JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:59 min. • August 31st, 2026
Użyj rośliny ziemniaka wyhodowanej in vitro.
Następnie należy użyć rekombinowanych bakterii Agrobacterium, patogenu roślinnego zawierającego DNA transferowe (T-DNA).
T-DNA przenosi pełną długość genomu wirusa X ziemniaka, zmodyfikowaną tak, aby kodować niekodujące RNA służące do sekwestracji specyficznych mikroRNA roślin.
Przeprowadź infiltrację liści bakteriami oraz zadrap powierzchnię łodygi wykałaczką pokrytą bakteriami.
W miejscu inokulacji bakterie wycinają T-DNA i przenoszą go w postaci jednoniciowego DNA do komórek roślinnych.
Wykorzystując mechanizmy gospodarza, T-DNA produkuje wirusowe RNA genomowe, które replikuje się i wykazuje ekspresję niekodujących RNA oraz białek wirusowych.
Nie kodujące RNA wiążą się z docelowymi mikroRNA roślin, zapobiegając ich wiązaniu z docelowymi mRNA i wywołując wady rozwojowe.
W międzyczasie wirusowe genomowe RNA tworzą kompleksy rybonukleoproteinowe, które rozprzestrzeniają się systemicznie poprzez plazmodesmaty, umożliwiając wyciszanie mikroRNA w całej roślinie.
Nieprawidłowości w liściach, w tym ektopowe narośla i liście o kształcie trąbkowatym, wskazują na rolę rozwojową wyciszonych mikroRNA.
Gdy gęstość optyczna przy sześciuset nanometrach osiągn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych