A completa e atualizada "Rotifer policultura Method" para a criação de Primeira Zebrafish Alimentar

Resumo

Larval de peixe-zebra são adaptados para se alimentar de zooplâncton. É possível capitalizar essa característica natural em laboratório cultivando peixes que se alimentam primeiro juntos no mesmo sistema com rotíferos vivos de água salgada. Essa estratégia de "policultura" promove alto crescimento e sobrevivência com o mínimo de trabalho e perturbação para as larvas.

Resumo

O peixe-zebra (Danio rerio) é um organismo modelo de importância crescente em muitos campos da ciência. Um dos aspectos técnicos mais exigentes do cultivo desta espécie em laboratório é a criação de larvas de primeira alimentação até a fase juvenil com altas taxas de crescimento e sobrevivência. O desafio central de gerenciamento desse período de desenvolvimento gira em torno do fornecimento de alimentos altamente nutritivos aos peixes de forma quase contínua, sem comprometer a qualidade da água. Como as larvas de peixe-zebra estão bem adaptadas para se alimentar de pequenos zooplânctons na coluna d'água, presas vivas, como rotíferos braquionídeos, Artemia e Paramecium são amplamente reconhecidas como os alimentos de escolha, pelo menos até que os peixes atinjam o estágio juvenil e sejam capazes de se alimentar eficientemente de dietas processadas. Este protocolo descreve um método pelo qual larvas de peixe-zebra recém-nascidas são cultivadas juntamente com rotíferos vivos de água salgada (Brachionus plicatilis) no mesmo sistema. Essa abordagem de policultura fornece aos peixes uma fonte de alimento vivo rica em nutrientes "sob demanda", sem produzir resíduos químicos em níveis que, de outra forma, limitariam o desempenho. É importante ressaltar que, como o sistema aproveita tanto a alta produtividade natural dos rotíferos quanto as preferências comportamentais dos peixes, o trabalho envolvido na manutenção é baixo. O protocolo a seguir detalha um procedimento passo a passo atualizado que incorpora a produção de rotíferos (escalável para qualquer nível desejado) para uso em uma policultura de larvas de peixe-zebra e rotíferos que promove o desempenho máximo durante os primeiros 5 dias de alimentação exógena.

Introdução

O peixe-zebra (Danio rerio) é um animal de laboratório pré-eminente utilizada em um número crescente de disciplinas científicas, incluindo, mas não limitado a genética do desenvolvimento, toxicologia, o comportamento, a aquicultura, biologia regenerativa, ea modelagem de muitas doenças humanas ^{1 - 5.} Embora a espécie é relativamente fácil de manter em laboratório, há uma série de desafios de gestão associados à sua cultura ^6. A mais proeminente delas é larvicultura, especialmente quando o peixe primeiro começa a alimentar a inflação subseqüente à bexiga de gás ^7. Sob condições normais, controlados, este ....

Protocolo

1. Rotifer Cultura

1. Componentes básicos de um sistema de cultura utilizando um recipiente de 100 L Cultura
   1. Reúna todos os componentes para a instalação cultura de rotíferos. A configuração cultura rotíferos consiste de um recipiente de cultura (CV) para cultivar as rotíferos; um recipiente semelhante para manter rotíferos desabastecimento dos silos (vaso de cultura desabastecimento dos silos, FCV); um frasco de fundo redondo de incubação (alimentação Reservoir, FR) para o armazenamento da mistura de alimentação algas (AFM); um suprimento de ar (AS) para arejar o CV, FCV e FR; uma bomba peristáltica com um temporizador de medição (P....

Resultados

O sistema de cultura de rotíferos contínuo descrito aqui é dinâmica, e é normal que os números de rotíferos a flutuar numa pequena extensão ao longo do tempo se há variações nas taxas de alimentação e de colheita diárias. A população das rotíferos em uma das culturas activas nas instalações de aquacultura do Hospital de Crianças de Boston, mantida na forma descrita acima, foi monitorizado durante 30 dias (Figura 3). A densidade da cultura médio durante este período foi d.......

Discussão

A implementação bem sucedida do método policultura rotifer para a alimentação de peixes-zebra larval precoce exige protocolos eficazes para duas tarefas: o estabelecimento e manutenção de um sistema de cultura de rotíferos contínua para alimentar os peixes, e cultura de primeira alimentação larvas do peixe junto com rotíferos no mesmo tanque.

A configuração para um sistema de produção de água salgada rotifer contínua para os laboratórios de peixe-zebra primeiro descritos por Lawrence e co-au.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Rotifer Culture Infrastructure
100 L Vaso de Cultura	Aquaneering	Recipiente de	cultura de policarbonato personalizado, fundo cônico, com válvula de drenagem
Kit de balde de cultura de 5 galões	Kit inicial Reed Mariculture	CCS Vaso de	cultura de pequeno volume para pequenas instalações
Tubo rígido transparente 1/2" O.D., 36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Tubulação rígida transparente para entrega de ar
Tubo de malha	Pentair Aquatic Ecosystems	RT444X	Suporte de tubo de malha para filtro de fio
Rotifer Floss	Reed Mariculture	Rotifer floss 12" x 42"	Colector de resíduos de partículas
Bomba de Medição Peristáltica, 5 GPD	Grainger	38M003	Bomba dosadora com temporizador para dosagem de ração para rotíferos
Bomba de Medição Peristáltica, 1-100 mL/hr (para cultura em menor escala)	Coral Vue	SKU: IC-LQD-DSR	Bomba de Medição com temporizador para dosagem de alimentação para rotíferos
Tubulação de Silicone	Tubulação Cole Parmer		para entrega de algas ao vaso rotífero
Tubulação Rígida Transparente "O.D.,36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Tubo rígido transparente para entrega de ar à pasta de algas
Tubo rígido transparente O.D., 36"	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Tubulação rígida transparente para entrega de algas
Rotifers
Live Rotifers Brachionus plicatilis Tipo L	Reed Mariculture	Tipo L 5 milhões Cultura	de estoque de rotíferos para inicialização do sistema
Rotifer Feed
Hidroximetilsulfonato de sódio	Reed Mariculture	ClorAm-X® Banheira de 1lb	Redutor de amônia para mistura de alimentação de algas
Bicarbonato de Sódio	Fisher Scientific	S25533B	tampão de pH para mistura de ração
algas Concentrado de microalgas	Reed Mariculture	Rotigrow Plus® saco de 1	litro Ração rotifer otimizada nutricionalmente
RG	Complete Reed Mariculture	RG Garrafa completa de 6 oz	Ração à base de microalgas para culturas de pequena escala
Preparação de água
Cristais de Recife Sal	de Recife que Peixe Coloque	198210	Sal para fazer água de cultura (NOTA: este item é apenas um exemplo; qualquer formulação de sal livre de contaminantes pode ser usada).
Refratômetro	Pentair Aquatic Ecosystems	SR6	medindo salinidade
Equipamento de cultura de rotíferos
Plankton Collectors 12" Dia, 53 mícrons	Pentair Aquatic Ecosystems	BBPC20	Tela de malha para coleta de rotíferos
Scrub Pads Pentair	Aquatic Ecosystems	SCR-58	Esfregão para limpeza dentro de vasos de cultura
Escova de Esfregar
Balde	Grainger Supply	43Y530	Balde graduado para mistura de água
de cultura Jarra de incubação	Pentair Ecossistemas Aquáticos	J30	Armazenamento de mistura de ração de algas
Lugol' s Solução, Diluir	Fisher Scientific	S99481	Agente usado para imobilizar rotíferos vivos para contagem
de lâmina de contagem de plâncton Sedgewick-Rafter com grade	Pentair Aquatic Eco-Systems	M415	Counting rotifers
Miscelleneous
Tea Strainer	Kitchenworks	971972	Usado para coletar embriões de peixe-zebra após a desova