13.13
Bacterial transformation is the process by which bacteria take up exogenous DNA from the environment.
Some bacteria can naturally take up this exogenous DNA, while others are chemically induced in the lab to make their cell membrane permeable to DNA. This step is part of DNA cloning, which helps scientists study gene sequences, their functions, and the proteins they encode.
In the lab, the DNA sequence of interest is inserted into a circular piece of DNA called a plasmid. This DNA of interest is the exogenous DNA that will be introduced into the bacteria.
The plasmid usually also carries an antibiotic resistance gene, which helps scientists to identify bacteria that have taken up the plasmid.
A large number of copies of the plasmid are added to the liquid medium containing the competent bacteria, followed by a brief heat shock. The sudden temperature change from ice to 42°C increases membrane permeability, allowing plasmid DNA to enter the cell.
The bacteria are then grown on selective media containing a specific antibiotic, which allows only resistant cells that have taken up the cloned plasmid to survive and grow.
Only transformed cells multiply to form colonies, which are visible spots of bacterial growth derived from a single cell.
Em 1928, o bacteriologista Frederick Griffith trabalhou em uma vacina para a pneumonia, que é causada pela bactéria Streptococcus pneumoniae. Griffith estudou duas estirpes de pneumonia em murganhos: uma patogénica e outra não patogénica. Apenas a estirpe patogénica matou murganhos hospedeiros.
Griffith fez uma descoberta inesperada quando matou a estirpe patogénica e misturou os seus restos mortais com a estirpe viva, não patogénica. Não só a mistura matou murganhos hospedeiros, mas também continha bactérias patogénica vivas que produziam descendentes patogénicos. Griffith concluiu que a estirpe não patogénica recebeu algo da estirpe patogénica morta que a transformou na estirpe patogénica; ele chamou a isso de princípio transformador.
Na altura dos estudos de Griffith, houve um debate aceso em torno da identidade do material genético. Muitas evidências iniciais implicavam as proteínas como moléculas hereditárias. As experiências de Griffith sobre transformação bacteriana forneceram alguns dos primeiros dados demonstrando que o DNA é o material genético.
As bactérias incorporam DNA externo através da transformação. A transformação ocorre naturalmente, mas também é induzida em laboratórios—frequentemente para clonar DNA. Para clonar um gene específico, os cientistas podem inserir o gene em um plasmídeo, uma molécula de DNA circular que se pode replicar independentemente. O plasmídeo contém frequentemente um gene de resistência a antibióticos. As bactérias incorporam o plasmídeo através da transformação. Os cientistas expõem então as bactérias a antibióticos. As colónias bacterianas sobreviventes têm de conter o plasmídeo porque o plasmídeo contém um gene de resistência a antibióticos. A análise de DNA pode confirmar a presença do gene no plasmídeo. Colónias bacterianas com o gene desejado expandem e podem ser usadas para produzir mais plasmídeos ou proteínas.
Por que é que as bactérias aceitam DNA estranho? Ao contrário de organismos sexualmente reprodutores, as bactérias essencialmente clonam-se. Este método reprodutivo, chamado fissão binária, oferece poucas oportunidades de variação genética. Embora as mutações introduzam alguma diversidade, muitas mutações são prejudiciais. Compartilhar genes através da transformação, bem como a conjugação e a transdução, permite que os procariotas evoluam.
Bacterial transformation is the process by which bacteria take up exogenous DNA from the environment.
Some bacteria can naturally take up this exogenous DNA, while others are chemically induced in the lab to make their cell membrane permeable to DNA. This step is part of DNA cloning, which helps scientists study gene sequences, their functions, and the proteins they encode.
In the lab, the DNA sequence of interest is inserted into a circular piece of DNA called a plasmid. This DNA of interest is the exogenous DNA that will be introduced into the bacteria.
The plasmid usually also carries an antibiotic resistance gene, which helps scientists to identify bacteria that have taken up the plasmid.
A large number of copies of the plasmid are added to the liquid medium containing the competent bacteria, followed by a brief heat shock. The sudden temperature change from ice to 42°C increases membrane permeability, allowing plasmid DNA to enter the cell.
The bacteria are then grown on selective media containing a specific antibiotic, which allows only resistant cells that have taken up the cloned plasmid to survive and grow.
Only transformed cells multiply to form colonies, which are visible spots of bacterial growth derived from a single cell.
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