Summary
Vi beskriver modeller for moderat og svær iskæmireperfusion-induceret nyreskade, hvor musene undergår unilateral renal stilken fastspænding efterfulgt af samtidige eller forsinket kontralateral nefrektomi, hhv. Disse modeller konsekvent giver anledning til renal dysfunktion og efter skaden fibrose, men skaden sværhedsgrad og overlevelse er afhængige af muse baggrund, alder og kirurgisk udstyr.
Abstract
Iskæmireperfusion induceret akut nyreskade (IR-AKI) er vidt udbredt som en model for AKI i mus, men resultaterne er ofte ganske variable med høje, ofte urapporteret dødelighed, der kan forvirre analyser. Bilateral renal stilken fastspænding er almindeligt anvendt til at inducere IR-AKI, men forskellene mellem effektiv standsnings pres og / eller nyre reaktioner på iskæmi mellem nyrerne ofte føre til mere varierende resultater. Desuden er kortere klemme gange kendt for at inducere mere variabel rørformet skade, og mens mus gennemgår bilateral skade med længere clamp tider udvikle mere sammenhængende rørformet skade, de ofte dør inden for de første 3 dage efter skade som følge af svær nyreinsufficiens. For at forbedre efter skaden overlevelse og få mere ensartede og forudsigelige resultater, har vi udviklet to modeller af ensidig iskæmireperfusion skade efterfulgt af kontralateral nefrektomi. Begge operationer udføres ved hjælp af en dorsal fremgangsmåde, reducerer kirurgisk stress som følge from ventrale laparotomi, der almindeligvis anvendes til muse IR-AKI operationer. Til induktion af moderat skade BALB / c-mus gennemgå ensidig fastspænding af nyrernes stilken for 26 min og også gennemgå samtidige kontralateral nefrektomi. Med denne fremgangsmåde, 50-60% af musene udvikler moderat AKI 24 timer efter skaden, men 90-100% af musene overlever. At inducere mere alvorlig AKI, BALB / c-mus renal stilken fastspænding i 30 minutter efterfulgt af kontralateral nefrektomi 8 dage efter skaden. Dette tillader funktionel vurdering af renal recovery efter skade med 90-100% overlevelse. Tidlig efter skaden rørformet skader samt efter skaden fibrose er meget konsekvent at bruge denne model.
Introduction
En række eksperimentelle modeller af akut nyreskade (AKI) er blevet udviklet til at matche mangfoldigheden og kompleksiteten af den menneskelige tilstand (se reference for en nyere, omfattende gennemgang 1). Hver af disse modeller har sine egne styrker og svagheder, og mens hver efterligner de tilsvarende menneskelige forhold med varierede effektivitetsgevinster ingen præcist modellere patofysiologi deres menneskelige modstykker. Iskæmireperfusion (IR)-induceret AKI er udviklet som en model for akut iskæmi-induceret nyreskade hos gnavere. Mens sværhedsgrad af renal tubulær skade ses i denne model sjældent observeret hos patienter med nyre-hypoperfusion skader 2, på trods af sine begrænsninger, og især på grund af den relativt reproducerbar karakter af denne model, har dens omfattende brug forudsat, og det forventes, vil fortsætte at give vigtige indsigter i mange af de fælles grundlæggende mekanismer i AKI, reparation og terapi 3.. IR operation kræver familiarity med musen nyre anatomi, som vi har vist i en forenklet form i figur 1.. Renal iskæmireperfusion (IR) skade kirurgi kan udføres via ventrale (laparotomi), eller dorsal (retroperitoneal) tilgange. Vi bruger en dorsal tilgang, da det er mindre traumatisk, så hurtigere genopretning gange og forbedret overlevelse (især når først at lære af proceduren). Renal IR skaden kan udføres ensidigt eller bilateralt. Men forskellene mellem de effektive clamp tryk (hvilket kan skyldes indskudt perihilar fedt mellem klemmekæberne) og / eller forskelle i den renale reaktioner på iskæmi mellem siderne fører til mere varierende resultater. Selvom dette ikke er et uoverstigeligt problem, kan det øge variabilitet mellem eksperimenter, hvilket er et stort problem for denne model. Ensidig IR kan udføres med kontra-lateral nefrektomi. Dette er vores foretrukne metode, da det reducerer variabiliteten i fastspænding mellem pedicles, og samtidig enllows én at evaluere nyrefunktionen, som er upåvirket med ensidig IR alene. Der har været diskussion om, hvad der er den mest praktiske vs optimale metode til at vurdere nyrefunktionen hos mus. Blodureanitrogen (BUN) giver et mål for nyrefunktionen og er et nyttigt "første kig" markør i nogle modeller af AKI, herunder IR skade. Dog kan BUN niveauer blive påvirket af volumen status af musene, der kan blive berørt, især efter ventral tilgang IR skade, når forsinkede opsving reducerer indtagelse af væske for en række dage efter kirurgi. Serumkreatinin er mindre påvirket af hydreringsstatus men er tydeligt påvirket af muskelmasse. En af vanskelighederne med måling af serumkreatinin har været problemer med detektering af ikke-kreatinin chromogener i museserum med pikrinsyre baserede teknikker. Som et alternativ, har en række centre udviklet en HPLC-metode til at kvantificere musen kreatinin, der ikke påvirkes af denne artefakt 4.. Men UNLIke BUN og pikrinsyre kreatinin assays, der kun kræver 5-10 pi serum, HPLC-analyserne kræver ~ 25 ul serum pr assay, som hvis den udføres i to eksemplarer vil kræve ~ 100 pi af fuldblod pr assay. Dette kan være begrænsende for musestudier. Nogle centre har udviklet mere følsomme HPLC og massespektrometri-baserede metoder, der tillader analyse af mindre prøvevolumener 5, 6. Men disse teknologier er ikke almindeligt tilgængelig. En alternativ, enzymatisk kaskade assay (som kun kræver 5-10 pi serum) er blevet vurderet i mus og rotter serumprøver og vist til nøje parallel HPLC målinger af serumkreatinin mens pikrinsyre assays altid overvurdere kreatinin 7.. Mens dette assay ikke er almindeligt anvendt i AKI litteratur, assayet er kommercielt tilgængelige, let at bruge, og vi finder giver pålidelige resultater med denne model af IR-induceret AKI i mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Autoklavér alle kirurgiske instrumenter før operation. Bemærk, at hvis man udfører flere operationer på forskellige mus, skylles instrumenter efter brug, og derefter sterilisere ved hjælp af en varm perle sterilisator. Det er ikke tilstrækkeligt at suge i 70% ethanol.
- Giv 0,5 ml S / C sterilt saltvand præoperativt og umiddelbart postoperativt for at kompensere for tab af kropsvæske under operationen.
- Afveje mus.
- Bedøver musen brug af IP xylazin / ketamin blanding. Det tager normalt 3-5 minutter for musene at nå kirurgisk plan anæstesi.
- Shave operationsstedet med nok grænseområde til at holde håret i at forurene incisionssted. Dette skal udføres i et forberedende område, ikke hvor operationen er udført.
- Påfør oftalmologiske smørende salve til øjnene for at forhindre udtørring under proceduren.
- Placer musen tilbøjelige på den opvarmede overflade er dækket med absorberende bænk pad. Tape benene til kirurgiske overflade.
- Hvis du brugervandbad, indstilles varme ved 38 ° C 1 time før kirurgi.
- Aseptisk forberedelse ved betadinopløsning vatpind: krat fra midten af webstedet mod periferien 3x, hver gang efterfulgt af skrubning med Nolvasan at fjerne Betadine. Alle Betadine bør fjernes fra det kirurgiske område før incision ved skylning med Nolvasan. Før du starter aseptiske procedure handsker bør ændres til at være sterile.
- Dæk kirurgiske område med en steril operationsafdækningsstykke. Dette vil forhindre omstrejfende hår ind i operationsfeltet og giver et område, som at lægge sterile instrumenter under operationen.
- Palpere nyre placering gennem huden.
- Skær den dorsale hud langs midterlinien af mus (ca. 1,5 cm) under anvendelse af saks og pincet.
- Separat hud og subkutane lag over den venstre og højre dorsale side via denne indsnit ved stump dissektion ved hjælp af saks og pincet.
- Lave et lille snit gennem højre flank muskler og fascia over nyrerne og eksteriorisere højre nyre.
- Omhyggeligt dissekere de øvre og nedre poler i nyrerne fri fra omgivende væv. Bemærk, at fedtvæv fra omkring den øvre pol indeholder binyren bærer sin egen blodforsyning, som kan skubbes nyren, men bør naturligvis ikke fjernes fra mus (figur 1). Efter befriende nyre fra omgivende væv, binde 4-0 silkesutur omkring hilum af den højre nyre ved hjælp af en dobbelt kirurgisk knude. Efterlad den ene ende af suturen ~ 2 i lang tid at holde op nyre, som du skærer distalt for knuden, så du kan visualisere den hjemmeside, der skal skæres. Skyl stumpen med sterilt saltvand.
- Luk muskel lag ved hjælp resorberbar sutur.
- Lave et lille snit gennem venstre flanke muskler og fascia over nyrerne og eksteriorisere venstre nyre (figur 2A).
- Forsigtigt holde nyre hjælp stumpe pincet under frigivelse renalpedicle fra omgivende fedtvæv hjælp pincet (fig. 2B-2F). For meget pres på nyrerne ved hjælp af de stumpe pincet kan forårsage nyreskade, så man skal huske dette, når designe "sham" kontroller for undersøgelserne. Hvis du opdager, at din humbug kontrol er ved at udvikle nyreskade (som det fremgår af en stigning i serum-kreatinin), en alternativ metode kan du overveje at frigøre det omgivende fedtvæv fra renal stilken er at forsigtigt rulle væv med saltvand gennemblødt steril bomulds- tippes podninger. Det er vores erfaring fedtet er temmelig tæt knyttet til renal stilken og ikke let kan fjernes med vatpinde, så dette kan ikke være den første tilgang, du ønsker at bruge. Men ligesom andre aspekter af denne model, er det noget, du bliver nødt til at etablere for dig selv med praksis og erfaringer.
- Clamp venstre nyre stilken ved hjælp af ikke traumatisk vaskulær klemme hjælp bedrift pincet (for at lette klemme placering), bruge timer til forskellige CLAmp gange afhængigt af musestamme og skade sværhedsgrad nødvendig (se tabel 1).
- Dæk venstre nyre med huden (figur 2H).
- Dæk hudindskæring med saltvand gaze.
- Eksteriorisere nyre, bekræfte ensartet mørk fremtoning og frigive klemmen efter de angivne tidspunkter, og bekræfter, at støvet udseende vender ensartet i hele nyren (figur 2I / G). Hvis nyrerne ikke hurtigt og ensartet re-perfuse (lyserød up) musen, bør udelukkes fra yderligere analyse. Skub forsigtigt nyre tilbage i retroperitoneal rum.
- Luk muskel lag med resorberbar sutur.
- Luk hudlag ved hjælp monofil nylon non-resorberbar sutur.
- Indgiv buprenorphin analgesi.
- Overførsel mus væk fra det kirurgiske område på en varmepude indtil de vågner.
- Returnere musene for dyrs rum.
- Nøje overvåge mus og give yderligere doseraf buprenorphin som angivet ovenfor hver 8-12 timer for smerter eller ubehag. Kliniske tegn resulterer i administration af analgetika omfatter depression eller andre adfærdsændringer, unormal udseende, eller kropsholdning såsom hår-rejsning, krum stilling, mangel på pleje og spise, eller immobilitet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Moderat IR-induceret AKI. Ensidig IR med samtidig kontralateral nefrektomi væsentligt reducerer variabiliteten i resultaterne, men med kortere clamp gange nødvendige for musene at overleve denne fremgangsmåde stadig vi fandt, at kun 50-60% af musene udviklede den forventede nyreinsufficiens 24 hr efter skade (figur 3A). I praksis betyder dette skaber problemer evaluere data, medmindre disse inddrager behandlingsregimer, der kan iværksættes i mindst 24 timer efter skaden, så der er tid til at vurdere nyrefunktionen og kassér mus, der ikke udvikler nyreinsufficiens.
Svær IR-induceret AKI. Ud over at udføre ensidige IR med samtidig kontralateral nefrektomi, udfører vi ensidig IR alene. Mus kan overleve meget længere perioder med iskæmi og har tendens til at udvikle mere alvorlige efter skaden fibrose. Med den samme periode i iskæmi, udsat mus ensidig iskæmi develop mere alvorlig fibrose end bilateral iskæmi eller ensidige iskæmi med nephrectomy 8, så denne model også brugt som en model for post-AKI fibrose. Ulempen er, at det ikke er muligt at vurdere funktionel bedring efter ensidig IR skade, så der er ingen måde at vurdere alvorligheden af skaden uden høst nyrevæv og det kan ikke være muligt for mere langsigtede undersøgelser. Derfor har vi udviklet en protokol for at fremkalde alvorlig ensidig IR skade, og vurdere renal funktionel restitution ved at udføre kontralateral nefrektomi 8 dage efter den oprindelige skade. Ved hjælp af denne metode 90-100% af mus overlever skaden, men vigtigere musene udvikler meget konsekvent nyreskade og kan evalueres til funktionel restitution efter AKI fra dag 9 og fremefter (figur 3B). Disse resultater er i overensstemmelse med forsøg på rotter tyder på, at længere nyre stilken clamp tider fremkalde mere konstituerende tubulær skade end kortere klemme ti mes formål at få mild til moderat AKI 9.. Desuden, i overensstemmelse med tidligere undersøgelser 8 disse mus konsekvent udvikle efter skaden renal fibrose (som vi har vurderet på dag 28). Dette er ikke forbundet med proteinuri mindst på en BALB / c-baggrund: efter alvorlige IR-AKI på dag 28 efter skade urin albumin / kreatinin-forholdet er 0,8 ± 0,04 (gennemsnit ± SEM i ug / mg). Det er ukendt, om den alvorlige IR-AKI-modellen giver anledning til proteinuri på andre baggrunde.
Figur 1. Anatomi af musen renal hilum. Illustrerer position renale vaskulære kappe i forhold til ureter, perinephric fedtpuder og binyrerne med blodforsyning. Den sorte cirkel markerer positionen af mikro-klemme.
50495/50495fig2.jpg "/>
Figur 2. Eksponering og fastspænding af muse nyre vaskulær kappe (A), eksponering af den venstre nyre efter dissektion af hud og muskel lag;. (B - E), er den venstre nyre holdt forsigtigt bruge stumpe pincet mens perinephric fedt forsigtigt fjernes med en pincet. (F), Exposed efterladt renal stilken (grøn pil). Den hvide stiplede linie markerer den forventede position af ureter i perihilar fedtpude. Denne region skal undgås med den vaskulære klemme. (G), Micro-clamp anvendt til venstre nyre. (H), klemt venstre nyre er dækket med huden. (I), (G), Udseende af nyre før (A), under (I) og efter (G) efter fjernelse af vaskulære klemme.
fig3.jpg "/>
Figur 3. Funktionel bedring efter AKI. Ændringer i serumkreatinin (ved enzymatiske assays), efter moderate IR skade (26 min klemme tid) og den kontralaterale nephrektomi (A), ændringer i serumkreatinin efter induktion af alvorlig skade (30 min clamp tid) og kontralateral nefrektomi på Dag 8 (B). Undersøgelser udført i BALB / c-mus, n = 6 pr gruppe. Resultater udtrykkes som gennemsnit + /-SEM serumkreatinin i mg / dl, målt ved hjælp af enzymatisk assay.
| Musestamme | Omtrentlige Mouse alder | Omtrentlige Mouse vægt | Rørbelag | Selskabet og katalognummer | Iskæmi tid for alvorlig tilskadekomst | Iskæmi tid til moderat skade | Varmepude temperatur |
| BALB / c- 4-5 måneder | 25-28 g | Vascular klemme (795 g tryk) | Roboz, RS-5459 | 30 min (eller længere) | 26 min | 38 ° C | |
| C57BI / 6 | 4-5 måneder | 24-27 g | Vascular klemme (795 g tryk) | Roboz, RS-5459 | 29 min (eller længere) | 26 min | 38 ° C |
| CD1 | 4-5 måneder | 36-39 g | Vascular klemme (75-85 g tryk) | FST, 18.055-02 | 29 min (eller længere) | 26 min | 38 ° C |
Tabel 1. Anbefalet vaskulære klemmer, iskæmi tider og musestammer, som vi har evalueret.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi beskriver to modeller af IR-AKI at studere virkningerne af et moderat og svær nyreskade. Disse modeller tillader os at fremkalde ensartede og forudsigelige skader med lav dødelighed. Vores protokol skitserer mange af de vanskeligheder og faldgruber der traditionelt er forbundet med denne model. Endvidere har vi vist, at afhængigt af længden af renal pedicle fastspænding, modellen inducerer en stort set reversibel mild og moderat AKI, eller mere alvorlig AKI med ufuldstændig genopretning og vedvarende renal fibrose. Efter skaden fibrose i alvorlige IR-AKI modellen kan skyldes den kendsgerning, at mus er i stand til at overleve med mere alvorlig nyreskade, end det ville være muligt, hvis disse længere iskæmiske tider var foretaget bilateralt. Men der er også tegn på, at tilstedeværelsen af en ubeskadiget kontralaterale nyre i de første par dage efter IR forbedrer post-AKI fibrose 8.. Derfor, mens mekanismerne i cross-talk mellem uskadt og sårede nyrer mangler at blive etableretetableret, kan denne mekanisme tegner sig også for forbedret efter skaden fibrose, som vi observerer i denne model. Selv om det endnu ikke fastslået, om resultaterne ved hjælp af disse modeller kan oversættes til lægemidler til behandling af sygdomme hos mennesker, de giver pålidelige modeller til at studere mekanismer og terapi i IR-AKI og for at forhindre post-AKI renal fibrose, et klinisk problem, der fremstår som en væsentlig bidragyder i fremadskridende kronisk nyresygdom 10, 11.
Der er en række kritiske spørgsmål, der kan påvirke sværhedsgraden af AKI efter IR skade, der skal omhyggeligt deltog til: musestamme 12, køn 13, alder 14 og vægten af musen, det vaskulære anvendte klemme, og varmeanlæg 15. At vælge den rigtige vaskulære klemmer kan være en udfordring. Effektivitet af klemmen vurderes under den kirurgiske procedure som nyren bør blive ensartet sort inden for 5-10 min på klemme placering. Men det er også important at hele nyren er re-perfunderet (pink up) hurtigt efter fjernelse af klemmen. Vi har fundet nogle af de tungere klemmer arbejde godt sammen med visse stammer (fx BALB / c-og C57BI / 6), men i andre disse klemmer inducerer vaskulær beskadigelse og renal reperfusion er ofte ufuldstændig (f.eks CD1). Et resumé af de vaskulære klemmer, clamp vægte (tryk) og musestammer, som vi har evalueret er anført i tabel 1.. For varmeanlæg, anvende en række af efterforskere auto-regulerede varmepuder med temperaturfølere til at overvåge og opretholde konstant kropstemperatur. Mens teoretisk fordelagtig, fandt vi denne varmesystem kan resultere i store udsving i kropstemperatur i løbet af operationen, der giver anledning til ganske variable resultater. Desuden er disse systemer relativt dyre så kan begrænse antallet af mus man kan operere på ad gangen. Efter en masse trial and error, vi er flyttet til en konstant temperatur, cirkulerende vand healing systemet. Den vigtigste fordel ved dette er, at opvarmning platformen giver stabile temperaturer (38 ° C) under hele operationen. Med den store platform område er det også muligt at operere på en række mus på overfladen på et hvilket som helst tidspunkt (hvilket er en praktisk forudsætning for de fleste IR-AKI studier). Når det er sagt, vi finder der stadig var betydelig variation i kvæstelse efter moderat (men ikke alvorlig) IR-AKI. Dette er ikke et problem for undersøgelser, hvor behandlinger er påbegyndt 24 timer eller mere efter skaden, eftersom mus udvikler utilstrækkelig eller overdrevent alvorlige kvæstelser kan fjernes fra undersøgelsen inden randomisering ved analyse af serum kreatinin. Men hvis musene behandles før skaden, eller hvis genetiske modeller bliver brugt, kan yderligere kontrol eksperimentel variabilitet skal indføres. Da udsving i kroppens kernetemperatur er sandsynligvis den største bidragyder til variation i IR skade i denne model, en metode til at begrænse variationen ville være at monitor kernetemperaturer hjælp rektal sonder for at fastlægge passende dyr at medtage eller udelukke de efterfølgende analyser. De endelige overvejelser er mus alder, vægt og køn. De fleste af vores erfaring har været med BALB / c mus, og vi har opnået de bedste resultater, når musene nå stabil kropsvægt med 4-5 måneders alderen, med kropsvægt ~ 25-28 gram. Endelig, da hannerne har større følsomhed over for IR-AKI end hunnerne 13, vi udfører alle vores undersøgelser med hanmus alene. Men der er yderligere variabler, der er vanskelige at styre, så hver lab og hver investigator skal etablere præcise clamp og-betingelser for at inducere alvorligheden af kvæstelser, de ønsker i musen stamme af deres valg.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfattere har ingen interessekonflikter til at videregive.
Acknowledgments
Dr. de Caestecker laboratorium er støttet af NIH 1RO1 HL093057-01 og 1RC4DK090770-01. Dr. Harris 'laboratorium er støttet af DK38226, DK51265, DK62794 og finansiering fra Veterans Administration. Støtte til mus nyreskade operationer, serumkreatinin, og fibrose assays også leveret af Vanderbilt O'Brien Kidney Injury center tilskud 1P30 DK079341.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ketamine (anesthetic) | Webster Veterinary | 07-881-9413 (100 mg/ml) | Final concentration 30 mg/ml Ketamine with 3 mg/ml Xylazine administered at 3-4 ml/kg (100 mg/kg Ketamine and 10 mg/kg Xylazine) |
| Xylazine (analgesic) | Webster Veterinary | 07-808-1939 (100 mg/ml) | As above |
| Antisedan (anti-Xylazine) | Webster Veterinary | 07-867-7097 (5 mg/ml) | Optional: to reverse effects of Xylazine in order to increase the rate of recovery after surgery Use 0.5-0.7 mg/kg |
| Buprenorphine (analgesic) | Bedford Laboratories | NDC 55390-100-10 (0.3 mg/ml) | Dose 0.05-0.1 μg/g every 8-12 hr. Make up a 1:5 dilution in sterile normal saline preoperatively and give 2.5-5 μl/g of the diluted solution. |
| Ophthalmic ointment | Dechra | NDC 17033-211-38 | |
| Betadine swab sticks | Purdue Products L.P. | NDC 67618-153-01 | |
| Nolvasan Surgical Scrub | Pfizer Animal Care | 300253 | |
| Table 2. Drugs and solutions for I/R surgery. | |||
| Iris Scissors | Integra Miltex | VWR 21909-404 | For skin and muscle dissection |
| Curved iris forceps | FST | 11065-07 | To hold skin and muscle, to remove peri-nephric fat |
| Blunt forceps | ROBOZ | RS-5228 | To manipulate kidneys |
| Vascular clamp (795 g pressure) | ROBOZ | RS-5459 | Good for C57BL/6 and BALB/c mice strains |
| Schwartz clip applying forceps | ROBOZ | RS-5450 | For RS-5459 clamps |
| Vascular clamp (75-85 g pressure) | FST | 18055-02 | Optimal for CD1 mice strain, but also can be used for C57BL/6 and BALB/c |
| Micro-Serrefine Clamp Applicator-14 cm with Lock | FST | 18056-14 | For FST 18055-02 clamps |
| Gayman T/Pump (water-bath heated platform) | Braintree Scientific | TP-650 | The water heater is set at 38 °C 1 hr prior surgery |
| 15" W x 24" Heated platform | Braintree Scientific | HHP-2 | Connect to Gayman heated water pump |
| Heating pad | Braintree Scientific | Model 39DP | Uses microwave for heating. This is useful for warming during recovery |
| Absorbable suture (Vicryl 5-0) | ETHICON | VCP834G | For fascia and muscle |
| Non-absorbable suture: monofilament nylon MONOMID 6/0 660B) | CP Medical | CP-B660B-03 | For skin |
| Halsey needle holder: Tungsten Carbide/13 cm | FST | 12501-13 | To hold suture needles |
| Timer | FST | 06-662-3 | To quantify ischemia time |
| Hot bead sterilizer | FST | 18000-45 | To sterilize instruments between mice if you are performing multiple surgeries (it is not sufficient to soak instruments in ethanol) |
| Electric razor | Braintree Scientific | CLP-22965 | |
| Tape | Durapore | 1538-0 | |
| 1 ml Syringe | EXELint | 26044 | |
| Sterile cotton tipped applicators | Kendall | 8884541300 | |
| Absorbent BenchPad | VWR | 56617-014 | |
| Surgical drapes | VWR | 21902-985 | Need to be autoclaved |
| 2’’ x 2’’ Gauze Pads | Medi-First | 60673 | |
| Sterile gloves | Cardinal Health | 2D7251 | |
| Table 3. Equipment and instruments for I/R surgery. | |||
References
- Singh, A. P., Junemann, A., Muthuraman, A., Jaggi, A. S., Singh, N., Grover, K., Dhawan, R. Animal models of acute renal failure. Pharmacological reports: PR. 64, 31-44 (2012).
- Heyman, S. N., Rosenberger, C., Rosen, S. Experimental ischemia-reperfusion: Biases and myths-the proximal vs. Distal hypoxic tubular injury debate revisited. Kidney Int. 77, 9-16 (2010).
- Lieberthal, W., Nigam, S. K. Acute renal failure. II. Experimental models of acute renal failure: Imperfect but indispensable. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F1-F12 (2000).
- Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice. Kidney Int. 65, 1959-1967 (2004).
- Yuen, P. S., Dunn, S. R., Miyaji, T., Yasuda, H., Sharma, K., Star, R. A. A simplified method for HPLC determination of creatinine in mouse serum. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286, F1116-F1119 (2004).
- Hetu, P. O., Gingras, M. E., Vinet, B. Development and validation of a rapid liquid chromatography isotope dilution tandem mass spectrometry (LC-IDMS/MS) method for serum creatinine. Clin. Biochem. 43, 1158-1162 (2010).
- Keppler, A., Gretz, N., Schmidt, R., Kloetzer, H. M., Groene, H. J., Lelongt, B., Meyer, M., Sadick, M., Pill, J. Plasma creatinine determination in mice and rats: An enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay. Kidney Int. 71, 74-78 (2007).
- Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. Epithelial cell cycle arrest in G2/M mediates kidney fibrosis after injury. Nat. Med. 16, 535-543 (2010).
- Shanley, P. F., Rosen, M. D., Brezis, M., Silva, P., Epstein, F. H., Rosen, S. Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney. Am. J. Pathol. 122, 462-468 (1986).
- Chawla, L. S., Amdur, R. L., Amodeo, S., Kimmel, P. L., Palant, C. E. The severity of acute kidney injury predicts progression to chronic kidney disease. Kidney Int. 79, 1361-1369 (2012).
- Lo, L. J., Go, A. S., Chertow, G. M., McCulloch, C. E., Fan, D., Ordonez, J. D., Hsu, C. Y. Dialysis-requiring acute renal failure increases the risk of progressive chronic kidney disease. Kidney Int. 76, 893-899 (2009).
- Burne, M. J., Haq, M., Matsuse, H., Mohapatra, S., Rabb, H. Genetic susceptibility to renal ischemia reperfusion injury revealed in a murine model. Transplantation. 69, 1023-1025 (2000).
- Muller, V., Losonczy, G., Heemann, U., Vannay, A., Fekete, A., Reusz, G., Tulassay, T., Szabo, A. J. Sexual dimorphism in renal ischemia-reperfusion injury in rats: Possible role of endothelin. Kidney Int. 62, 1364-1371 (2002).
- Schmitt, R., Marlier, A., Cantley, L. G. Zag expression during aging suppresses proliferation after kidney injury. J. Am. Soc. Nephrol. 19, 2375-2383 (2008).
- Oxburgh, L., de Caestecker, M. P.
