Summary
Drosophila doku homojenlerinde bozulmamış mitokondriyal kütlenin nicelleştirilmesi için sitrat sintaz aktivitesinin kolorimetrik testi için bir protokol sönmesin.
Abstract
Mitokondri oksidatif fosforilasyon yoluyla ATP üreterek ve çeşitli fizyolojik süreçleri düzenleyerek hücresel metabolizmada en önemli rolleri oynar. Mitokondriyal disfonksiyon metabolik ve nörodejeneratif hastalıkların bir dizi birincil nedenidir. Bozulmamış mitokondri onların düzgün çalışması için kritik öneme sahiptir. Enzim sitrat sintaz mitokondriyal matriks lokalize ve böylece bozulmamış mitokondriyal kitlenin bir nicel enzim belirteci olarak kullanılabilir. Mitokondri önemli işlevleri olan birçok molekül ve yollar son derece insanlar ve Drosophilaarasında korunmuş olduğu göz önüne alındığında , ve güçlü genetik araçlar bir dizi Drosophilamevcuttur , Drosophila mitokondriyal fonksiyonu incelemek için iyi bir model sistemi olarak hizmet vermektedir. Burada, mitokondriyi izole etmeden yetişkin sineklerinden homojen dokudaki sitrat sintaz aktivitesinin hızlı ve basit ölçümü için bir protokol sıyoruz. Bu protokol aynı zamanda larvalar, kültürlü hücreler ve memeli dokularında sitrat synthase aktivitesini ölçmek için de uygundur.
Introduction
Mitokondri en iyi enerji para birimi, ATP, trikarboksilik asit döngüsü (yani, Krebs döngüsü) ve oksidatif fosforilasyon yoluyla üretmek çoğu ökaryotik organizmalar, güç üreten organeller olarak bilinir. Mitokondri de apoptoz1düzenlenmesi gibi diğer fizyolojik süreçlerin bir çok önemli rol oynadığı bulunmuştur, Ca2 + homeostazı2,3, reaktif oksidasyon türleri (ROS) nesil4, ve endoplazmik retikulum (ER)-stres yanıtı5. Mitokondriyal disfonksiyon herhangi bir yaşta vücutta herhangi bir organı etkileyebilir ve metabolik birincil nedenidir, yaşlanma ile ilgili6, ve nörodejeneratif hastalıklar7. Bozulmamış mitokondri mekanistik mitokondriyal fonksiyon ile ilgilidir. Bu nedenle, bozulmamış mitokondriyal kütlenin doğru nicelleştirilmesi mitokondriyal fonksiyonun değerlendirilmesi için çok önemlidir8. Sitrat synthase, trikarboksilik asit döngüsünün ilk adımda bir oran sınırlayıcı enzim9, ökaryotik hücreler içinde mitokondriyal matris lokalize, ve böylece bozulmamış mitokondriyal kitle nin varlığı için bir nicel belirteç olarak kullanılabilir9,10. Sitrat sintaz aktivitesi de bozulmamış mitokondriyal proteinler için bir normalleşme faktörü olarak kullanılabilir11,12.
Meyve sinek, Drosophila melanogaster, mitokondriyal fonksiyon eğitimi için mükemmel bir model sistemidir, mitokondri de önemli roller oynayan birçok molekül ve yollar evrimsel olarak Insanlara Drosophila korunur13,14,15. Burada, Drosophila dokusunda kolorimetrik bir test ile sitrat synthase aktivitesinin ölçülmesi için hızlı ve basit bir yöntem için bir protokol savuruyoruz16 iyi plaka biçiminde homojen. Sitrat synthase aktivite sintaz, Drosophila doku homojenate sitrat synthase asetil koenzim A ile oksaloasetat reaksiyonu katalizler (asetil CoA) sitrat CoA-SH ve H+oluşturmak için . CoA-SH daha sonra 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoik asit) (DTNB) ile reaksiyona girarak 412 nm'de spektrofotometrik olarak kolayca ölçülebilen renkli bir ürün olan 2-nitro-5-tiobenzoat (TNB) üretir. Sitrat synthase aktivitesi renk üretim hızı ile yansıtılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. D. melanogasteriçin Kolorimetrik Sitrat Synthase Aktivite Teşbesi16
- Her örnek için on yetişkin sinek toplayın. Her genotip için en az üçe trilikat örnekleri toplayın.
- Her numune için 1,5 mL test tüpünde 20 mM HEPES (pH = 7,2), 1 mM EDTA ve %0,1 triton X-100 içeren 500 μL buz gibi ekstraksiyon tamponu hazırlayın.
- Anestezi pedüzerinde CO2 ile yetişkin sinekler anestezi ve istenilen dokuları izole. Yetişkin sinek toraksları izole etmek için, örneğin, forseps bir çift tarafından sinek toraks düzeltmek ve sonra bir makas kullanarak toraks ve karın sınırı boyunca keserek sinek karın izole. Kas sitrat synthase aktivite analizi için sinek toraks toplamak.
NOT: Sitrat synthase aktivitesini normalleştirmek için kullanıyorsanız, bu adımda dokunun taze ağırlığını belirleyin. - 10 yetişkin sinek tothoraxes 100 μL buz gibi ekstraksiyon tampon hemen ve buz üzerinde bir havaneli ile homojenize aktarın. Örnekleri buz gibi tutmak için, örnekleri buz üzerinde 5-10 s homojenize edin, sonra numuneleri 5 s buzüzerinde bekletin ve tüpteki tüm dokular tamamen homojenleşene kadar tekrarlayın.
NOT: Tüpü bantlayın, homojenlerde pıhtı olmadığından ve tüpteki dokuların tamamen homojenleştirilip homojenleştirilip kontrol edin. Tüm numune tedavileri buz üzerinde yapılmalıdır. - Protein içeriği ölçümü için yeni bir tüpte her homojen örnek10 μL alın. Protein ölçümü için numuneleri buzüzerinde saklayın.
NOT: Protein örnekleri daha sonra analiz için -80 °C'de dondurulabilir ve saklanabilir. Protein konsantrasyonları sitrat sintaz aktivitelerinin normalleştirilmesi için bir iç parametre görevi gösterir. - Toplam hacmi 500 μL yapmak için kalan her numuneye 400 μL buz gibi çıkarma tamponu ekleyin. Her reaksiyon için, taze hazırlanmış reaksiyon çözeltisinin 150 μL'sine (20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.1 mM DTNB, 0.3 mM asetil CoA, 1 mM oksoasetik asit) seyreltilmiş hücre listatını ekleyin. Kabarcık oluşumunu önleyerek, hafifçe boru lama ile iyice ve hemen karıştırın. Emiciliği 25 °C'de 4 dk için her 10-30 s'de 412 nm'de, minimum 10 s aralıklarla 412 nm'de ölçüm yapabilen bir plaka okuyucu suvedi.
NOT: Farklı bir reaktifi pipetlemeden önce ucu değiştirin ve kuyularda kabarcıklar oluşmasını önleyebilirsiniz. Reaktiflerin eksik karıştırılması ölçümlerde farklılıklara neden olabilir. Sitrat synthase aktivitesi testi, numuneler toplandıktan hemen sonra oda sıcaklığında yapılmalıdır, çünkü bu test bozulmamış mitokondriyal kütleyi ölçmek için kullanılır. Reaksiyon arabelleği kullanımdan hemen önce hazırlanmalı ve depolanmamalıdır. - Verileri optik yoğunluk (OD) emicilik (abs) (Y ekseni) ile zaman (dakika içinde) (X ekseni) olarak çizin. Daha sonra eğrinin doğrusal kısmının eğimini hesaplayın, reaksiyon oranı
Sitrat synthase aktivitesini normalleştirmek için değeri örnek protein konsantrasyonuna bölün. Sitrat synthase etkinliği,
NOT: Örnek protein konsantrasyonu bir protein konsantrasyonu test kiti ile ölçülebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1, farklı genotiplerin Drosophila toraks dokusu homojenatlarını ölçmek için sitrat sintaz aktivitesi kolorimetrik töz kullanılarak elde edilen 412 nm'de OD absorbansı için kinetik eğrilerin bir örneğini sunar. PGC-1α'nın mitokondriyal biyogenezin ana düzenleyicisi olduğu bilinmektedir. PGC-1α, Drosophila ve insanlar arasında fonksiyonel olarak korunur. Drosophila RNF34 (dRNF34) Drosophila PGC-1α, dPGC-1 için bir E3 ubiquitin ligaz, ve dPGC-1 protein yıkımı teşvik17. İletim elektron mikroskobu ve mitokondriyal DNA qPCR Drosophila kas dRNF34 knockdown dPGC-117nakavt tarafından bastırılmış mitokondriyal içeriği artırır göstermiştir. Bu sonuçlara dayanarak Drosophila kasıdRNF34'ün yıkılmasının mitokondriyal sitrat sintaz aktivitesini artıracağını ve bunun dPGC-1'in yıkılması ile tersine çevrilmesi gerektiğini varsaydık. Gerçekten de, burada açıklanan sitrat synthase aktivitesinin kolorimetrik titreşmesini kullanarak, Drosophila kaslarında dRNF34'ün yıkılmasının mitokondriyal sitrat synthase aktivitesini artırdığını bulduk, bu da dPGC-1'in yıkılması ile tersine çevrildi. Özellikle burada açıklanan yöntem kullanılarak, her bir analiz için bir başlangıç doğrusal enzimatik oran oluşturulmuştur (Şekil 1). Formülleri ve tayin katsayısı (R2)ile eğilim çizgileri grafikte gösterilmiştir (Şekil 1). Eğilim çizgilerinin eğimleri, farklı genotiplerin maksimal sitrat sintaz aktivitelerine eşdeğer olan maksimal reaksiyon oranlarını temsil eder. Farklı genotiplerin eğimleri farklıdır (Şekil 1). Belirleme katsayısı 1'e yakındır; eğilim satırlarının formülleri daha güvenilirdir. Protein konsantrasyonu normalleştirilmiş maksimal sitrat sintaz aktiviteleri farklı genotiplerin Şekil 1 verilerinden hesaplanmıştır(Şekil 2). Kas lara özgü dRNF34 nakavtı ile sinek torakslarının maksimal sitrat synthase aktivitesi artmış, kaslara özgü dPGC-1 nakavtı ile tersine çevrilmiştir(Şekil 2).
Şekil 1: Sitrat sintaz aktivitesinin kolorimetrik tsay'ı için kinetik eğrilere bir örnek. Yetişkin sinek toraks homojenleri (a) 24B-Gal4>+ (b) 24B-Gal4>dRNF34RNAi(II) ve (c) 24B-Gal4>dRNF34RNAi(II),dPGC-1RNAi citrat aktivitesinin kolorimetrik analizine tabi tutuldu. Yatay eksenler tepki sürelerini, dikey eksenler ise 412 nm'de OD emicilerini temsil eder. Her genotip için lineer enzimatik oran saptadı. Eğilim çizgileri çizildi ve eğilim çizgilerinin formülleri ve R 2'si grafikte gösterilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Kinetik eğrilerden hesaplanan ve protein konsantrasyonu ile normalleştirilen maksimal sitrat sintaz aktiviteleri. Kas spesifik dRNF34 nakavt ile sinek toraksmların maksimal sitrat synthase aktivitesi arttı, hangi kas özgü dPGC-1 knockdown ile tersine çevrildi. Tüm veriler ± SEM (*p < 0.01, ANOVA testi ve Tukey'nin çoklu karşılaştırmalar için testi, n = 3, çoğaltma başına 10 toraks) anlamına gelir olarak temsil edilir. Bu rakam Wei ve ark.17'dendeğiştirilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bir model olarak Drosophila kullanarak Metabolik çalışmalar dikkate genetik arka plan, diyet almak gerekir, ve sineklerin stok bakım18. Farklı genetik arka planların sitrat sintaz aktivitesinin ölçümü üzerindeki etkilerini önlemek için, Drosophila'nın farklı suşları 10 nesil boyunca kontrol etütlerine geri geçilmelidir. Deneylerimizde kullanılan tüm Drosophila suşlarının genetik arka planı w1118'dir,bu yüzden w1118'i kontrol olarak kullandık. Genellikle, biz w1118 iyi bir kontrol olduğunu düşünüyorum, en Drosophila suşları için genetik arka plan ve Canton-S daha backcross çok daha kolaydır. Diyet ve stok bakım tam olarak tüm deneysel gruplar için aynı olmalıdır. Deneylerimizde sinekler normalde 25 °C ve %50-60 bağıl nemde muhafaza edilir. Örnek hazırlama adımı da dikkatli bir şekilde yapılmalıdır. Deney için ayarlanan haçlar benzer ve uygun bir ölçekte olmalıdır. Bir haç kurmak için, 3-4 dişi bakire yetişkin sinekler 4 cm çapında 2-3 erkek yetişkin sinekler ile tutulur, taze gıda ile birlikte 15 cm yüksekliğinde şişe. Gıda tarifi (örneğin, yüksek yağlı diyet, normal diyet, yüksek şeker diyet), deneysel tasarıma bağlı olarak değişebilir. İki gün sonra, sineklerin ebeveyn nesli taze yiyeceklerle yeni bir şişeye aktarılır. Gıdalarda yumurtadan çıkan larvaların bakımı gerekirse biraz su eklemeyi içerir. Sineklerin filial nesil yumurtadan başladığında, şişeler her 24 saat çevrilmiş, istenen genotip sinekler deney için yeni bir şişe toplanır, ve sineklerin yumurtadan çıkma tarihi her şişe üzerinde işaretlenir. Yaklaşık 20-30 aynı genotip, cinsiyet ve yaş toplanan sinekler gıda ile bir şişe tutulur. Toplanan sinekler deneyler yapılana kadar her iki günde bir uygun gıda ile taze şişelere aktarılmalıdır. Yaşın sitrat sintaz aktivitesi üzerindeki etkisini önlemek için, test edilen farklı grupların sinekleri aynı gün yumurtadan çıkmalıdır. Buna ek olarak, sineklerin cinsiyeti eşleşmelidir. Genellikle dişilerin vücut büyüklüğü erkeklerden daha büyüktür, bu nedenle kadın vücutlarının protein konsantrasyonu erkek bedenlerinden daha yüksektir.
Sitrat synthase aktivitesi tsay da larvalarda sitrat synthase aktivitesini ölçmek için kullanılabilir. Bu amaçla, her örnek beş gezgin üçüncü instar larvası oluşabilir. Üçüncü instar larvaları, ikinci yıldız larvalarında eksik veya zayıf bir şekilde mevcut olan arka spiracles'lerinin ucunda koyu turuncu bir halka ile ayırt edilebilir.
6. adımda, numunelerin seyreltme oranları farklı numuneler için farklılık gösterebilir. İlk ölçülen numuneler için, testte doğrusal enzimatik oran belirlemek için uygun bir seyreltme oranı belirlemek için birkaç seyreltme oranı nın denenmesi gerekir. Adakta doğrusal enzim oranı oluşturan maksimal enzim aktivitesinin toplam ölçüm süresi enzim-substrat oranına bağlı olarak değişir. Eğer substrat enzime göre aşırı dozda ise, enzim aktivitesi veya reaksiyon hızı maksimal aşar, bu da tözde doğrusal enzimoranının oluşmasını sağlar. Reaksiyon devam ettikçe, substrat miktarı azalır ve enzim aktivitesi veya reaksiyon hızı yavaşlar. Eğer doğrusal enzimoranı çizilemezse, yani substrat enzime göre aşırı dozda kullanılmaz, doku reaksiyon çözeltisi ile homojenlaşır veya doğrusal enzimatik hız çizimi olana kadar 412 nm okumalarının aralık süresini kısaltır Kurulan. 412 nm okuma için aralık süresi en fazla 30 s olmalıdır. 412 nm okumanın süresi reaksiyon hızına ve zamana bağlıdır. Tüm reaksiyonlar için daha fazla renk değişikliği gözlenmediğinde spektrofotometre okuması durmalıdır.
Sitrat synthase aktivitesi örnek protein konsantrasyonu, örnek taze ağırlık veya hücre numarası ile normale olabilir. Örnek taze ağırlık adım 3 gibi homojenleştirme önce ölçülebilir. Hücre numarası kültürlü hücrelerin lysate normalleştirmek için de kullanılabilir, ancak hücrelerin tamamen lysed gerekir. DNA içeriği iç kontrol için iyi bir seçenek değildir, çünkü DNA çıkarma prosedürü örneklerde, özellikle de az miktarda DNA içeren örneklerde varyasyonlara neden olabilir.
Reaksiyondan sonra renk değişikliği gözlenmezse, birkaç farklı sorun giderme adımı alınabilir:
1. Numune hazırlama adımını kontrol edin, numuneleri düzgün şekilde işlediğinden emin olun, numuneleri buzda tutun ve birden fazla donma-çözülme döngüsünden kaçının.
2. Bazı örneklersitrat synthase aktivitesi analizi tarafından tespit edilemeyen sitrat synthase çok daha düşük ifade düzeyleri olabilir, çünkü daha yüksek bir protein konsantrasyonu kullanmaya çalışın.
3. Sitrat synthase aktivite teşbi için bazı ticari olarak kullanılabilir kitleri Drosophilaiçin kullanılamaz unutmayın , Bu kitleri memeli sitrat synthase ve memeli sitrat synthase antikor immünyakalama dayalı mitokondriyal sitrat synthase aktivitesi belirlemek çünkü Drosophila sitrat synthase tanımayabilir.
Aynı şekilde, örnekler arasında bir tutarsızlık varsa:
1. Kuyularda kabarcık olmadığından emin olun.
2. Bunun kötü pipetleme tekniğine bağlı olup olmadığını inceleyin.
Her genotip19mitokondri saflaştırma için neredeyse 200 sinek gerektirir saflaştırılmış mitokondri bir kolorimetrik test ile sitrat synthase aktivitesi ölçme aksine, biz doku homojenate veya bütün hücre özleri 16 bir kolorimetrik yöntem ile sitrat synthase aktivitesinin ölçümü için hızlı ve basit bir test için bir protokol salıyoruz16. Her örnek için, aynı gün yumurtadan sadece on sinek gereklidir; her genotipin trilycate örnekleri için 30 sinek gereklidir. Açıklanan protokol sadece Drosophila için değil, aynı zamanda kültürlü hücreler ve memeli dokuları gibi diğer sistemler için de geçerlidir.
Sitrat synthase aktivitesi testinin yanı sıra, mitokondriyal kütleyi ölçmek için başka yöntemler de kullanılabilir. Mitokondrinin diğer yaygın olarak kullanılan kantitatif metotyöntemleri ile karşılaştırıldığında, örneğin qPCR ile mitokondriyal DNA içeriğinin ölçülmesi ve işlevlerine bakılmaksızın tüm mitokondriyi tespit eden Batı lekeleme ile mitokondriyal proteinlerin ölçülmesi gibi, sitrat synthase aktivitesi testi bozulmamış mitokondriyal kütlenin varlığını ölçmek için kullanılır. Mitokondriyal saflaştırma ve özel test ekipmanı16ihtiyacı olan mitokondriyal solunum testinin aksine, sitrat sintaz aktivitesi testi, araştırmacıların tüm hücre ekstresi veya doku homojeni gibi basit numune hazırlığı ile hızlı ölçümler yapmalarına olanak tanır ve mitokondriyal izolasyona gerek yoktur. Bu nedenle, sitrat synthase aktivite testi bozulmamış mitokondriyal kütlenin nicelleştirilmesi için hızlı ve ekonomik bir analizdir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar çıkar çatışması beyan etmezler.
Acknowledgments
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31401013 ve 31471010), Şangay Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu, Şangay Pujiang Programı (14PJ1405900) ve Doğa Bilimleri Vakfı hibe tarafından desteklenmiştir Şangay (19ZR1446400).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid (HEPES) | Sigma-Aldrich | V900477 | |
| 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (TRIZMA Base) | Sigma-Aldrich | V900483 | |
| Acetyl-CoA | Sigma-Aldrich | A2181 | |
| Dithio-bis-nitrobenzoic acid (DTNB) | Sigma-Aldrich | D8130 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | Sigma-Aldrich | V900106 | |
| Oxaloacetate | Sigma-Aldrich | O4126 | |
| Pellet pestle | Sangon | F619072 | |
| Pellet pestle motor | Tiangen | OSE-Y10 | |
| Plate reader | BioTek | Eon | |
| Protein BCA Assay kit | Beyotime | P0010S | |
| Scissors | WPI | 14124 | |
| Triton X-100 | Sangon | A110694-0100 |
References
- Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans. Cell. 157 (4), 897-909 (2014).
- Sarasija, S., Norman, K. R. A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans. Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).
- Oxenoid, K., et al.
- Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers! Frontiers in Genetics. 7, 161 (2016).
- Kim, H. E., et al. Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response. Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).
- Wang, Y., Hekimi, S. Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot. Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).
- Ray, A., Martinez, B. A., Berkowitz, L. A., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Mitochondrial dysfunction, oxidative stress, and neurodegeneration elicited by a bacterial metabolite in a C. elegans Parkinson's model. Cell Death & Disease. 5, e984 (2014).
- Tronstad, K. J., et al. Regulation and quantification of cellular mitochondrial morphology and content. Current Pharmaceutical Design. 20 (35), 5634-5652 (2014).
- Wiegand, G., Remington, S. J. Citrate synthase: structure, control, and mechanism. Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 15, 97-117 (1986).
- Lopez-Lluch, G., et al. Calorie restriction induces mitochondrial biogenesis and bioenergetic efficiency. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (6), 1768-1773 (2006).
- MacInnis, M. J., et al. Superior mitochondrial adaptations in human skeletal muscle after interval compared to continuous single-leg cycling matched for total work. Journal of Physiology. 595 (9), 2955-2968 (2017).
- Gillen, J. B., et al. Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment. PLoS One. 11 (4), e0154075 (2016).
- Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein. Frontiers in Genetics. 5, 216 (2014).
- Mukherjee, S., Duttaroy, A. Spargel/dPGC-1 is a new downstream effector in the insulin-TOR signaling pathway in Drosophila. Genetics. 195 (2), 433-441 (2013).
- Diop, S. B., et al. PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase. Cell Reports. 10 (9), 1572-1584 (2015).
- Rera, M., et al. Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog. Cell Metabolism. 14 (5), 623-634 (2011).
- Wei, P., et al. RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila. Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).
- Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. Methods for studying metabolism in Drosophila. Methods. 68 (1), 105-115 (2014).
- Bosco, G., et al. Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship. Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).
