$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Ten film demonstruje przygotowanie ultracienkiej warstwy matrycy/analitu do analizy peptydów i białek za pomocą spektrometrii mas z desorpcją laserową wspomaganą matrycą (MALDI-MS) 1,2. Metoda ultracienkowarstwowa polega na wytworzeniu warstwy substratu z kryształów matrycy (kwas alfa-cyjano-4-hydroksycynamonowy) na płytce próbki, która służy jako podłoże do późniejszej krystalizacji mieszaniny matrycy/analitu. Zaletą metody ultracienkiej warstwy w porównaniu z innymi metodami osadzania próbek (np. wysuszonymi kroplami) jest to, że zapewnia ona (i) większą tolerancję na zanieczyszczenia, takie jak sole i detergenty, (ii) lepszą rozdzielczość oraz (iii) wyższą jednorodność przestrzenną. Metoda ta jest szczególnie przydatna do dokładnego oznaczania masy białek. Protokół został początkowo opracowany i zoptymalizowany do analizy białek błonowych i wykorzystany do skutecznej analizy kanałów jonowych, transporterów metabolitów i receptorów, zawierających od 2 do 12 domen transbłonowych 2. Od czasu pierwotnej publikacji okazało się również, że jest równie przydatny do analizy rozpuszczalnych białek. Rzeczywiście, wykorzystaliśmy go do wielu białek o szerokim zakresie właściwości, w tym tych o masach cząsteczkowych sięgających 380 kDa 3. Jest to obecnie nasza metoda z wyboru do analizy masy cząsteczkowej wszystkich białek. Opisana procedura niezmiennie zapewnia wysokiej jakości widma, jest czuła, solidna i łatwa do wdrożenia.