online FFT. Voltooi ten slotte de gekastaliratie van de toonuitbarsting door het gemaakte kalibratiebestand te laden op het tone burst stimulusprotocol.

Begin met het plaatsen van de verdoofde muis in een geluidsdempel, bekleed met akoestisch schuim. Voor de registratie van monaurale hersenstam opgeroepen auditieve mogelijkheden, insert sub-dermal roestvrijstalen elektroden op het hoekpunt, axiale van de pin-eye en ventrale-laterale van de rechter of linker pinna afhankelijk van het te meten oor. Plaats aan de andere kant, voor binaurale opnames, de negatieve elektroden aan zowel de rechter- als de linkerpinna.

Plaats de grondelektrode op de heup van het dier. Vóór het inbrengen, vorm een haak vorm aan de punt van de roestvrijstalen elektrode dat sub-dermale fixatie van de elektroden is gegarandeerd. En eenmaal ingevoegd, goed plaats het rostrum van de muis 10 centimeter tegenover de luide luidspreker.

Sluit alle elektroden aan op het hoofdpodium en controleer op hun impedantie. Voer vervolgens impedantiemetingen uit van alle elektroden, voorafgaand aan elke opname, om de juiste positionering en geleidbaarheid van elektrode te verifiëren. Neem ADR's op onder vrije veldomstandigheden met behulp van een enkele luide luidspreker.

Ten slotte voert u ABR-analyse uit via geautomatiseerde drempeldetectie en golflatentieanalyse om positieve pieken en negatieve golven te bepalen. Als eerste stap in het analyseren van algemene hoorprestaties werden klik-opgeroepen ADR's voor verschillende SPL's, tussen nul en 90, onderzocht met behulp van het geautomatiseerde ABR-drempeldetectiesysteem. Mogelijke wijzigingen in ABR-drempelniveaus die werden opgeroepen door verschillende toonuitbarstingfrequenties werden geanalyseerd.

In de voorbeeldige muis lijnen, Cav3.2 plus, min en CAV3.2 minus, minus tentoongesteld verhoogde klik en toon burst gerelateerde gehoordrempels in vergelijking met controles. Ten slotte werden click-evoked ABR amplitude groeifunctie en ABR golfvorm latentie analyse uitgevoerd via wavelet gebaseerde aanpak. Dit laatste geeft inzicht in de mogelijke spacio-temporele invloed van het gen van belang op auditieve informatieverwerking in het binnenoor en hersenstam.

Een goede ABR-elektrodeplaatsing in de meting en systeemkalibratie van Pinna zijn essentieel voor het uitvoeren van deze techniek. De auditieve aanpak die hier wordt gepresenteerd, kan ook worden gebruikt in combinatie met een telemetriesysteem om complexe, mid-latentie en laat-auditieve opgeroepen potentialen te analyseren. Dit helpt bij de karakterisering en bij de fenotypering van auditieve, neurologische en neuroziekten.