Name: Leiszmanioza skórna w skórze grzbietowej chomików: przydatny model do badań przesiewowych leków przeciwleiszmanialnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Poznaj optymalizację modelu chomika w leiszmaniozie skórnej przez iniekcję śródskórną promastigotów Leishmania. Ta metoda umożliwia skuteczną ocenę leków przy zachowaniu dobrostanu zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badanie to zostało sfinansowane z grantów przyznanych przez Komitet Badawczy Uniwersytetu Antioquia (CODI), Kolumbijski Instytut Rozwoju Nauki i Technologii – COLCIENCIAS oraz Centrum Rozwoju Produktów przeciwko Chorobom Tropikalnym - CIDEPRO.

<ol><li>WHO. Control of the leishmaniasis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Report+of+a+Meeting+of+the+WHO+Expert+Committee+on+the+Control+of+Leishmaniasis+WHO%22">Report of a Meeting of the WHO Expert Committee on the Control of Leishmaniasis WHO</a>. 949, (2010).</li>
<li>Titus, R. G., Marchand, M., Boon, T., Louis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+limiting+dilution+assay+for+quantifying+Leishmania+major+in+tissues+of+infected+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Immunol%22%5BJournal%5D)">A limiting dilution assay for quantifying Leishmania major in tissues of infected mice.</a> Parasite Immunol. 7, 545-555 (1985).</li>
<li>Reynolds, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kodak+Ektachem+dry+layer+technology+for+clinical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Upsala.+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The Kodak Ektachem dry layer technology for clinical chemistry.</a> Upsala. J. Med. Sci. 91, 143-146 (1986).</li>
<li>Handman, E., Ceredig, R., Mitchell, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cutaneous+leishmaniasis%3A+disease+patterns+in+intact+and+nude+mice+of+various+genotypes+and+examination+of+some+differences+between+normal+and+infected+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+J.+Exp.+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Murine cutaneous leishmaniasis: disease patterns in intact and nude mice of various genotypes and examination of some differences between normal and infected macrophages.</a> Australian J. Exp. Biol. Med. Sci. 57, 9-29 (1979).</li>
<li>Hanson, W., Chapman, W., Waits, V., Lovelace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Leishmania+%28Viannia%29+panamensis+lesions+and+relationship+of+numbers+of+amastigotes+to+lesion+area+antimony-treated+and+untreated+hamsters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Development of Leishmania (Viannia) panamensis lesions and relationship of numbers of amastigotes to lesion area antimony-treated and untreated hamsters.</a> J. Parasitol. 77, 780-783 (1991).</li>
<li>Henao, H. H., Osorio, Y., Saravia, N. G., Gómez, A., Travi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+toxicity+of+pentavalentantimonials+%28Glucantime+and+Pentostam%29+in+an+American+cutaneous+leishmaniasis+animal+model%3A+luminometry+application%5BTitle%5D)+AND+%22Biom%C3%A9dica%22%5BJournal%5D)">Efficacy and toxicity of pentavalentantimonials (Glucantime and Pentostam) in an American cutaneous leishmaniasis animal model: luminometry application.</a> Biomédica. 24, 393-402 (2004).</li>
<li>Travi, B. L., Martinez, J. E., Zea, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimonial+treatment+of+hamsters+infected+with+Leishmania+%28Viannia%29+panamensis%3A+assessment+of+parasitological+cure+with+different+therapeutic+schedules%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+R.+Soc.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Antimonial treatment of hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis: assessment of parasitological cure with different therapeutic schedules.</a> Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 87, 567-569 (1993).</li>
<li>Hommel, M., jaffe, C. L., Travi, B., Milon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+for+leishmaniasis+and+for+testing+anti-leishmanial+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Trop.+Med.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Experimental models for leishmaniasis and for testing anti-leishmanial vaccines.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 89, 55-73 (1995).</li>
<li>Travi, B. L., Osorio, Y., Saravia, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+response+promotes+cutaneous+metastasis+in+hamsters+infected+with+Leishmania+%28Viannia%29+panamensis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The inflammatory response promotes cutaneous metastasis in hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis.</a> J. Parasitol. 82, 454-457 (1996).</li>
<li>Travi, B. L., Osorio, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+Albendazole+as+an+alternative+treatment+of+cutaneous+Leishmaniasis+in+the+hamster+model%5BTitle%5D)+AND+%22Memorias+Instituto+Oswaldo%22%5BJournal%5D)">Failure of Albendazole as an alternative treatment of cutaneous Leishmaniasis in the hamster model.</a> Memorias Instituto Oswaldo. 93, 515(1998).</li>
<li>Travi, B. L., Osorio, Y., Melby, P. C., Chandrasekar, B., Arteaga, L., Saravia, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+is+a+major+determinant+of+the+clinical+evolution+and+immune+response+in+hamsters+infected+with+Leishmania+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Gender is a major determinant of the clinical evolution and immune response in hamsters infected with Leishmania spp.</a> Infect Immun. 70, 2288-2296 (2002).</li>
<li>Osorio, Y., Melby, P. C., Pirmez, C., Chandrasekar, B., Guarín, N., Travi, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+cutaneous+infection+influences+the+immunological+response+and+clinical+outcome+of+hamsters+infected+with+Leishmania+panamensis%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Immunol%22%5BJournal%5D)">The site of cutaneous infection influences the immunological response and clinical outcome of hamsters infected with Leishmania panamensis.</a> Parasite Immunol. 25, 139-148 (2003).</li>
<li>Osorio, Y., Bonilla, D. L., Peniche, A. G., Melby, P. C., Travi, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+enhances+the+innate+immune+response+in+experimental+cutaneous+leishmaniasis+through+hormone-modulated+nitric+oxide+production%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pregnancy enhances the innate immune response in experimental cutaneous leishmaniasis through hormone-modulated nitric oxide production.</a> J. Leukoc. Biol. 83, 1413-1422 (2008).</li>
<li>Espitia, C. M., Zhao, W., Saldarriaga, O., Osorio, Y., Harrison, L. M., Cappello, M., Travi, B. L., Melby, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duplex+real-time+reverse+transcriptase+PCR+to+determine+cytokine+mRNA+expression+in+a+hamster+model+of+New+World+cutaneous+leishmaniasis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Duplex real-time reverse transcriptase PCR to determine cytokine mRNA expression in a hamster model of New World cutaneous leishmaniasis.</a> BMC Immunol. 22, 11-31 (2010).</li>
</ol>

Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.

Leiszmanioza skórna jest endemiczna w tropikach i neotropikach. Często określa się ją mianem grupy chorób ze względu na zróżnicowane spektrum objawów klinicznych, które obejmują zarówno niewielkie guzki skórne, jak i rozległe zniszczenia tkanek śluzowych. Większość dostępnych leków jest kosztowna, wymaga długotrwałych schematów leczenia i staje się coraz mniej skuteczna, co sprawia, że konieczne jest odkrycie nowych środków terapeutycznych.
Model mysi jest szeroko stosowany, lecz posiada pewne...

<table><tbody><tr><td>Ketamina </td><td>Odczynnik</td><td>Holliday &amp;#8211;Scott S.A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ksylazyna</td><td>Odczynnik</td><td>Synteza</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Suwmiarka cyfrowa</td><td>Sprzęt</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-077-958</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GS1L-1L</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Odczynnik</td><td>Nova lab</td><td>11273</td><td></td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Odczynnik</td><td>Pechiney Plastic Packaging</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksylina</td><td>Odczynnik</td><td>Nova lab</td><td>10870103</td><td></td></tr><tr><td>Eozyna</td><td></td><td>Nova lab</td><td>10870203</td><td></td></tr><tr><td>chemia sucha Kodak Ektachem</td><td>Sprzęt</td><td>Kodak Ektachem</td><td>DT-60</td><td></td></tr><tr><td>antymonian megluminu</td><td>Odczynnik</td><td>Aventis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopia</td><td>Sprzęt</td><td>Nikon Instruments</td><td>YS2-T</td><td></td></tr></tbody></table>

leiszmanioza skóry na grzbietowej skórze chomików: użyteczny model do przesiewowych badań leków przeciwleiszmanialnych

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Tradycyjnie chomiki są eksperymentalnie inokulowane w okolicy nosa lub na poduszeczkach stóp. Jednak w tych miejscach nie zawsze powstaje owrzodzenie, pomiar wielkości zmiany jest trudną procedurą, a zwierzęta mają trudności z jedzeniem, oddychaniem i poruszaniem się z powodu lokalizacji zmian. W celu optymalizacji modelu chomika w przypadku skórnej leiszmaniozy, młodym dorosłym samcom i samicom chomików syryjskich (Mesocricetus auratus) wstrzyknięto śródskórnie w skórę grzbietu od 1 do 1,5 x 107 promastigot gatunków Leishmania, a następnie oceniano progresję powstałych zmian przez okres do 16 tygodni po zakażeniu. Wybrano chomika syryjskiego, ponieważ jest on uważany za odpowiedni biomodel do oceny leków przeciwko Leishmania, gdyż wykazuje podatność na zakażenie różnymi gatunkami. Zakażenie skórne chomików prowadzi do powstania przewlekłych, lecz kontrolowanych zmian oraz przebiegu klinicznego z objawami podobnymi do tych obserwowanych u ludzi. Dzięki temu możliwe jest określenie zakresu zakażenia poprzez pomiar wielkości zmiany na podstawie obszaru stwardnień i owrzodzeń. Podejście to udowodniło swoją wszechstronność i łatwość prowadzenia podczas inokulacji, monitorowania i charakteryzacji typowych zmian (owrzodzeń), stosowania leczenia różnymi drogami oraz pobierania próbek klinicznych po różnych terapiach. Dzięki zastosowaniu tej metody zachowana zostaje również jakość życia zwierząt w zakresie lokomocji, poszukiwania pokarmu i wody, zabawy oraz aktywności społecznych.

Optymalizacja eksperymentalnego modelu chomika w leiszmaniozie skórnej poprzez wstrzyknięcie promastigot Leishmania do skóry grzbietu. Podejście to jest przydatne podczas inokulacji, obserwacji, charakteryzacji zmian, stosowania leczenia oraz pobierania próbek klinicznych. Zachowane zostają zdolność poruszania się, poszukiwanie pokarmu i wody, zabawa oraz aktywności społeczne.

Leiszmanioza skóry na grzbietowej skórze chomików: użyteczny model do przesiewowych badań leków przeciwleiszmanialnych

Tradycyjnie chomiki są inokulowane eksperymentalnie w obrębie pyska lub poduszeczki stopowej. Jednakże w tych miejscach nie zawsze powstaje owrzodzenie, a pomiar...

W celu optymalizacji modelu chomika w badaniach nad skórną lejszmaniozą, opisano tutaj podejście wykorzystujące wewnątrzskórne inokulacje w obszarze grzbietu. Metoda ta wykazała swoją wszechstronność oraz łatwość prowadzenia procesu inokulacji, monitorowania i charakteryzowania typowych zmian chorobowych, stosowania terapii różnymi drogami podania, pobierania próbek paraklinicznych oraz pozyskiwania danych na temat różnych obiecujących związków, bez powodowania istotnego pogorszenia jakości życia zwierząt w modelu.W odniesieniu do lokomocji, poszukiwania pokarmu i wody, zabawy oraz aktywności społecznej, przy zachowaniu ostrożnych, pewnych i stabilnych ruchów, zwierzę należy unieruchomić za kark, chwytając palcami za skórę, wykorzystując fakt, że chomik posiada jej dużą ilość. Dłoń służy jako powierzchnia podparcia, dzięki której zwierzę czuje się komfortowo. Gdy zwierzę się zrelaksuje, skórę karku i policzków można rozciągnąć palcem wskazującym i kciukiem, a pozostałymi palcami mocno docisnąć skórę policzków do dłoni, tak aby zwierzę było całkowicie unieruchomione.Charakterystyczną cechą u samic jest widoczność linii sutków, która jest wyraźnie zaznaczona od pierwszego tygodnia życia. Inną cechą jest krótka odległość anogenitalna. W przypadku wyznaczania płci samców można zaobserwować worek jądrowy zawierający jądra.Dodatkowo i w konsekwencji zwiększa się odległość między odbytem a skórą w czterech punktach. Zwierzę chwyta się, mocno trzymając za podstawę szyi, a następnie umieszcza w pułapce lub pudełku ustawionym na wadze, która została wcześniej skalibrowana przez kilka sekund. Gdy zwierzę poczuje się swobodnie w tej przestrzeni, dokonuje się odczytu wagi i natychmiast rejestruje go w odpowiednim formacie.Najczęstsze metody identyfikacji chomików to barwienie obszaru skóry kwasem pikrykowym oraz przekłuwanie ucha w celu naniesienia barwnika. W przypadku zastosowania kwasu pikrykowego procedura przebiega następująco: należy uchwycić zwierzę w opisany wcześniej sposób, a następnie za pomocą tamponu nasączonego kwasem pikrykowym nasycić obszar do oznakowania (zazwyczaj przednią lub tylną kończynę lewą lub prawą) ilością preparatu wystarczającą do zapewnienia trwałości znaku aż do zakończenia badania. Przy tej metodzie identyfikacji zaleca się, aby zwierzę znajdowało się pod wpływem sedacji lub znieczulenia.Choć nie jest to ściśle wymagane, miejsce nakładania znacznika w kształcie litery U zostaje wybrane i zdezynfekowane alkoholem. Następnie wybiera się miejsce do perforacji, unikając obszarów z naczyniami krwionośnymi. Po tym czasie ucho jest przebijane przy użyciu dziurkacza do uszu gryzoni; procedura musi być wykonana szybko, ale w sposób pewny i bezpieczny.Przyjmuje się, że w klatce powinny znajdować się dwa do trzech zwierząt. W ciągu roku można wykonać do dwóch otworów. Podczas podawania środka znieczulającego zwierzę należy trzymać zgodnie z wcześniejszymi instrukcjami w sposób zapobiegający ruchom chomika.W pozycji na plecach obszar brzucha, w którym zostanie podany lek, dezynfekuje się za pomocą 70% alkoholu i osusza czystą watą. Stosuje się drogę doszpczewną, lekko przechylając zwierzę w stronę głowy, aby doszło do przemieszczenia organów wewnętrznych. Igłę wprowadza się całkowicie, nieco równolegle do kręgosłupa.Wstępnie wykonuje się aspirację, aby potwierdzić, że żadne organy nie zostały przebite, a następnie stosuje się środek do ogolenia obszaru skóry zwierzęcia, który ma zostać zaszczepiony. Po ustaleniu odpowiedniej pozycji zaznacza się punkt dwa centymetry od nasady ogona. Za pomocą nożyczek usuwa się całą sierść, ostrożnie oczyszczając obszar o powierzchni około dwóch centymetrów kwadratowych w celu uniknięcia obrażeń w komorze bezpieczeństwa biologicznego; następnie, przy znieczulonym chomiku, za pomocą strzykawki o pojemności jednego mililitra podaje się 100 µL znanej ilości hodowli w fazie logarytmicznej.Przygotowano mysz do zakażenia leishmanią. W celu uniknięcia wypadków należy zabezpieczyć igłę na strzykawce. Do oczyszczenia ogolonego obszaru ciała zwierzęcia w jednym kierunku należy użyć waty nasączonej sterylnym roztworem soli fizjologicznej.Następnie, trzymając igłę ściętą stroną do góry, przebija się skórę chomika, dbając o to, aby igła wnikała do skóry właściwej powoli i stopniowo. Wstrzykuje się inokulum tak, aby utworzyć podskórną grudkę, a następnie lekko obracając igłę, wyciąga się ją. Wszystkie zużyte materiały są utylizowane.Zgodnie ze standardami bezpieczeństwa biologicznego w celu monitorowania zmian skórnych wywołanych przez leishmania, zaleca się wstępną unieruchomienie zwierzęcia w pułapce, aby ułatwić proces dokładnego pomiaru zmiany. Przeprowadza się palpację miejsca inokulacji skóry w celu wyznaczenia twardzieli i powstałej owrzodzenia; przy pomocy suwmiarki cyfrowej mierzy się szerokość owrzodzenia, a wynik w milimetrach zapisuje się w formularzu przeznaczonym do monitorowania klinicznego. W podobny sposób mierzy się długość owrzodzenia, która również musi zostać zarejestrowana po inokulacji podskórnej.Czas oczekiwania na uzyskanie typowych zmian porównywalnych z tymi przedstawionymi u ludzi wynosi od czterech do pięciu tygodni. Zwierzę jest unieruchomione w specjalnym stelażu, który umożliwia odsłonięcie obszaru pleców, w którym znajduje się zmiana.Za pomocą pipety zakraplającej związek nanosi się na miejsce urazu, a następnie pozostawia ciecz do wyschnięcia przed umieszczeniem zwierzęcia z powrotem w klatce. Po bezpiecznym unieruchomieniu zwierzęcia, zgodnie z powyższą ilustracją, za pomocą dominującej ręki dezynfekuje się obszar alkoholem i watą, przecierając w jednym kierunku. Następnie tą samą ręką operuje się strzykawką zawierającą lek w maksymalnej objętości 200 µL.Lek wstrzykuje się w mięsień półścięgnisty lub półbłoniasty kończyn tylnych. Jeśli lek musi być podawany przez kilka dni, należy zmieniać kończyny, aby uniknąć dyskomfortu i uszkodzeń u zwierzęcia. Mniej wprawną ręką unieruchamia się zwierzę w sposób opisany wcześniej. Druga ręka służy do operowania zgłębnikiem żołądkowym.14 garaż połączony z strzykawką o pojemności 1 ml, aby wygodnie podać ilość nieprzekraczającą 200 µL. Chomika należy bezpiecznie przymocować za pomocą urządzenia unieruchamiającego, odsłaniając obszar poddawany zabiegowi, który należy oczyścić sterylną watą i roztworem soli fizjologicznej jednym ruchem w jednym kierunku przy użyciu strzykawki o pojemności 1 ml, skierowaną ścięcie igły w dół i objętością nieprzekraczającą 100 µL; wykonuje się pojedyncze podejście podskórne przez wierzchołek zmian i stopniowo podaje lek, pokrywając cały obszar zmiany przed ubojem. Zwierzęta są znieczulane zgodnie z wcześniejszym opisem w celu przeprowadzenia eutanazji.Chomika przenosi się do szczelnej komory akrylowej, która jest podłączona do butli lub sieci z dwutlenkiem węgla. Zawór otwiera się powoli przez kilka minut w celu uśmiercenia chomików, które następnie unieruchamia się na powierzchni sekcyjnej. Do wykonania odlewów skóry i organów wewnętrznych niezbędne jest oświetlenie szklane.probówki typu Falcon o pojemności 15 ml z 10% formaliną dla próbek histopatologicznych; zestaw materiałów obejmuje zestaw do sekcji, nożyczki, pęsetę, skalpel, trzonek oraz ostrza. Ostatecznie obecność leishmania w próbkach pobranych z wycieków skórnych lub blizn, wątroby, śledziony, nerek i węzłów chłonnych popieliczych jest określana bezpośrednio poprzez badanie rozmazów barwionych giemsą oraz badanie histopatologiczne tych tkanek. Próbka z biopsji jest utrwalana w 10% formalinie i zatapiana w parafinie.Przekroje utrwalonych tkanek o grubości 5 µm zabarwiono hematoksyliną i eozyną, a następnie poddano badaniu pod mikroskopem optycznym z użyciem obiektywu imersyjnego 1000x. Celem było zbadanie mikroarchitektury, charakterystyki nacieku komórkowego oraz obecności lub braku pasożytów. Wykonano mikrofotografie i zarejestrowano obrazy cyfrowe.Wszystkie materiały należy zutylizować zgodnie z przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa biologicznego w zakresie utylizacji odpadów biologicznych. Złoty chomik syryjski okazał się szczególnie użyteczny w badaniu zmian skórnych wywołanych przez gatunki leishmania ze Starego i Nowego Świata. Inokulacja promastigotami może wywołać zmiany skórne w okresie od jednego do dwóch miesięcy po inokulacji.U chomiątek po eksperymentalnym zakażeniu przebieg choroby jest przewidywalny i charakteryzuje się rozwojem zmian podobnych do tych obserwowanych u ludzi. Ze względu na przewlekły charakter zmian skórnych w modelu chomikowym możliwe jest monitorowanie interwencji terapeutycznych przez długi czas. Tradycyjnie chomiki są inokulowane eksperymentalnie w obrębie pyska lub poduszki stopy, jednak w tych miejscach zmiany nie zawsze występują. Co więcej, pomiar wielkości zmian jest utrudniony, a chomiki wykazują trudności w jedzeniu, oddychaniu i poruszaniu się.Podsumowując, podejście to wykazuje, że kliniczno-patologiczne cechy cutaneous le meeses wywołanego w skórze grzbietu chomików są niezwykle podobne do choroby u ludzi, lecz wyraźnie różnią się od powszechnie stosowanego modelu morskiego. W związku z tym, eksperymentalna infekcja skóry grzbietu chomików stanowi użyteczny model do walidacji potencjału związków będących kandydatami na leki H manual.

cutaneous-leishmaniasis-dorsal-skin-hamsters-useful-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Skrzelolistnica skóry u chomikowatych: przydatny model do badania leków przeciwleiszmaniowych

System obrazowania in vivo jest wykorzystywany do generowania pomiarów ilościowych zakażenia myszy pierwotniakiem z grupy Trypanosomatidów, Leishmania. Jest to nieinwazyjna i nieletalna metoda wykrywania pasożytów wykazujących ekspresję lucyferazy w wielu tkankach w przebiegu przewlekłej infekcji Leishmania spp.

Obrazowanie in vivo transgenicznych pasożytów Leishmania u żywego gospodarza

Opracowano zoptymalizowany test ratowania i transformacji pasożytów z komórek THP1 zainfekowanych in vitro za pomocą Leishmania donovani w celu przesiewania leków przeciwleiszmaniowych. Test ten obejmuje różnicowanie komórek THP1, infekcję promastigotami, traktowanie badanymi lekami, kontrolowaną lizę zainfekowanych makrofagów, ratowanie amastigot, ich transformację w promastigoty oraz monitorowanie wzrostu i proliferacji promastigot za pomocą testu fluorometrycznego.

Test ratowania i transformacji pasożytów do przesiewania leków przeciwleiszmaniowych przeciwko wewnątrzkomórkowym amastigotom Leishmania donovani w ludzkiej linii komórkowej ostrej białaczki monocytycznej THP1

Ten artykuł opisuje szczegółową metodę dynamicznego pomiaru i kwantyfikacji prędkości przepływu krwi w poszczególnych naczyniach krwionośnych układu krwionośnego wątroby myszy przy użyciu obrazowania pod mikroskopem przyżyciowym w połączeniu ze specyficzną metodologią pozyskiwania i analizy obrazów.

Obrazowanie pod mikroskopem przyżyciowym wątroby po zakażeniu Leishmania: ocena hemodynamiki wątroby

Tutaj prezentujemy skompilowany protokół do oceny infekcji skórnej myszy Leishmania amazonensis. Jest to wiarygodna metoda badania zjadliwości pasożytów, pozwalająca na systemowy wgląd w reakcję kręgowców gospodarza na infekcję.

Zakażenie in vivo Leishmania amazonensis w celu oceny zjadliwości pasożyta u myszy

Tutaj opisujemy metodologię używaną do generowania szczepów L. panamensis i L. donovani wyrażających gen eGFP jako stabilny zintegrowany transgen za pomocą systemu pLEXSY. Transfekowane pasożyty klonowano poprzez ograniczenie rozcieńczenia, a klony o najwyższej intensywności fluorescencji u obu gatunków wybrano do dalszego wykorzystania w testach przesiewowych leków.

Rozwój szczepów gatunków Leishmania z konstytutywną ekspresją eGFP

Tutaj prezentujemy podłużną ocenę chomików złocistych zakażonych dootrzewnowo (IP) lub dodziąsłowy (IG) L. infantum-Luc za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego i PCR. Chomiki oceniano 1 dzień po zakażeniu (1 dpi), 1 tydzień po zakażeniu (8 dpi) i 3 tygodnie po zakażeniu (22 dpi) i usypano w 50. dpi i 8 miesięcy po zakażeniu.

In vivo (in vivo) Obrazowanie chomików zakażonych Leishmania infantum przez inokulację dziąseł aksenicznych amastigotów eksprymujących lucyferazy

Przeszczepianie szpiku kostnego u myszy jest powszechnie stosowaną techniką badania mechanizmów immunologicznych sterujących chorobą przeszczep przeciw gospodarzowi u ludzi. Możliwość monitorowania wzorców migracji limfocytów T in vivo pozwala na szczegółową analizę rozwoju i utrwalania odpowiedzi limfocytów T podczas choroby przeszczep przeciw gospodarzowi.

Indukcja choroby przeszczep przeciw gospodarzowi i monitorowanie limfocytów T in vivo z wykorzystaniem modelu mysiego dopasowanego pod kątem MHC

Opracowano nową metodę ewolucji kierowanej, specyficzną dla dziedziny inżynierii termostabilności, a następnie zwalidowano ją dla enzymów bakteriolitycznych. Po zaledwie jednej rundzie mutagenezy losowej ewoluowany enzym bakteriolityczny, PlyC 29C3, wykazał ponad dwukrotnie wyższą aktywność resztkową w porównaniu z białkiem typu dzikiego po inkubacji w podwyższonej temperaturze.

Nowa metoda przesiewowa dla ewolucji sterowanej termostabilnych enzymów bakterio();tycznych

Wyciszanie genów wywołane przez wirusa jest użytecznym narzędziem do identyfikacji genów zaangażowanych w odporność roślin na brak gospodarza. Pokazujemy zastosowanie patogenów bakteryjnych eksprymujących GFPuv w identyfikacji roślin wyciszonych genowo podatnych na patogeny niebędące gospodarzem. Takie podejście jest łatwe, szybkie i ułatwia badania przesiewowe na dużą skalę, a podobny protokół można zastosować do badania różnych innych interakcji roślina-mikroorganizm.

Badania przesiewowe genetyki za pośrednictwem VIGS w celu identyfikacji genów zaangażowanych w oporność na zwierzęta inne niż gospodarz

Ten protokół opisuje wizualizację rozwoju biofilmu po ekspozycji na czynniki gospodarza za pomocą modelu komory szkiełkowej. Model ten pozwala na bezpośrednią wizualizację rozwoju biofilmu, a także analizę parametrów biofilmu za pomocą programów komputerowych.

Wizualizacja wpływu plwociny na rozwój biofilmu za pomocą komorowego modelu szkła nakrywkowego

Poznaj optymalizację modelu chomika w leiszmaniozie skórnej przez iniekcję śródskórną promastigotów Leishmania. Ta metoda umożliwia skuteczną ocenę leków przy zachowaniu dobrostanu zwierząt.

Leiszmanioza skóry na grzbietowej skórze chomików: użyteczny model do przesiewowych badań leków przeciwleiszmanialnych

Przeglądaj więcej filmów