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Artigo de método

Mantendo culturas laboratoriais de Gryllus bimaculatus, um modelo ortopéde versátil para agricultura de insetos e fisiologia de invertebrados

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DOI:

10.3791/63277

8 de junho de 2022

Neste artigo

Resumo

Este artigo descreve métodos básicos para padronizar fatores importantes como densidade, disponibilidade de ração, fonte de hidratação e controles ambientais para a criação a longo prazo de culturas laboratoriais do grilo comestível, Gryllus bimaculatus.

Resumo

Gryllus bimaculatus (De Geer) é um grilo de grande porte distribuído por toda a África e eurásia do sul, onde é frequentemente colhido como alimento humano. Fora de sua faixa nativa, cultivar G. bimaculatus é viável devido à sua plasticidade dietética, ciclo reprodutivo rápido, falta de necessidade de diapausa, tolerância para criação de alta densidade e robustez contra patógenos. Assim, G. bimaculatus pode ser um modelo versátil para estudos de fisiologia de insetos, comportamento, embriologia ou genética.

Parâmetros culturais, como densidade de estocagem, refugia dentro da gaiola, fotoperíodo, temperatura, umidade relativa e dieta, todos impactam o crescimento, o comportamento e a expressão genética do críquete e devem ser padronizados. Na crescente literatura sobre insetos agrícolas para consumo humano, esses grilos são frequentemente empregados para avaliar as misturas de ração de candidatos derivadas de resíduos de culturas, subprodutos de processamento de alimentos e outros fluxos de resíduos de baixo custo.

Para apoiar experimentos em andamento avaliando o desempenho de crescimento do G. bimaculatus e a qualidade nutricional em resposta aos substratos de ração variável, foi desenvolvido um conjunto abrangente de protocolos padrão para reprodução, manutenção, manuseio, medição e eutanásia em laboratório. Uma ração de críquete padrão da indústria provou ser nutricionalmente adequada e funcionalmente apropriada para a manutenção a longo prazo de estoques de reprodução de críquete, bem como para uso como uma ração de controle experimental. Criando esses grilos a uma densidade de 0,005 grilos/cm3 em gaiolas de polietileno de 29,3 L com cobertura de tela a uma temperatura média de 27 °C em um fotoperiodo de 12 luz (L)/12 escuro (D), com coir de coco umedecido servindo tanto como fonte de hidratação quanto meio de oviposição tem sustentado com sucesso grilos saudáveis ao longo de um período de 2 anos. Seguindo esses métodos, os grilos em um experimento controlado produziram uma massa média de 0,724 g 0,190 g na colheita, com 89% de sobrevivência e 68,2% de maturação sexual entre meia (22 dias) e colheita (65 dias).

Introdução

Como tipificado pelo inseto icônico, a mosca-das-frutas Drosophila melanogaster, o uso de insetos como organismos modelo de laboratório fornece vantagens distintas para estudos em genética, toxicologia e fisiologia1. O pequeno tamanho dos insetos reduz o espaço necessário para as culturas e a quantidade de ração e materiais consumíveis necessários. Muitos insetos se reproduzem rapidamente tornando-os exclusivamente adequados à criação de linhas genéticas especializadas e estudos que requerem a avaliação de múltiplas gerações sucessivas.

Muitos estudos se concentram em insetos holometabolosos como a Droso....

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Protocolo

1. Preparando o substrato de oviposição

NOTA: Coir de coco é um substrato ideal para G. bimaculatus. Para obter métodos detalhados sobre como separar coir do tijolo de coir comprimido e uma nota sobre segurança respiratória, consulte materiais suplementares passo 1.1.

  1. Lave as mãos com água e sabão.
  2. Tare um recipiente limpo em um equilíbrio e pese uma massa de coir de coco seco aproximadamente do tamanho de um punho humano.
  3. Coloque coir em um recipiente vedado e limpo, que pode acomodar a expansão em até 6x do volume original.
  4. Com as mãos limpas, separe suavem....

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Resultados

Dados que demonstram a criação bem-sucedida do críquete desde a eclosão até os 65 dias de idade foram coletados durante um teste de alimentação em setembro de 2021. Os grilos foram cultivados a partir de ovos seguindo as etapas 1.1.1-2.6.1 desses protocolos, e seis gaiolas de réplica foram abastecidas com 24 grilos aleatórios de 22 dias de idade (terceira instar) seguindo o passo 2.7 acima. Grilos foram então criados em condições de sala ambiente; no entanto, devido a uma unidade de manuseio do ar defeituosa, a temperatu.......

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Discussão

A simplicidade dessa abordagem para a criação de críquete pode beneficiar uma série de áreas de pesquisa e representa um modelo genérico para a criação de críquete bem-sucedida, facilmente adaptável a uma variedade de necessidades experimentais. Comparado a vários outros estudos de G. bimaculatus, o tamanho adulto do corpo individual é menor e a maturação é mais lenta14, o que atribuímos à temperatura de criação abaixo do ideal imposta a nós por circunstância. Os métodos descritos acima f.......

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse para declarar.

Agradecimentos

O financiamento para este projeto foi possível através de subvenções internas da Universidade de Wisconsin-Madison. Sinceros agradecimentos a Kevin Bachhuber da Bachhuber Consulting Inc. pelo acesso ao seu guia inédito para a criação comercial de críquete e a Michael Bartlett Smith por sua ajuda no refino e solução de problemas desses métodos.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Caixote de 31 qt (29,3 L) com tampa de pressãoHOMZ3430CLBLUsado para abrigar reprodutores
de 3 andares/12 bandejas Suporte de Luz de CrescimentoFischer ScientificNC1938548
50-gal (189.27L) com tampaSterilite#14796603Usado como contenção secundária ao manusear grilos
Cilindro graduado de polipropileno de 50 mLFischer ScientificS95171
Caixote de 7,5 qt (7,1 L) com tampa de pressãoHOMZ3410CLBLUsado para abrigar estoque expirado
Accuris 500 g x 0,01 g BalanceFabricado pela Accuris, uma subsidiária da Benchmark ScientificW3300-500Comprado da Dot Scientific através do serviço de compra do sistema da Universidade de Wisconsin "ShopUW+"
Ace Premier 1 Inch Flat Chip BrushAce Hardware #1803261
Bel-Art SP Scienceware garrafa de lavagem de água deionizadaFischer Scientific03-421-160 
Tela de janela de alumínio brilhante Descartáveis PhiferUNSPSC# 11162108Tamanho de Malha 18 x 16"
5.5 oz com tampasWal-MartN/A
Água
Diablo 4-4/8" x 13 TPI Lâmina de Serra Tico-Tico Bi-Metal de Acabamento Ultra FinoHome Depot#313114935
Egg Filler Flats-Paper, 12 x 12"UlineS-5189
Placas de Petri da Fisherbrand com Tampa Transparente 100 x 15mmFischer ScientificFB0875714
Placas de Petri da Fisherbrand com Tampa Transparente 60 x 15mmFischer ScientificFB0875713A
Georgia-Pacific Envision Toalhas de Papel MarromHome Depot#205675843
Infinity Tough Guy bastões de cola quente de alto desempenhoInfinity BondInfinity IM-Tough-Guy-12
Mazuri Cricket DietLand O' Lakes InternationalSKU#  3002219-105
Stanley TimeIt Twin 2-outlet Grounded Mechanical 24 Hour TimerWal-MartN/A
Solo de Recuperação Vermont Organics 11 lb Bloco de CoirHome Depot#300679904
Copos de Porção de Plástico Descartáveis Deionizada

Referências

  1. Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system. Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).
  2. Merkel, G. The effects of temperature and food quality on the larval development....

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Reimpressões e permissões

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