A córnea é o único que carece de tecidos vasculares. No entanto, o crescimento dos vasos sanguíneos e robusta sobrevivência pode ser induzida na córnea de potentes fatores angiogênicos. Portanto, a córnea pode fornecer-nos com uma ferramenta valiosa para estudos angiogênico. Este protocolo demonstra como executar o modelo do rato de ensaio de córnea bolso e como avaliar a angiogênese induzida por fatores angiogênicos usando este modelo.
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Artigo de método
Um modelo do rato do Ensaio de bolso Córnea para o Estudo da angiogênese
Neste artigo
Resumo
Resumo
A córnea normal é claro de tecidos vasculares. No entanto, os vasos sanguíneos podem ser induzidos a crescer e sobreviver na córnea quando potentes fatores angiogênicos são administrados 1. Esta singularidade fez com que o ensaio de bolso córnea um dos modelos mais utilizados para estudos de angiogênese. A córnea compõe de várias camadas de células. Portanto, é possível incorporar um pellet contendo o fator angiogênico de interesse na córnea para investigar seu efeito angiogênico 2,3. Aqui, fornecemos uma demonstração passo a passo de como (I) produzir o fator angiogênico contendo pellet (II) incorporar a pelota para a córnea (III) analisar a angiogênese induzida pelo fator angiogênico de interesse. Uma vez que o fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF) é conhecido como um dos fatores mais potente angiogênico 4, é usado aqui para induzir angiogênese na córnea.
Protocolo
Todos os equipamentos e reagentes utilizados são estéreis. O protocolo foi aprovado pelo Animal Care e Use Committee (ACUC) no NEI / NIH (animal protocolo de estudo NEI-553), e foi realizada de acordo com as diretrizes do NIH e regulamentos.
1. Produzir o fator angiogênico contendo pellets
Nesta parte, os pellets contendo o fator angiogênico de interesse estão preparados.
- Fazer 10% (w / v) solução de sucralfato com PBS. Loja sob temperatura ambiente.
- Faça 12% (w / v) de poli-HEMA com etanol absoluto. Loja sob temperatura ambiente.
- Fazer 1 mg / mL solução bFGF. Loja em -80 ° C.
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Discussão
O mouse córnea modelo de ensaio de bolso foi descrita pela primeira vez em 1979 por Muthukkaruppan VR e Auerbach R 6. Protocolos detalhados foram publicados por diferentes laboratórios 2,3,7,8. Nosso laboratório tem modificado e utilizado este método em nossos estudos por muitos anos 4. O mouse ensaio bolso córnea é um modelo relativamente simples, com grande reprodutibilidade. Outra vantagem deste modelo é que desde que a córnea não tem vasos sanguíneos, normalmente, não há quantidade m.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Nossa pesquisa é apoiada pelo Programa de Pesquisa Intramural do, NIH National Eye Institute.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Equipamento | Companhia | Número de catálogo | |
| Microscópio de dissecação | Precision Instruments mundo | PZMIV-BS | |
| Von Graefe faca de catarata (lâmina 1.5x25mm, flat) | Ambler Cirúrgica | 3401E | |
| Dumont # 5 fórceps | Multa Ferramentas Ciência | 11252-50 | |
| Lâmpada de fenda | Zeiss | 30 SL-M |
Equipamentos tabela 1.
| Reagente | Companhia | Catalogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| bFGF (fator de crescimento básico de fibroblastos) | PEPROTECH INC | 100-18B | |
| Sucralfato (complexo Sacarose octasulfate alumínio) | Sigma | S0652 | 10% em PBS |
| poly-HEMA (Poli (2-hidroxietil metacrilato)) | Sigma | P3932 | 12% em etanol |
Tabela 2. Reagentes e materiais
Referências
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J.
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Reimpressões e permissões
