Este protocolo descreve duas manipulações ambientais diferentes e um protocolo de infusão cerebral concomitante para estudar as alterações cerebrais induzidas pelo ambiente subjacentes ao comportamento adaptativo e ao reparo cerebral em camundongos adultos.
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Artigo de método
Modulações Ambientais do número de Midbrain dopamina Neurônios no Adulto Mice
Neste artigo
Resumo
Resumo
Mudanças duradouras no cérebro ou "plasticidade cerebral" subjazem o comportamento adaptativo e reparação cerebral após doença ou lesão. Além disso, as interações com o meio ambiente pode induzir plasticidade cerebral. Cada vez mais, a pesquisa está tentando identificar quais ambientes estimular a plasticidade cerebral benéfica para o tratamento de desordens cerebrais e comportamentais. Duas modificações ambientais que são descritos aumentar ou diminuir o número de tirosina-hidroxilase imunopositivas (TH +, a enzima limitante da velocidade de dopamina (DA síntese)) neurónios do mesencéfalo do rato adulto. O primeiro inclui o emparelhamento masculino e camundongos fêmeas juntos continuamente durante uma semana, o que aumenta TH mesencéfalo + neurônios em aproximadamente 12% no sexo masculino, mas diminui TH mesencéfalo + neurônios em aproximadamente 12% no sexo feminino. A segunda compreende ratos habitação continuamente por 2 semanas em "ambientes enriquecidos" (EE) contendo rodas de corrida, brinquedos, cordas, material de nidificação, etc., que increases TH mesencéfalo + neurônios em cerca de 14% no sexo masculino. Além disso, um protocolo é descrito por concomitantemente infundindo drogas diretamente no mesencéfalo durante estas manipulações ambientais para ajudar a identificar os mecanismos subjacentes a plasticidade do cérebro por motivos ambientais. Por exemplo, EE-indução de mais TH mesencéfalo + neurônios é abolida pelo bloqueio simultâneo de entrada sináptica em neurônios do mesencéfalo. Juntos, estes dados indicam que a informação sobre o meio ambiente é retransmitida via de entrada sináptica nos neurônios do mesencéfalo para ligar ou desligar a expressão de genes 'da'. Assim, a estimulação ambiental adequada, ou droga segmentação dos mecanismos subjacentes, pode ser útil para o tratamento de distúrbios cerebrais e comportamentais associados com desequilíbrios no mesencéfalo DA (por exemplo, doença de Parkinson, déficit de atenção e hiperatividade, esquizofrenia e dependência de drogas).
Introdução
Sinalização DArgic pelos neurônios na área tegmental ventral (VTA) e substantia nigra pars compacta (SNC) do mesencéfalo é pensado para ser importante para os comportamentos cognitivos, emotivos e motoras motivou-recompensa. No entanto, muita ou pouca sinalização DA mesencéfalo causa muitos sintomas incapacitantes em uma variedade de distúrbios neurológicos (por exemplo, doença de Parkinson, déficit de atenção e hiperatividade, esquizofrenia e dependência de drogas). Drogas que aumentam ou diminuem a sinalização DA aliviar estes sintomas, no entanto, eles também produzem efeitos colaterais atribuíveis à sinalização desregulada e efeitos fora do alvo. A eficá....
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Protocolo
NOTA: Todos os procedimentos experimentais em animais foram aprovados pelo Instituto Florey do Comitê de Ética Animal Health Neuroscience & Mental e em conformidade com da Austrália Nacional de Saúde e Pesquisa Médica do Conselho publicou código de boas práticas para o cuidado e uso de animais para fins científicos (7 ª edição, 2004).
1. As manipulações ambientais
- O emparelhamento de Gênero
- Use sexualmente maduros (> 8 semanas de idade), os ratos machos e fêmeas pareados por idade.
NOTA: Normalmente usamos camundongos C57BL / 6, mas tiveram os mesmos resultados usando camundongos Swiss neste protocolo....
- Use sexualmente maduros (> 8 semanas de idade), os ratos machos e fêmeas pareados por idade.
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Resultados
Ratos adultos submetidos a essas manipulações ambientais alteraram número de mesencéfalo (SNC e VTA), mas não LC, TH + neurônios, e EE mais infusão mesencéfalo simultânea de picrotoxin ou bicuculina (GABA os antagonistas do receptor) abole EE-indução de mais SNc TH + neurônios. Estes dados foram previamente publicados em 6. Os presentes dados foram compilados em experiências duplicadas realizados como parte desse estudo anterior, mas não foram publicados em outros lugares.
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Discussão
Manipulações ambientais
A motivação por trás do design dessas manipulações ambientais (emparelhamento de gênero e de enriquecimento ambiental) foi determinar se o meio ambiente, e / ou comportamento solicitado pelo ambiente, está associado a alterações no número de neurônios DA mesencéfalo. O foco foi, portanto, no fornecimento de ambientes e estimular comportamentos que são propensos a se envolver sinalização DA mesencéfalo. Estes emparelhamento incluído com o sexo oposto, e enriqu.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado pelo Projeto do Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica da Austrália (NHMRC) 1022839. AJH é um Australian Research Council (ARC) FT3 Future Fellow (FT100100835). O Instituto Florey de Neurociência e Saúde Mental reconhece o apoio do Subsídio de Apoio à Infraestrutura Operacional do Governo de Victoria.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Isofluorano | Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Austrália | AHN3640 | |
| ALZET Bomba osmótica 1002 | DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 | 0004317 | |
| ALZET Kit de infusão cerebral 1 | DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 | 0004760 | |
| Suporte de cânula ALZET 1 | DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 | 0008860 | |
| Vertex Monomer Self-curing (solvente acrílico dental) | Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Holanda | n/a | |
| Vertex Self Curing (pó acrílico dental) | Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Holanda | n/a | |
| METACAM (Meloxicam) | Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Austrália | L10100 | |
| Pentobarbitão de sódio | Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Austrália | 571177 | |
| Soro de cabra normal | chemicon-temecula, CA | S26-Litre | |
| Triton X-100 | Merck Millipore Headquarters, 290 Concord road, Billerica, MA 01821 | 1.08603.1000 | |
| Coelho policlonal anti-tirosina hidroxilase | Merck Millipore Headquarters, 290 Concord road, Billerica, MA 01821 | AB152 | |
| Cabra biotinilada policlonal anti-coelho | Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Nível 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Austrália 2060 | EO432 | |
| Avidin peroxidase | Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU | A3151-1mg | |
| Diaminobenzidina | Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU | D-5637 | |
| Investigador estéreo | MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495 | n/a |
Referências
- Aumann, T., Horne, M. Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons. Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).
- Sauer, H., Oertel, W. H.
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Reimpressões e permissões
