Szczurzy model przerwania bariery krew-mózg w celu umożliwienia ukierunkowanych terapii nerwowo-naczyniowych

Ogólnym celem tej procedury jest przerwanie bariery krew-mózg. Osiąga się to poprzez uprzednie umieszczenie zwierzęcia w znieczuleniu dożylnym z dotchawiczymi drogami oddechowymi. Następnie odsłania się rozwidlenie tętnicy szyjnej wspólnej.

Następnie wprowadza się cewnik do tętnicy szyjnej zewnętrznej. Na koniec podaje się mannitol. Ostatecznie można uzyskać wyniki, które wskazują na przerwanie bariery krew-mózg poprzez wynaczynienie niebieskiego barwnika Evana.

Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami terapii dotętniczej jest to, że umożliwia ona przedostawanie się leków do mózgu, które zwykle nie przekraczają bariery krew-mózg w warunkach fizjologicznych. Ma to implikacje w dziedzinie neurobiologii, ponieważ pozwala nam testować nowe terapie, które mają słabą zdolność do przekraczania bariery krew-mózg. Implikacje tej techniki rozciągają się na neuroonkologię, ponieważ wiele środków chemioterapeutycznych nie przekracza bariery krew-mózg.

Cóż, chociaż ta metoda daje nam wgląd w nowe onkologie, może również dostarczyć nam informacji na temat innych zaburzeń neurologicznych leczonych lekami o słabej przepuszczalności bariery krew-mózg. Mamy nadzieję, że wizualna demonstracja tej metody pozwoli naukowcom i osobom zaznajomionym z chirurgią zwierząt na zastosowanie tej techniki w swoich laboratoriach. Na początek przygotuj roztwór 25% mannitolu i sprawdź, czy nie ma kryształów.

Jeśli kryształy są obecne, rozpuść je, umieszczając fiolkę w łaźni wodnej o temperaturze 80 stopni Celsjusza i wymieszaj. Okresowo rejestruj masę zwierzęcia i przygotuj dwie strzykawki o pojemności 12 ml propofolu, które mają być dostarczane z szybkością 0,1 mililitra na minutę. Po znieczuleniu zwierzęcia w komorze indukcyjnej należy położyć je na jednorazowym ręczniku i ogolić jego szyję oraz wewnętrzną stronę ud.

Umieść zwierzę z powrotem w komorze indukcyjnej na trzy minuty. Aby przygotować się do intubacji w celu intubacji szczura, zacznij od przygotowania rurki dotchawiczej z cewnikiem dożylnym. Rurka musi być wystarczająco duża, aby umożliwić odpowiedni przepływ powietrza, ale wystarczająco mała, aby zmieściła się w tchawicy bez powodowania uszkodzeń.

Aby zrobić rysik, wyciągnij igłę z plastikowego cewnika i ostrożnie złamij igłę. Około jednego centymetra od ostrej końcówki włóż igłę z powrotem do cewnika. Następnie zawieś szczura za zęby na ukośnej powierzchni, skieruj światło bezpośrednio na szyję zwierzęcia ustawioną między uszami.

Następnie włóż małą szpatułkę do jamy ustnej gardła. Około trzech centymetrów. Podnieś do góry, delikatnie wyciągając język z ust.

Wyobraź sobie otwarcie tchawicy jako mały otwór, który otwiera się i zamyka. Przy każdym oddechu delikatnie wkładaj cewnik do otworu, uważając, aby nie wcisnąć go na siłę w chrząstkę wrażliwej tchawicy. Ustaw respirator na jeden litr na minutę i 60 uderzeń na minutę, a następnie fluor na 2%Następnie podłącz cewnik do respiratora i przyklej rurkę do powierzchni operacyjnej.

Sprawdź, czy zwierzę jest znieczulone, wykonując szczypanie palca u nogi. Zabezpiecz trasę, przyklejając wszystkie cztery kończyny w ogonie do powierzchni operacyjnej. Trzykrotnie wyszoruj ogoloną szyję i pachwiny mydłem z chlorheksydyną.

Następnie wyszoruj chlorheksydyną. Spłucz trzy razy. Podłączyć strzykawkę z propofolem do zestawu przedłużającego dożylnie i zamontować strzykawkę na pompie infuzyjnej.

Następnie za pomocą skalpela przeciąć skórę ogolonego uda bez przecinania mięśnia. Następnie użyj kleszczy, aby otworzyć nacięcie i zlokalizować żyłę udową i odciągnąć tkankę nad tętnicą, aby odsłonić naczynie. Wprowadzić do żyły weterynaryjny cewnik dożylny z mono wyrzutem 26 G.

Gdy igła przebije ścianę żyły, przeciskanie stanie się łatwiejsze. Wycofaj igłę i wepchnij cewnik do naczynia na trzy do pięciu minut. Po rozpoczęciu infuzji propofolu należy zmienić gaz znieczulający na mieszaninę 50%O2 i 50%N dwa O i odciąć dopływ fluoru.

Aby odsłonić rozwidlenie tętnicy szyjnej wspólnej, zacznij od użycia ostrza skalpela, aby wykonać nacięcie w linii środkowej na szyi. Przetnij powierzchowną fasadę wzdłuż linii środkowej, aby dotrzeć do mięśnia gnykowego mostka nad tchawicą. Odsuń tkankę na bok, aby uwidocznić grupę trzech mięśni, gnyk mostka, di żołądka i wyrostek sutkowaty mostka, które utworzyły trójkąt szyjny szczura za pomocą kleszczy lub nożyczek.

Oddziel powięź między mięśniami trójkąta szyjnego, aby odsłonić tętnicę szyjną. Użyj kauteryzacji dwubiegunowej, aby podzielić drobne naczynia wraz z gazą i wacikami Aby zatamować krwawienie, użyj retraktorów, aby rozsunąć mięśnie kleszczami. Odsuń tkankę od tętnicy szyjnej i znajdź rozwidlenie.

Odsłoń tętnicę potyliczną tuż dystalnie do rozwidlenia. Kauteryzuj go między kleszczami i użyj elektrokoagulacji, aby oddzielić go kleszczami. Całkowicie odsłonić rozwidlenie tętnicy szyjnej i jak największą część tętnicy szyjnej zewnętrznej lub ECA.

Odsłonić tętnicę tarczycy górną odgałęziającą się od ECA dystalnie do tętnicy potylicznej. Kauteryzuj go między kleszczami i oddziel, aby cewnikować ECA. Umieść pod nim dwie długości po cztery oh jedwab.

Użyj hemostatu i chwyć jedną długość szwu, a drugi szew coly należy coally do tyłu. Zawiąż go węzłem chirurga jak najdalej od czaszki, dystalnie do rozwidlenia i proksymalnie do stałej ligatury. Luźno zawiąż węzeł innego chirurga, aby rozluźnić tętnicę.

Przepłukać go 1% lidokainą, napełnić cewnik heparynizowaną solą fizjologiczną. Następnie umieść tymczasowy klips do naczynia pod kątem jak najbliżej rozwidlenia. Następnie przesuń luźny węzeł w kierunku klipsa za pomocą mikronożyczek.

Wykonaj małe nacięcie w ECA tuż obok ligatury. Jeśli klips i ligatura są zabezpieczone, nie powinno być krwawienia za pomocą kleszczy. Aby kontrolować ściany ECA, wprowadź skośny koniec cewnika do naczynia z luźnym węzłem chirurgicznym

Zabezpiecz cewnik. Zawiąż tętnicę wokół cewnika, a następnie zdejmij klips i użyj bawełnianego wacika, aby oczyścić obszar. Przesunąć cewnik o około jeden milimetr dystalnie do rozwidlenia.

Użyj kleszczy, aby przytrzymać tętnicę proksymalnie do węzła, aby upewnić się, że naczynie jest unieruchomione. Do podawania mannitolu. Napełnij ośmiocalowy zestaw przedłużaczy dożylnych i sześciomililitrową strzykawkę mannitolem bez tworzenia pęcherzyków powietrza.

Przechowuj go w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby uwidocznić przerwanie bariery krew-mózg, lub BBBD podaj dwa miligramy na kilogram 2% Evans Blue przez nowe miejsce dożylne na nodze przeciwległe do wlewu propofolu. Przymocuj zestaw przedłużający do filtra o grubości pięciu mikronów i napełnij go minolem, aby usunąć pęcherzyki powietrza. Następnie przymocuj go do kurka odcinającego, nie tworząc pęcherzyków.

Podawaj mannitol w ilości 0,09 mililitra na sekundę Przez 25 sekund obserwuj, czy mannitol osiągnął równowagę z przepływem w tętnicy szyjnej wspólnej w punkcie bliskim tętnicy szyjnej wewnętrznej, powinno się wydawać, że pulsuje wraz z tętnem szczura. Upewnij się, że mannitol nie przepływa w kierunku serca, co oznacza, że przepływ przekroczył ciśnienie krwi szczura i może spowodować poważne komplikacje. Przerwanie bariery krew-mózg po jednej stronie mózgu pozwala niebieskiemu Evanowi dostać się i zabarwić zakłóconą półkulę na niebiesko, podczas gdy półkula niezakłócająca pozostaje niezmieniona.

Pokazany tutaj jest przykład mózgu bez zaburzenia bariery krew-mózg lub BBBD, a tutaj jest przykład mózgu zabarwionego na niebiesko po osmotycznym BBBD, zauważ, że prawa półkula jest zabarwiona i że trochę niebieskiego koloru dostaje się do lewej półkuli w pobliżu przyśrodkowej szczeliny podłużnej w wyniku mieszania przepływu krwi w okręgu Willisa. Technika ta toruje naukowcom drogę do zbadania terapii, które nie przekraczają bariery krew-mózg w modelu szczurzym. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś być w stanie zakłócić niewyraźną barierę mózgową poprzez cewnikowanie tętnicy szyjnej i wlanie roztworu manitolu bezpośrednio do mózgu.