Kompletna i zaktualizowana "metoda polikultury wrotka" do hodowli danio pręgowanego po raz pierwszy

Podsumowanie

Larwy danio pręgowanego są przystosowane do żywienia się zooplanktonem. Możliwe jest wykorzystanie tej naturalnej cechy w laboratorium, hodując najpierw ryby karmione razem w tym samym systemie z żywymi wrotkami słonowodnymi. Ta strategia "polikultury" sprzyja wysokiemu wzrostowi i przetrwaniu przy minimalnym nakładzie pracy i zakłóceniach dla larw.

Streszczenie

Danio pręgowany (Danio rerio) jest organizmem modelowym o rosnącym znaczeniu w wielu dziedzinach nauki. Jednym z najbardziej wymagających aspektów technicznych hodowli tego gatunku w laboratorium jest hodowla larw pierwszego karmienia do stadium młodocianego o wysokich wskaźnikach wzrostu i przeżywalności. Główne wyzwanie związane z zarządzaniem w tym okresie rozwojowym koncentruje się na dostarczaniu rybom wysoce odżywczych składników paszy niemal w sposób ciągły bez uszczerbku dla jakości wody. Ponieważ larwy danio pręgowanego są dobrze przystosowane do żerowania na małym zooplanktonie w słupie wody, żywe zdobycze, takie jak wrotki brachionidy, artemia i pantofelek, są powszechnie uznawane za paszę z wyboru, przynajmniej do czasu, gdy ryby osiągną stadium młodociane i będą w stanie efektywnie żywić się przetworzoną dietą. Protokół ten opisuje metodę, za pomocą której nowo wyklute larwy danio pręgowanego są hodowane razem z żywymi wrotkami morskimi (Brachionus plicatilis) w tym samym systemie. To podejście oparte na polikulturze zapewnia rybom "na żądanie", bogate w składniki odżywcze źródło żywego pokarmu bez wytwarzania odpadów chemicznych na poziomach, które w przeciwnym razie ograniczałyby wydajność. Co ważne, ponieważ system wykorzystuje zarówno naturalną, wysoką produktywność wrotków, jak i preferencje behawioralne ryb, nakład pracy związany z konserwacją jest niewielki. Poniższy protokół szczegółowo opisuje zaktualizowaną procedurę krok po kroku, która obejmuje produkcję wrotków (skalowalną do dowolnego pożądanego poziomu) do stosowania w polikulturze larw danio pręgowanego i wrotków, która promuje maksymalną wydajność w ciągu pierwszych 5 dni egzogennego karmienia.

Wprowadzenie

Danio rerio) jest wybitnym zwierzęciem laboratoryjnym, wykorzystywanym w coraz większej liczbie dyscyplin naukowych, w tym między innymi w genetyce rozwojowej, toksykologii, zachowaniu, akwakulturze, biologii regeneracyjnej i modelowaniu wielu ludzkich zaburzeń ^1-5. Chociaż gatunek ten jest stosunkowo łatwy do utrzymania w laboratorium, istnieje szereg wyzwań związanych z zarządzaniem jego hodowlą⁶. Najbardziej widocznym z nich jest hodowla larw, szczególnie gdy ryby po raz pierwszy zaczynają żerować po napompowaniu pęcherza gazowego⁷. W normalnych, kontrolowanych warunkach to zdarzenie rozwojowe występuje po ~5 dniach od zapłodnienia (dpf), przy czym następujące po sobie 3-5 dni wzrostu są szczególnie krytyczne⁷. Główną trudnością techniczną na tym etapie jest odpowiednie zaspokojenie potrzeb żywieniowych pierwszych żerujących larw - elementy paszy muszą być odpowiednio zwymiarowane, strawne, atrakcyjne i dostępne niemal w sposób ciągły, bez tworzenia nadmiernych odpadów w zbiornikach hodowlanych. Historycznie rzecz biorąc, osiągano to zazwyczaj poprzez dostarczanie rybom w zbiornikach wielu małych ilości paszy, wraz z rutynową wymianą wody^8,9. Chociaż metody te są do pewnego stopnia skuteczne, są nieefektywne, wymagają dużych nakładów pracy i zwracają tylko zmienne i ograniczone wskaźniki wzrostu i^przeżycia10.

W naturze, larwy danio pręgowanego przypuszczalnie żywią się obfitym małym zooplanktonem obecnym w słupie wody¹¹. Z tego powodu protokoły larwikultury, które obejmują żywe pasze, takie jak pantofelek, wrotki i artemia, są zazwyczaj najbardziej wydajne⁷. W 2010 roku Best i współautorzy wykazali, że możliwe jest hodowanie larw danio pręgowanego w statycznej, słonawej wodzie wraz z wrotkami słonowodnymi przez pierwsze 5 dni egzogennego^żerowania12. To podejście, które wykorzystuje naturalną wysoką produktywność kultur wrotków, aby zapewnić obfitą, wysoce pożywną zdobycz bez zanieczyszczania wody, daje bardzo wysokie wskaźniki wzrostu i przeżywalności larw przy niskim nakładzie pracy^12,13. W ostatnich latach coraz więcej laboratoriów na całym świecie przyjęło różne wersje tego protokołu, a wiele z nich obecnie hoduje wrotki w sposób ciągły, aby wspierać systemy szkółkarskie¹⁴.

W ciągu ostatnich kilku lat, metody zarówno polikultury rotyferów/danio pręgowanych, jak i produkcji wrotków, zostały udoskonalone i ulepszone, aby stały się bardziej ustandaryzowane i łatwo skalowalne. Ten artykuł zawiera instrukcje krok po kroku dotyczące: 1) ciągłej i solidnej produkcji wrotków oraz 2) ustanowienia systemu polikultury wrotka/danio pręgowanego stosowanego do wspierania silnego wzrostu ryb przez pierwsze 5 dni żywienia egzogennego.

Protokół

1. Kultura wrotka

1. Podstawowe elementy systemu hodowli wykorzystującego 100-litrowe naczynie hodowlane
   1. Zbierz wszystkie składniki do konfiguracji kultury wrotka . Zestaw do hodowli wrotków składa się z naczynia hodowlanego (CV) do hodowli wrotków; podobny zbiornik do konserwacji wrotków paszowych (naczynie do hodowli paszowych, FCV); okrągłodenny słoik wylęgowy (zbiornik paszowy, FR) do przechowywania mieszanki paszowej dla alg (AFM); dopływ powietrza (AS) do napowietrzania CV, FCV i FR; pompa perystaltyczna z zegarem dozującym (PMT) do sterowania dostarczaniem glonów do CV i FCV; oraz filtr cząstek stałych (FPF), który znajduje się wewnątrz CV.
      UWAGA: Pełna lista materiałów eksploatacyjnych i komponentów znajduje się w Wykazie materiałów.
2. konfiguracja
   1. Podnieś CV i FCV na stojaku lub stole, aby kultury można było łatwo zebrać przez odpływ wpasowany do pojemnika zbiorczego (rysunek 1). Użyj elastycznego przewodu doprowadzającego powietrze, aby połączyć AS z długością sztywnego przewodu w każdym naczyniu hodowlanym. Upewnij się, że rurka jest wystarczająco długa, aby dostarczyć powietrze do dolnej części CV lub FCV.
   2. Użyj przewodu pneumatycznego o małej przepustowości, aby podłączyć AS do długości sztywnej rurki, która rozciąga się do dolnej części FR, która zawiera AFM. Zamontuj zawór w każdym przewodzie powietrznym, aby regulować przepływ powietrza. Podłącz FR do PMT za pomocą rurki doprowadzającej zasilanie i poprowadź rurkę z PMT do otworu wywierconego z boku CV/FCV, w pobliżu góry. Rysunek 1.
3. startup
   1. Napełnij naczynie hodowlane do 90% dostępnej objętości wodą z odwróconej osmozy (RO). Jeśli RO nie jest dostępna, użyj czystej, odchlorowanej wody miejskiej; Należy jednak przeprowadzić ocenę ryzyka bioasekuracji w celu zapewnienia, że w wodzie źródłowej nie występują żadne organizmy potencjalnie chorobotwórcze. UWAGA: Taka analiza może być wykonana przez dowolne wykwalifikowane laboratorium badające wodę.
   2. Dozuj wodę z naczynia hodowlanego z solą akwariową, aby osiągnąć zasolenie 15 g/l. Ustaw przepływ powietrza do naczynia tak, aby utrzymywało "toczące się wrzenie", a następnie powoli dodawaj odmierzoną ilość soli do naczynia hodowlanego, aż zostanie całkowicie rozpuszczona przez napowietrzanie. Kontynuuj napowietrzanie wody przez >1 godzinę, aby upewnić się, że jest w pełni natleniona.
   3. Przygotuj mieszankę paszową dla alg. Do 3 l czystej, odchlorowanej świeżej (0 ppm) wody dodać 100 g_NaHCO3 i 100 g neutralizatora amoniaku (hydroksymetylosulfonianu sodu). Ten ostatni odczynnik zapewnia dodatkową korzyść w postaci neutralizacji pozostałości chloru z wody z kranu lub pozostałości wybielacza z odkażania sprzętu do hodowli. Bardzo ważne jest, aby upewnić się, że związki te są całkowicie rozpuszczone. Następnie dodać 1 L koncentratu z alg (biomasa sucha masa ~15%). Dodać mieszaninę paszową do FR i przechowywać w temperaturze 4 °C.
   4. Dodać kulturę starterową 5 - 10 milionów wrotków Brachionus plicatilis do CV zawierającej napowietrzoną wodę o zasoleniu 15 g/l. Jeżeli wrotki zostały schłodzone podczas transportu lub przechowywania, powinny być stopniowo (przez 30 minut lub dłużej) przyzwyczajane do temperatury wody w naczyniu hodowlanym (25–27 °C).
   5. Włącz PMT i rozpocznij pompowanie paszy z glonów do naczynia do hodowli wrotków. Korzystając z funkcji timera PMT, ustaw szybkość dostarczania mieszanki paszowej dla glonów tak, aby ~1.6 ml mieszanki paszowej dla glonów było dostarczane na milion wrotków w kulturze dziennie. Karmić małymi porcjami w regularnych odstępach czasu w ciągu 24 godzin; Im częstsze karmienie, tym lepiej.
   6. Skalibruj szybkość tłoczenia pompy, ręcznie włączając PMT na określony czas (np. 1 min) i zbierz glony, które pompuje w tym czasie, do cylindra z podziałką lub zlewki. Na przykład, jeśli PMT dozuje 5 ml glonów w ciągu 1 minuty, to dawka wyniesie 5 ml glonów / min.
   7. Oblicz wymaganą dzienną dawkę karmienia, mnożąc liczbę obecnych wrotków w milionach przez 1,6 ml. Na przykład kultura wrotków o wielkości populacji 100 milionów wrotków wymagałaby ~160 ml paszy dziennie (100 x 1,6 ml).
   8. Ustaw PMT tak, aby dozować całkowite dzienne zapotrzebowanie na paszę w regularnych odstępach czasu przez okres 24 godzin. Na przykład, podawanie całkowitej dziennej ilości paszy wynoszącej 160 ml może być podawane w porcjach raz na 3 godziny przez okres 24 godzin przy użyciu zestawu PMT z pompką dozującą 5 ml/min przez 4 minuty, 8 razy dziennie (5 ml/min x 4 min = 20 ml x 8 karmień = 160 ml).
   9. Pozwól kulturze rosnąć, aż wygeneruje wymaganą populację, zwykle przez 48 - 72 godziny, przed zbiorem. Po 24 godzinach od uruchomienia wlej filtry cząstek stałych z nici dentystycznej do naczynia hodowlanego i rozpocznij normalną konserwację.
4. Konserwacja
   UWAGA: Kultura działa w sposób ciągły i wymaga rutynowej konserwacji, która najlepiej powinna być wykonywana o tej samej porze każdego dnia, w następującej kolejności.
   1. Napełnij FCV do 90% dostępnej objętości czystą, odchlorowaną słodką wodą z dozowanymi solami akwariowymi o stężeniu 10 g/l. Upewnij się, że woda jest dobrze wymieszana i że cała sól jest całkowicie rozpuszczona. Ustaw przepływ powietrza do naczynia tak, aby utrzymywało "toczące się wrzenie". Zmierzyć zasolenie za pomocą refraktometru i upewnić się, że zasolenie wynosi 10 g/l. Kluczowe znaczenie ma osiągnięcie tego celu i nieprzekraczanie go.
   2. Pobrać próbki wrotków w CV: Upewnij się, że kultura jest dobrze wymieszana, a następnie pobrać 3 próbki po 2-3 ml każda, używając pipety do przenoszenia lub autopipetora, z różnych części kultury. Połączyć te próbki w probówce lub fiolce o odpowiedniej wielkości (np. 10 ml).
   3. Przenieść 1 - 2 ml połączonej próbki na szalkę Petriego, tak aby można ją było uwidocznić pod mikroskopem preparacyjnym. Sprawdź jakość kultury (zachowanie wrotków podczas pływania, obecność oderwanych jaj, zanieczyszczające pierwotniaki).
   4. Unieruchomić wrotki w pozostałej połączonej próbce, dodając do próbki 100 μl 50% roztworu jodu Lugolsa. W ciągu kilku sekund po dodaniu płynu Lugola obserwuj, jak wrotki przestają pływać. Teraz łatwo policz wrotki .
      UWAGA: Zamiast płynów Lugola można użyć etanolu, rozcieńczonego wybielacza lub octu. Ocet (2 krople/10 ml) ma tę zaletę, że nie jest niebezpieczny, nie traci siły podczas przechowywania, jak mogą to zrobić roztwory wybielacza i jodu, i nie powoduje skurczów wrotków, dzięki czemu korona rzęsek i "stopa" pozostają przedłużone, a zwierzęta wyglądają bardziej naturalnie.
   5. Upewnij się, że próbka jest dobrze wymieszana (unieruchomione wrotki szybko osiadają), a następnie szybko weź podpróbkę o objętości ~2 ml do plastikowej pipety i dozuj 1 ml do szkiełka do liczenia Sedgewick-Rafter (20 x 50 kwadratów 1 mm) (Rysunek 2). Za pomocą mikroskopu preparacyjnego lub złożonego policz nienaruszone wrotki i całkowitą liczbę jaj przyczepionych do tych wrotków (ryc. 2). Policz tyle powierzchni szkiełka, ile potrzeba, aby policzyć ~100 wrotków. Oblicz liczbę wrotków na ml i zapisz to w arkuszu kalkulacyjnym lub dzienniku.
   6. Zbierz ~30% objętości wrotków w CV: Wyjmij dopływ powietrza i filtr nici dentystycznej, powoli otwórz zawór w dolnej części CV i pozwól, aby woda spłynęła do kolektora planktonu z sitkiem o oczkach 53 μm. Zbierz wodę wypływającą z dna kolektora po przefiltrowaniu do wiadra lub odpływu. Używaj delikatnego lub umiarkowanego przepływu, aby uniknąć uszkodzenia wrotków. Nie pozwól, aby wrotki wyschły na ekranie.
   7. Ze względu na spójność zaleca się ustalanie FCV przy standardowej liczbie wrotków każdego dnia. Dlatego, w oparciu o znaną gęstość wrotka CV i objętość zbioru, należy dostosować całkowitą objętość FCV, aby uzyskać stałą gęstość końcową (np. 1 500 wrotków/ml). Dodać zebrane wrotki do FCV: Delikatnie przenieś wrotki z sita zbiorczego za pomocą butelki do mycia wypełnionej czystą słoną wodą (10 - 15 g/l). Odwróć sitko nad FCV i umyj wrotki w FCV delikatnym strumieniem słonej wody. Uruchom PMT, aby dostarczyć paszę (~1,57 ml na milion wrotków dziennie) do FCV.
   8. Wyszoruj całe wnętrze CV czystą, miękką nylonową szczotką lub padem do szorowania.
   9. Przygotuj nową mieszankę 15 g/l wody, dodając odpowiednią ilość soli do odmierzonej ilości czystej wody RO w wiadrze o pojemności 5 galonów, aby zastąpić objętość wody utraconej podczas zbiorów. Dodaj sól do wody w wiadrze i energicznie mieszaj, aż całkowicie się rozpuści, a następnie dodaj do CV.
   10. Używając sprayu wysokociśnieniowego w zlewie, wypłucz filtr nici dentystycznej, aż będzie wolny od zanieczyszczeń, a następnie włóż go z powrotem do CV.
   11. Dostosuj dawki paszy dla glonów dostarczanych do układu sercowo-naczyniowego, zmieniając czas trwania każdego dawkowania, zgodnie z dzienną liczbą wrotków/ml. Skorzystaj z obliczeń podanych w kroku 1.3.8 powyżej, aby określić odpowiednią ilość paszy, która ma być dostarczona.
   12. Około 24 godziny później powtórz proces. Rozpocząć od zebrania wrotków pozostałych w FCV (które nie były potrzebne w poprzednim dniu) w taki sam sposób, jak opisano powyżej (kroki 1.4.2 - 1.4.10). Zagęścić je w 2 litrach świeżej, czystej odchlorowanej wody (5 g/l soli). Mogą one być przechowywane w temperaturze 4 °C jako zapasowe źródło lub wykorzystywane do karmienia ryb w późniejszych stadiach, poza tym, co opisano w niniejszym protokole.
       UWAGA: Protokół ten pozwala na do 2-3 dni zmniejszonej konserwacji kultur (przy normalnym karmieniu automatycznym), ponieważ wrotki w CV mogą tolerować pominięcie zbiorów bez poważnych konsekwencji.

2. Polikultura

1. Instalacji
   1. Zebrać zarodki danio pręgowanego z tarła, przelewając zarodki z tarła przez sitko do herbaty, a następnie delikatnie spłukując sterylną wodą dla ryb (lub innym niezanieczyszczonym źródłem odpowiednio kondycjonowanego roztworu; np. pożywka dla zarodków, E3 itp.) z butelki do mycia na szalki Petriego.
   2. Inkubować zarodki w temperaturze 25-28 °C na szalkach Petriego w gęstości 40-50 zarodków na szalce przez 5 dni.
   3. Fazę polikultury należy rozpocząć w 5 dniu po zapłodnieniu lub gdy więcej niż 90% wyklutych larw aktywnie pływa w słupie wody.
2. szczepienie
   1. Dodać 500 ml kultury wrotka bezpośrednio z FCV do zbiornika szkółkarskiego o pojemności 3,5 l; włączenie wody do hodowli wrotków zapewnia paszę dla glonów, która utrzymuje zawartość składników odżywczych wrotków podczas polikultury.
   2. Delikatnie wlej larwy z jednej szalki Petriego do zbiornika szkółkarskiego. Upewnij się, że w naczyniu nie pozostały żadne larwy.
   3. Dodać do zbiornika 500 ml czystej, kondycjonowanej wody dla ryb z systemu recyrkulacji lub dedykowanego źródła wody, aby osiągnąć końcową objętość 1 l i końcowe zasolenie 5 g/l.
      UWAGA: To zasolenie ma kluczowe znaczenie, ponieważ zasolenie >7 g/l będzie miało negatywny wpływ, jeśli zasolenie wyniesie 7 g/l, a przeżywalność wrotka będzie miało negatywny wpływ, jeśli zasolenie <2 g/l.
3. Faza polikultury
   UWAGA: Faza polikultury powinna trwać do 4 dni po inokulacji (łącznie 5 dni, co odpowiada 5-9 dniom po zapłodnieniu).
   1. W tym okresie należy obserwować zbiornik polikulturowy co najmniej raz dziennie, aby upewnić się, że wrotki i ryby są obecne i rosną. Upewnij się, że wrotki są widoczne w całym słupie wody. Upewnij się, że ryby są również widoczne w słupie wody, pływając wśród wrotków.
   2. Rozpocznij normalny przepływ wody przez zbiornik. Umieść sitko lub przegrodę nad otworem spustowym, aby upewnić się, że larwy nie są wypłukiwane ze zbiornika.
      UWAGA: Pod koniec tej fazy ryba będzie wystarczająco duża, aby spożywać większe zdobycze, takie jak nauplia artemii lub przetworzone produkty paszowe w zakresie wielkości 75 - 125 μm.
      UWAGA: Dynamikę populacji wrotka w reprezentatywnym zbiorniku polikulturowym zmierzono poprzez pobieranie próbek/liczenie wrotków ze zbiornika w taki sam sposób, jak opisano w krokach 1.4.2 - 1.4.5. Odbywało się to raz dziennie od początku fazy polikultury aż do jej zakończenia.

Wyniki

Opisany tutaj system ciągłej hodowli wrotków jest dynamiczny i normalne jest, że liczba wrotków zmienia się w niewielkim stopniu w czasie, jeśli występują różnice w dziennym karmieniu i tempie zbiorów. Populację wrotków w jednej z aktywnych kultur w obiektach akwakultury w Szpitalu Dziecięcym w Bostonie, utrzymywaną w sposób opisany powyżej, monitorowano przez 30 dni (ryc. 3). Średnia gęstość hodowli w tym okresie wynosiła 932 wrotki/ml, przy czym maksymalnie 1 330 wrotkó...

Dyskusja

Pomyślne wdrożenie metody polikultury wrotka do karmienia wczesnych larw danio pręgowanego wymaga skutecznych protokołów dla dwóch zadań: ustanowienia i utrzymania systemu ciągłej hodowli wrotków w celu karmienia ryb oraz hodowli larw danio pręgowanego jako pierwsze karmione wraz z wrotkami w tym samym zbiorniku.

Konfiguracja systemu ciągłej produkcji wrotków morskich dla laboratoriów danio pręgowanego, po raz pierwszy opisana przez Lawrence'a i współautorów¹⁴ , została zmodyfikowan...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Rotifer Culture Infrastructure
100 L Naczynie hodowlane	Aquaneering	Niestandardowe	naczynie do hodowli z poliwęglanu, ze stożkowym dnem, z zaworem spustowym
Zestaw wiader do hodowli o pojemności 5 galonów	Zestaw startowy CCS	Reed Mariculture	Naczynie hodowlane o małej objętości dla małych obiektów
Sztywne przezroczyste rurki 1/2" OD, 36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Sztywna przezroczysta rurka do dostarczania powietrza
Rura siatkowa	Pentair Aquatic Ecosystems	RT444X	Wspornik rurki siatkowej do filtra nici
dentystycznej Nić	Trzcina Mariculture	Nić dentystyczna 12" x 42"	Pułap cząstek stałych
Perystaltyczna pompa czasowa dozująca, 5 GPD	Grainger	38M003	Pompa dozująca z timerem do dozowania paszy do wrotków
Perystaltyczna pompa czasowa dozująca, 1-100 ml / h (do hodowli na mniejszą skalę)	Coral Vue	SKU: IC-LQD-DSR	Pompa dozująca z timerem do dozowania paszy do wrotków
Rurki silikonowe	Cole Parmer		Rurka do dostarczania glonów do naczynia z wrotkiem
Sztywna przezroczysta rurka "OD", 36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Sztywna przezroczysta rurka do dostarczania powietrza do pasty z glonów
Sztywna przezroczysta rurka OD, 36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Sztywne przezroczyste rurki do dostarczania glonów
Wrotki
Live Rotifers Brachionus plicatilis Typ L	Mariculture trzciny	Typ L 5 milionów	Hodowla wrotków do uruchomienia systemu
Rotifer Feed
Hydroksymetylosulfonian sodu	Mariculture	ClorAm-X® Wanna 1lb	Reduktor amoniaku do mieszanki paszowej dla alg
Wodorowęglan sodu	Fisher Scientific	S25533B	bufor pH do mieszanki paszowej dla alg
Koncentrat mikroalg	Trzcina Mariculture	Rotigrow Plus® 1 litrowy worek	Zoptymalizowana pod względem odżywczym karma dla wrotka
RG Complete	Reed Mariculture	RG Kompletna butelka o pojemności 6 uncji Uniwersalna karma	bazie mikroalg do hodowli na małą skalę
Przygotowanie wody
Reef Crystals Reef Salt	That Fish Place	198210	Sól do produkcji wody hodowlanej (UWAGA: ta pozycja jest tylko przykładem; można stosować wszelkie preparaty soli wolne od zanieczyszczeń).
Refraktometr	Pentair Aquatic Ecosystems	SR6	mierzący zasolenie
Sprzęt do hodowli wrotków
Plankton Kolektory o średnicy 12", 53 mikrony	Pentair Aquatic Ecosystems	BBPC20	Sito siatkowe do zbierania wrotków
Podkładki do szorowania	Pentair Ekosystemy wodne	SCR-58	Podkładka do szorowania do czyszczenia wnętrza naczyń hodowlanych
Wiadro ze szczotką
	Grainger Dostawa	43Y530	Wiadro z podziałką do mieszania wody hodowlanej
Słoik wylęgowy	Pentair Aquatic Ecosystems	J30	Przechowywanie mieszanki paszowej z alg
Lugol' s Roztwór, rozcieńczony	Fisher Scientific	S99481	Środek stosowany do unieruchamiania żywych wrotków do liczenia
planktonu Sedgewick-Rafter z siatką	Pentair Aquatic Eco-Systems	M415	Wrotki liczące
Miscelleneous
Sitko do herbaty	Kitchenworks	971972	Służy do zbierania zarodków danio pręgowanego po tarle