Larwy danio pręgowanego są przystosowane do żywienia się zooplanktonem. Możliwe jest wykorzystanie tej naturalnej cechy w laboratorium, hodując najpierw ryby karmione razem w tym samym systemie z żywymi wrotkami słonowodnymi. Ta strategia "polikultury" sprzyja wysokiemu wzrostowi i przetrwaniu przy minimalnym nakładzie pracy i zakłóceniach dla larw.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Kompletna i zaktualizowana "metoda polikultury wrotka" do hodowli danio pręgowanego po raz pierwszy
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Danio pręgowany (Danio rerio) jest organizmem modelowym o rosnącym znaczeniu w wielu dziedzinach nauki. Jednym z najbardziej wymagających aspektów technicznych hodowli tego gatunku w laboratorium jest hodowla larw pierwszego karmienia do stadium młodocianego o wysokich wskaźnikach wzrostu i przeżywalności. Główne wyzwanie związane z zarządzaniem w tym okresie rozwojowym koncentruje się na dostarczaniu rybom wysoce odżywczych składników paszy niemal w sposób ciągły bez uszczerbku dla jakości wody. Ponieważ larwy danio pręgowanego są dobrze przystosowane do żerowania na małym zooplanktonie w słupie wody, żywe zdobycze, takie jak wrotki brachionidy, artemia i pantofelek, są powszechnie uznawane za paszę z wyboru, przynajmniej do czasu, gdy ryby osiągną stadium młodociane i będą w stanie efektywnie żywić się przetworzoną dietą. Protokół ten opisuje metodę, za pomocą której nowo wyklute larwy danio pręgowanego są hodowane razem z żywymi wrotkami morskimi (Brachionus plicatilis) w tym samym systemie. To podejście oparte na polikulturze zapewnia rybom "na żądanie", bogate w składniki odżywcze źródło żywego pokarmu bez wytwarzania odpadów chemicznych na poziomach, które w przeciwnym razie ograniczałyby wydajność. Co ważne, ponieważ system wykorzystuje zarówno naturalną, wysoką produktywność wrotków, jak i preferencje behawioralne ryb, nakład pracy związany z konserwacją jest niewielki. Poniższy protokół szczegółowo opisuje zaktualizowaną procedurę krok po kroku, która obejmuje produkcję wrotków (skalowalną do dowolnego pożądanego poziomu) do stosowania w polikulturze larw danio pręgowanego i wrotków, która promuje maksymalną wydajność w ciągu pierwszych 5 dni egzogennego karmienia.
Wprowadzenie
Danio rerio) jest wybitnym zwierzęciem laboratoryjnym, wykorzystywanym w coraz większej liczbie dyscyplin naukowych, w tym między innymi w genetyce rozwojowej, toksykologii, zachowaniu, akwakulturze, biologii regeneracyjnej i modelowaniu wielu ludzkich zaburzeń 1-5. Chociaż gatunek ten jest stosunkowo łatwy do utrzymania w laboratorium, istnieje szereg wyzwań związanych z zarządzaniem jego hodowlą6. Najbardziej widocznym z nich jest hodowla larw, szczególnie gdy ryby po raz pierwszy zaczynają żerować po napompowaniu pęcherza gazowego7. W normalnych, kontrolowanych warunkach to zdarzenie rozwojowe występuj....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Kultura wrotka
- Podstawowe elementy systemu hodowli wykorzystującego 100-litrowe naczynie hodowlane
- Zbierz wszystkie składniki do konfiguracji kultury wrotka . Zestaw do hodowli wrotków składa się z naczynia hodowlanego (CV) do hodowli wrotków; podobny zbiornik do konserwacji wrotków paszowych (naczynie do hodowli paszowych, FCV); okrągłodenny słoik wylęgowy (zbiornik paszowy, FR) do przechowywania mieszanki paszowej dla alg (AFM); dopływ powietrza (AS) do napowietrzania CV, FCV i FR; pompa perystaltyczna z zegarem dozującym (PMT) do sterowania dostarczaniem glonów do CV i FCV; oraz filtr cząstek stałych (FPF), który znajduje....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Opisany tutaj system ciągłej hodowli wrotków jest dynamiczny i naturalne jest, że liczebność wrotków ulega niewielkim wahaniom w czasie, jeśli występują różnice w dziennych dawkach pokarmu i tempie zbiorów. Populację wrotków w jednej z aktywnych kultur w placówkach akwakultury w Boston Children's Hospital, utrzymywaną w opisany wyżej sposób, monitorowano przez 30 dni (Rysunek 3). Średnia gęstość hodowli w tym okresie wynosiła 932 rotifers/mL, przy maksymalnej wartości 1,3.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Pomyślne wdrożenie metody polikultury wrotka do karmienia wczesnych larw danio pręgowanego wymaga skutecznych protokołów dla dwóch zadań: ustanowienia i utrzymania systemu ciągłej hodowli wrotków w celu karmienia ryb oraz hodowli larw danio pręgowanego jako pierwsze karmione wraz z wrotkami w tym samym zbiorniku.
Konfiguracja systemu ciągłej produkcji wrotków morskich dla laboratoriów danio pręgowanego, po raz pierwszy opisana przez Lawrence'a i współautorów14 , została zmodyfikowan.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
E.C. Henry jest zatrudniony przez Reed Mariculture, Inc., firmę dostarczającą wrotki, koncentraty alg i inne materiały na rynki akwakultury i ryb.
Podziękowania
Opieka i wykorzystanie ryb wygenerowanych dla reprezentatywnych wyników opisanych w tym protokole zostało przeprowadzone zgodnie z wytycznymi określonymi przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Szpitalu Dziecięcym w Bostonie, protokół # 14-05-2673R.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Rotifer Culture Infrastructure | |||
| 100 L Naczynie hodowlane | Aquaneering | Niestandardowe | naczynie do hodowli z poliwęglanu, ze stożkowym dnem, z zaworem spustowym |
| Zestaw wiader do hodowli o pojemności 5 galonów | Zestaw startowy CCS | Reed Mariculture | Naczynie hodowlane o małej objętości dla małych obiektów |
| Sztywne przezroczyste rurki 1/2" OD, 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Sztywna przezroczysta rurka do dostarczania powietrza |
| Rura siatkowa | Pentair Aquatic Ecosystems | RT444X | Wspornik rurki siatkowej do filtra nici |
| dentystycznej Nić | Trzcina Mariculture | Nić dentystyczna 12" x 42" | Pułap cząstek stałych |
| Perystaltyczna pompa czasowa dozująca, 5 GPD | Grainger | 38M003 | Pompa dozująca z timerem do dozowania paszy do wrotków |
| Perystaltyczna pompa czasowa dozująca, 1-100 ml / h (do hodowli na mniejszą skalę) | Coral Vue | SKU: IC-LQD-DSR | Pompa dozująca z timerem do dozowania paszy do wrotków |
| Rurki silikonowe | Cole Parmer | Rurka do dostarczania glonów do naczynia z wrotkiem | |
| Sztywna przezroczysta rurka "OD", 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Sztywna przezroczysta rurka do dostarczania powietrza do pasty z glonów |
| Sztywna przezroczysta rurka OD, 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Sztywne przezroczyste rurki do dostarczania glonów |
| Wrotki | |||
| Live Rotifers Brachionus plicatilis Typ L | Mariculture trzciny | Typ L 5 milionów | Hodowla wrotków do uruchomienia systemu |
| Rotifer Feed | |||
| Hydroksymetylosulfonian sodu | Mariculture | ClorAm-X® Wanna 1lb | Reduktor amoniaku do mieszanki paszowej dla alg |
| Wodorowęglan sodu | Fisher Scientific | S25533B | bufor pH do mieszanki paszowej dla alg |
| Koncentrat mikroalg | Trzcina Mariculture | Rotigrow Plus® 1 litrowy worek | Zoptymalizowana pod względem odżywczym karma dla wrotka |
| RG Complete | Reed Mariculture | RG Kompletna butelka o pojemności 6 uncji Uniwersalna karma | bazie mikroalg do hodowli na małą skalę |
| Przygotowanie wody | |||
| Reef Crystals Reef Salt | That Fish Place | 198210 | Sól do produkcji wody hodowlanej (UWAGA: ta pozycja jest tylko przykładem; można stosować wszelkie preparaty soli wolne od zanieczyszczeń). |
| Refraktometr | Pentair Aquatic Ecosystems | SR6 | mierzący zasolenie |
| Sprzęt do hodowli wrotków | |||
| Plankton Kolektory o średnicy 12", 53 mikrony | Pentair Aquatic Ecosystems | BBPC20 | Sito siatkowe do zbierania wrotków |
| Podkładki do szorowania | Pentair Ekosystemy wodne | SCR-58 | Podkładka do szorowania do czyszczenia wnętrza naczyń hodowlanych |
| Wiadro ze szczotką | |||
| Grainger Dostawa | 43Y530 | Wiadro z podziałką do mieszania wody hodowlanej | |
| Słoik wylęgowy | Pentair Aquatic Ecosystems | J30 | Przechowywanie mieszanki paszowej z alg |
| Lugol' s Roztwór, rozcieńczony | Fisher Scientific | S99481 | Środek stosowany do unieruchamiania żywych wrotków do liczenia |
| planktonu Sedgewick-Rafter z siatką | Pentair Aquatic Eco-Systems | M415 | Wrotki liczące |
| Miscelleneous | |||
| Sitko do herbaty | Kitchenworks | 971972 | Służy do zbierania zarodków danio pręgowanego po tarle |
Bibliografia
- Ribas, L., Piferrer, F. The zebrafish (Danio rerio) as a model organism, with emphasis on applications for finfish aquaculture research. Reviews in Aquaculture. 6, 209-240 (2014).
- Poss, K. D. Advanc....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
