Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

שמירה על תרביות מעבדה של Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות

Published: June 8, 2022 doi: 10.3791/63277
Automatic Translation
1, 2, 1
1Department of Entomology, University of Wisconsin-Madison, 2Global Health Institute, University of Wisconsin-Madison

Summary

מאמר זה מתאר שיטות בסיסיות לתקנון גורמים חשובים כגון צפיפות, זמינות הזנה, מקור הידרציה ובקרות סביבתיות לגידול ארוך טווח של תרביות מעבדה של הקריקט האכיל, Gryllus bimaculatus.

Abstract

גרילוס בימקולטוס (שם מדעי: Gryllus bimaculatus ) הוא מין של קריקט גדול גוף המופץ ברחבי אפריקה ודרום אירואסיה, שם הוא נקטף לעתים קרובות בטבע כמזון אנושי. מחוץ לטווח הטבעי שלו, culturing G. bimaculatus הוא אפשרי בשל הפלסטיות התזונתית שלו, מחזור הרבייה המהיר, חוסר הדרישה לדיאפאוזה, הסבילות לגידול בצפיפות גבוהה וחוסן מפני פתוגנים. לפיכך, G. bimaculatus יכול להיות מודל רב-תכליתי למחקרים של פיזיולוגיה של חרקים, התנהגות, אמבריולוגיה או גנטיקה.

פרמטרים תרבותיים, כגון צפיפות גרב, רפוגיה בתוך הכלוב, פוטופריוד, טמפרטורה, לחות יחסית ותזונה, כולם משפיעים על צמיחת הקריקט, ההתנהגות וביטוי הגנים ויש לתקנם אותם. בספרות המתפתחת על גידול חרקים למאכל אדם, צרצרים אלה משמשים לעתים קרובות כדי להעריך תערובות מזון מועמדות שמקורן בשאריות יבול, תוצרי לוואי של עיבוד מזון וזרמי פסולת אחרים בעלות נמוכה.

כדי לתמוך בניסויים מתמשכים המעריכים את ביצועי הצמיחה של G. bimaculatus ואת האיכות התזונתית בתגובה למצעי הזנה משתנים, פותחה מערכת מקיפה של פרוטוקולים סטנדרטיים לרבייה, תחזוקה, טיפול, מדידה והמתת חסד במעבדה. הזנת קריקט סטנדרטית בתעשייה הוכיחה את עצמה כראויה מבחינה תזונתית ומתאימה מבחינה תפקודית לתחזוקה ארוכת טווח של מלאי גידול קריקט, כמו גם לשימוש כמזין בקרה ניסיוני. גידול צרצרים אלה בצפיפות של 0.005 צרצרים/ס"מ3 בכלובי פוליאתילן 29.3 ליטר בטמפרטורה ממוצעת של 27 מעלות צלזיוס על פוטופריוד 12 בהיר (L)/12 כהה (D), עם קור קוקוס לח המשמש הן כמקור הידרציה והן כמדיום oviposition, שמר בהצלחה על צרצרים בריאים לאורך טווח של שנתיים. בעקבות שיטות אלה, צרצרים בניסוי מבוקר הניבו מסה ממוצעת של 0.724 גרם 0.190 גרם בקציר, עם 89% ניצולים ו-68.2% התבגרות מינית בין מלאי (22 יום) לקציר (65 ימים).

Introduction

כפי שאפיין את החרק האייקוני, זבוב הפירות Drosophila melanogaster, השימוש בחרקים כאורגניזמים מודל מעבדה מספק יתרונות מובהקים למחקרים בגנטיקה, טוקסיקולוגיה ופיזיולוגיה1. גודלם הקטן של החרקים מקטין את השטח הדרוש לתרביות ואת כמות המזון והחומרים המתכלים הנדרשים. חרקים רבים מתרבים במהירות והופכים אותם למתאימים באופן ייחודי ליצירת קווים גנטיים מיוחדים ומחקרים הדורשים הערכה של דורות עוקבים מרובים.

מחקרים רבים מתמקדים בחרקים הולומטבוליים כמו דרוזופילה, שמפגינים מטמורפוזה מלאה וגורים. עם זאת, דגמים אחרים זמינים, כולל Gryllus bimaculatus (דה גיר), קריקט השדה בעל שני המקומות. G. bimaculatus הוא חרק פטרומטבולי שעובר בין 7 ל -11 אינסטארים נימפאליים לפני שהוא מגיע לבגרות מינית2. קריקט זה מציג מגוון רחב של התנהגויות הקשורות לברירה מינית, כולל צעידה, תצוגות טריטוריאליות ושמירה על בני זוג3. צרצרים לא בוגרים אינם דומים לזחלים של מיני חרקים הולומטבוליים בכך שהם, בדומה לצעירים רבים של paurometabolous, מסוגלים לחדש גפיים אבודות ופגומות במהלך אקדיסיס4. בנוסף, הגנום המרוצף במלואו של G. bimaculatus פורסם בשנת 20215. מאפיינים אלה הופכים את הצרצרים הללו למושכים כמטרה למחקר בסיסי.

צרצרי שדה דו-נקודתיים מגודלים באופן נרחב למאכל אדם ולמזון לבעלי חיים. היקף הפעולות הללו הוא לעתים קרובות הרבה יותר גדול מאשר עבור מחקר מעבדה 6,7. למרות ההבדל בקנה המידה, האתגרים העומדים בפני החוקרים חופפים מאוד לאלה שנתקלים בהם חקלאי קריקט מסחריים. שיקולים אלה מתכנסים בהקשר של מחקר מבוסס מעבדה שמטרתו לשפר את ייצור החרקים האכילים. ככל שתעשיית החרקים האכילים ממשיכה להתפתח ולצמוח, אופטימיזציה של תשומות מזון ואינספור היבטים אחרים של הייצור היא המטרה העיקרית8. למחקרי מעבדה המוכיחים שיפורים מדודים ביעילות הגידול, בשורדים או בזמן הייצור של צרצרים אלה יש פוטנציאל לסייע בהגדלת הרווחיות של פעולות גידול הקריקט בטווח הארוך.

פרוטוקולי גידול סטנדרטיים מאפשרים השוואה מדוקדקת יותר בין מחקרים שבחנו אופטימיזציה של גידול. עד כה פורסמו מעט פרוטוקולים מעמיקים לגידול G. bimaculatus במעבדה. פרוטוקול אידיאלי ישקף את התנאים שבהם נתקלים בפעולות חקלאיות קריקט בעולם האמיתי, תוך שמירה על התנאים המבוקרים בקפידה הדרושים למדידה מדויקת של שינויים בביצועי הצמיחה הנובעים מטיפולים ניסיוניים והדגשת אסטרטגיות להפחתת סיכונים. השיטות המתוארות במאמר זה פותחו על סמך פרוטוקולים, טכניקות ומכשירים שפורסמו ששימשו לגידול מגוון מיני קריקט במגוון רחב של קני מידה של ייצור מעבדתי ומסחרי 2,9,10,11,12. שיטות אלה מבוססות גם על מספר מקורות שאינם עוברים ביקורת עמיתים, כולל עלונים טכניים שלא פורסמו ותקשורת אישית עם חקלאי קריקט מסחריים בצפון אמריקה. פרוטוקול זה פותח מתוך כוונה להקל על הקמת תרביות מעבדה של G. bimaculatus במיוחד לשימוש בניסויים הקשורים לחקלאות חרקים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. הכנת מצע ההטיה

הערה: קויר קוקוס הוא מצע אוביפוזיציה אידיאלי עבור G. bimaculatus. לשיטות מפורטות כיצד להפריד בין coir מלבני coir דחוסות ולהערה על בטיחות הנשימה, ראה חומרים משלימים שלב 1.1.

  1. לשטוף ידיים עם מים וסבון.
  2. טארקו מיכל נקי על איזון ושקלו מסה של קוקוס יבש בגודל של אגרוף אנושי בערך.
  3. מכניסים את הקויר למיכל אטום ונקי, שיכול להכיל הרחבה של עד פי 6 מהנפח המקורי.
  4. בידיים נקיות, מפרקים בעדינות גושים של קור מהחתיכה שהוסרה מהגוש הגדול יותר.
  5. באמצעות גליל מדורג של 50 מ"ל, מדוד את הנפח הנכון של מים שעברו דה-יוניזציה (DI) כדי להשיג יחס של 5:1 לפי מסה של חמישה חלקים מים לחלק אחד של קויר יבש.
  6. הוסיפו את מי ה-DI הנמדדים באיטיות, והוסיפו לחות שווה לכל חלקיקי הקויר. תקעו גושים באופן ידני כדי להבטיח הידרציה אחידה.
  7. מחדש את המיכל שבו שוקלים בעבר את הקויר.
  8. שוקלים 75 גרם של קואר רטוב.
  9. מעבירים 75 גרם של הקויר הרטוב לתוך צלחת פטרי 100 מ"מ על 15 מ"מ באמצעות כף פלסטיק נקייה כדי להבטיח שהקואר מפוזר באופן שווה סביב תחתית המנה ושאין גושים.
  10. תייג את הצד של צלחת הפטרי בנייר דבק עם תווית המציינת את מושבת הלידה ואת תאריך אירוע איסוף הביצים.
  11. יש למדוד 45 מ"ל נוספים של מי DI בצילינדר מדורג.
  12. הוסיפו מים באופן שווה על פני השטח של הקויר הארוז בצלחת הפטרי כדי להבטיח הידרציה אחידה. יש לוודא כי הקויר רווי עד כדי כך שהמים אוגרים כ-1/4 מהדרך במעלה דפנות המיכל.
  13. לאחר שארזו את צלחת הפטרי, אטמו את הקויר הרטוב שנותר בכלי אטום לאחסון בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
    הערה: בעקבות השיטות שנקבעו על ידי מאמר זה, G. bimaculatus אנשים יגיעו לבגרות מינית לאחר ממוצע של 58 ימים לאחר oviposition.
  14. איסוף ביצים
    1. מקם את מצע הצרצרים המיובש בכלובים המכילים את המלאי ההורי הרצוי של צרצרים רחוק ככל האפשר מההזנה בשל הפוטנציאל של צרצרים להעביר באופן מכני גרגירי מזון על מצע ההזנה.
    2. תעד את התאריך והשעה.
      הערה: צפיפות העבודה הסטנדרטית עבור מושבות קריקט רבייתיות שגודלו בשיטות אלה היא n = 150 פרטים בוגרים. בצפיפות זו, חלון אוביפוזיציה של 24 שעות יניב בין 800 ל-1,500 ביצים, בהתאם לגיל המושבה, למאמץ ההטלה הקודם וליחס המין של כלוב האב.
    3. הניחו על משטח העבודה כלי קיבול פסולת קטן הניתן לאוטוקלאבים כדי לקחת בחשבון את סיכון ההכלה הנשקף על ידי טיפול וניקוי של מצעי oviposition עשירים בביצים.
    4. מניחים כלוב פלסטיק נקי וריק בנפח 29.3 ליטר על הספסל ליד כלי הקיבול לאשפה כדי לשמש ככלוב המקבל של מצע הביצים העשיר בביצים.
    5. הניחו את כלוב ה-29.3 ליטר המכיל את מלאי הקריקט ההורי ואת מצע ה-oviposition בצד הנגדי של כלי קיבול האשפה מהכלוב הריק.
    6. לאחר השעה 24 שעות, הסירו את מצע הקריקט מכלוב הקריקט האב ואתרו אותו מעל כלי פסולת אוטוקלאבי.
    7. בדקו את החלק העליון של מצע ה-oviposition עבור חלקיקים כלשהם של frass או הזנה שייתכן שהצרצרים בעטו על פני השטח של הקויר.
      הערה: כל חומר, שאינו מסת ביצה או קויר, יכול לגרום להיווצר עובש על המצע במהלך הדגירה.
    8. מוציאים מזהמי קואר לתוך כלי הפסולת בעזרת כף מדידה נקייה או כף פלסטיק.
    9. מכניסים את כף הפלסטיק לכלי הקיבול של הפסולת.
    10. מניחים את מצע האוביפוזיציה המנוקה בכלוב הנקי בנפח 29.3 ליטר.
    11. מניחים את הכלוב באינקובטור שנקבע ל-27 מעלות צלזיוס בלחות יחסית של 60% על פוטופריוד D/12 h L של 12 שעות.
    12. החזירו את הכלוב המכיל את מלאי הרבייה למיקום המקורי ונקו את כל הפריטים ממשטח העבודה.
    13. הכניסו את כלי הקיבול לפסולת במקפיא במתקן המוקדש לאחסון פריטים שעלולים להיות מזוהמים בביצי קריקט.
    14. לחטא את משטח העבודה עם תמיסת אקונומיקה של 10% ולתת לו לשבת במשך 60 שניות.
    15. נגבו את משטח העבודה יבש במגבת נייר נקייה. פתחו את המקפיא והשליכו את מגבת הנייר לכלי הקיבול לפסולת.
  15. ערפול וניטור מצעי ביצים מדי יום
    הערה: לשיטות המשמשות לכיול נפח הערפל המועבר על-ידי בקבוק תרסיס, ראה חומרים משלימים שלב 1.2.
    1. מקם בקבוק תרסיס מעל מצע ההטלה כך שהמים המבוטאים יתפזרו באופן שווה על פני השטח של המצע.
    2. בצע את מספר מפעילי המשאבה המחושבים בשלב החומרים המשלימים 1.2 עבור כל מצע oviposition מדי יום במשך 11 ימים רצופים.
    3. בדוק כל מצע oviposition מדי יום, ניטור עבור צמיחת עובש נימה על פני השטח של coir.
    4. אם נצפתה צמיחה פטרייתית, השתמשו בכפית נקייה או בסקופולה כדי להסיר כתמים של עובש על פני השטח.
    5. השליכו את הכלי ואת הקויר שהוסר במיכל הפסולת האוטוקלבי המאוחסן במקפיא המתקן.
      הערה: לא ברור אם התבנית משפיעה לרעה על התפתחות הקריקט.
    6. ביום ה-11 שלאחר ההדחה, התחילו להתבונן מקרוב במצע של צרצרים צעירים.
      הערה: ב 27 °C (74 °F), הביצים של G. bimaculatus דורשים 11-13 ימים כדי לבקוע.
  16. הקמת כלובי לידה
    1. בחר שני קרטוני ביצים מסחריים בגודל 30.8 ס"מ על 30.8 ס"מ (12 אינץ' x 12 אינץ') שאינם בשימוש. בעזרת סכין שירות או גזירה חזקה, חתכו אותם לשש רצועות נפרדות ברוחב 10.1 ס"מ (4 אינץ') בגודל שווה. מברישים את הקצוות החתוכים בידיים כדי להסיר חלקיקים משתלשלים של קרטון.
    2. מניחים את ששת חלקי הקרטון הנפרדים בגודל 10.1 ס"מ על 30.8 ס"מ (4 אינץ' x 12 אינץ') אנכית לתוך החלק התחתון של הכלוב כאשר הציר הארוך יותר של הקרטון משתרע על הציר האופקי הצר יותר של כלוב 29.3 ליטר. הניחו חתיכת קרטון שביעית שטוחה על פני החלק העליון של ששת החלקים הזקופים.
    3. בחר שלוש חתיכות של מגבת נייר חומה מחוספסת בערך 25 ס"מ x 25 ס"מ. מקפלים כל אחד לשניים. מניחים שניים כך שהם מכסים את החלק העליון של הצד הפרוקסימלי של מבנה הקרטון. מניחים אחד מעל ערימת הקרטונים בצד הדיסטלי.
    4. ביום ה-11 שלאחר ההטלה, הזיזו את מצע ה-oviposition לפינה הימנית הפרוקסימלית של הכלוב.
  17. טיפול בכוכבים מוקדמים
    הערה: ביום ה-14 שלאחר ההטלה, רוב הביצים הקיימות יבקעו ונימפות קריקט בשלב מוקדם ידרשו מזון ומים. צרצרים צעירים אינם מסוגלים לשבור את מתח הפנים של טיפות מים ויכולים לטבוע אם מים נאגרים בסביבתם. עם זאת, הם גם רגישים לייבוש. מתן לחות יחסית עקבית של כ-60% בשלב זה של התפתחות חשוב להבטחת ההישרדות.
    1. כאשר מתבוננים בפתח, מערפלים את מגבות הנייר המונחות מעל החלק העליון של הקרטונים בשלב 1.4.3 עד שהם נרטבים אך לא שופכים מים באופן פעיל.
    2. נגבו היטב את שני צידי מכסה צלחת פטרי 100 מ"מ עם 70% אתנול והניחו לו להתייבש. השתמש בו ככלי הקיבול שבו יימסר הזנת קריקט.
      הערה: צרצרים של כוכב ראשון דורשים חלקיקי הזנה קטנים יותר מאשר צרצרים בשלבי ההתפתחות הבאים. הזנה עדינה זו צריכה להינתן לצרצרים במשך 20 הימים הראשונים שלאחר הופעתם.
    3. מכניסים 50 גרם מההזנה לתוך בלנדר 60 וואט במנה אחת וטחינה ב-10,000 סל"ד למשך דקה אחת.
    4. יש למדוד 1 גרם מההזנה ולנער אותה על מכסה צלחת הפטרי בכלוב. בעזרת הקצה הנקי של כף או כף מדידה, פזרו את ההזנה בצורה אחידה ככל האפשר על תחתית המנה.
    5. החלף את ההזנה כל יומיים. יש להשתמש בקצה הכף כדי להבריש צרצרים מצלחת ההזנה לפני הסרתה. השליכו את ההזנה הישנה במיכל הפסולת הניתן להפרדה אוטומטית.
    6. עקוב אחר צמיחת עובש בהזנה. אם ההזנה מתחילה להיראות לבנה או ירקרקה, השליכו את צלחת הפטרי והאכילו מיד.
    7. לאחר 14 יום, השתמשו במכחול באורך 2.54 ס"מ (1 אינץ') כדי להסיר צרצרים הנצמדים למצע הקויר המולד על ידי הברשה של כל הצרצרים ממשטח הקויר והצדדים של צלחת הפטרי לתוך הכלוב.
    8. מניחים את מצע הפסולת שהוסר לתוך כלי הקיבול של הפסולת האוטוקלבית ומאחסנים אותו במקפיא עד לאוטו-אקלים.
    9. החליפו את מצע הלידה בצלחת קויר טרייה להכנת הידרציה בשלבים 1.1.5-1.1.1.9.
    10. השתמשו בבקבוק שטיפת מים DI כדי להוסיף מים עד שפני השטח של הקויר מנצנצים אך אינם מתמזגים.
      הערה: צפיפות קריקט משפיעה מאוד על ביצועי הצמיחה ב- G. bimaculatus13. שמירה על מלאי הרבייה בצפיפות מופרזת עלולה להכניס השפעות אפיגנטיות לא רצויות הנגרמות על ידי צפיפות לניסויים שבהם נעשה שימוש בצאצאיהם9. יש "לדלל" את הצרצרים מהצפיפויות הגבוהות העולות ממצעי האוביפוזיציה ולהתפזר לצפיפויות העומדות בתקן של 0.005 צרצרים/ס"מ3 של שטח.

2. טיפול בכוכבים משלושה עד מבוגרים

  1. הקמת כלובים
    הערה: לפרטים על הטכניקה לבניית המכסה המוקרן, ראה חומרים משלימים שלב 1.3.1.
    1. חזור על שלב 1.4.1.
    2. התקינו חמש חתיכות קרטון ביצים חתוכות בקצה הדיסטלי של הכלוב, כך שהקעורות בצורת ביצה פונות החוצה. יש לוודא שהקצוות הקצרים נמצאים בערך בצידי הכלוב, שהצד הארוך יושב שטוח על הקרקעית, ויש כ-3 ס"מ של רווח בין כל פיסת קרטון.
    3. הניחו את פיסת הקרטון החתוכה האחרונה על גבי חלקי הקרטון הזקופים, כגון הגג על הבית, כפי שמוצג באיור משלים S1.
    4. בצע את השלבים 1.1.8-1.1.13 כדי להכין את מצעי ההידרציה.
    5. הניחו את מצע ההידרציה בפינה הימנית הפרוקסימלית של כלוב הקריקט כפי שמוצג באיור משלים S2.
    6. השתמשו בבקבוק שטיפה כדי להוסיף 6-10 מ"ל של מי DI עד שמשטח הקויר נראה רטוב ורפלקטיבי, אך הקויר אינו שקוע במלואו.
      הערה: פני השטח צריכים להיראות גומות קלות, כאשר מתח פני השטח גורם למים לעקוב אחר קווי המתאר של הקויר.
    7. הפכו את המכסה של צלחת פטרי 100 מ"מ והניחו אותה על הצד השמאלי הפרוקסימלי של הכלוב. הוסף 2-3 גרם של הזנת קריקט סטנדרטית כפי שמוצג באיור משלים S2.
  2. שינוי צפיפות המושבה
    הערה: בצע שלב זה במשך 20 יום לאחר הבקיעה או כאשר הצרצרים מגיעים למסה ממוצעת של 0.01 גרם.
    1. על משטח העבודה, הניחו מיכל גדול שיכול להכיל את תוכנית הרצפה של שלושה כלובים בנפח 29.3 ליטר העומדים זה לצד זה.
      הערה: זוהי הכלה משנית ותשלוט בצרצרים הבורחים במהלך העברתם ממושבה אחת לאחרת.
    2. הסר את המושבה המקורית ממתלה הגידול והנח אותה על משטח העבודה.
    3. בצד ימין של המושבה המקורית, הניחו כלוב ריק באותו גודל.
    4. בצד ימין של הכלוב הריק, הניחו כלוב שהוקם לפי מדרגות 2.1.1-2.1.7.
    5. בדוק כדי לוודא שהצרצרים אינם נצמדים לחלק התחתון של המכסה המוקרן של הכלוב המכיל את הצרצרים. אם נצפתה, הקש על החלק העליון של הכלוב כדי לעקור אותם.
    6. פתחו את המכסה המוקרן של הכלוב המכיל את הצרצרים.
    7. בתנועה אחת עדינה וחלקה, מעבירים את קרטון "הגג" ואת כל הצרצרים הנצמדים לקווי המתאר שלו לתוך הכלוב האמצעי.
    8. ברגע שהקרטון נמצא בתוך הכלוב האמצעי, התסיסו בעדינות את הקרטון על הצדדים כדי לעקור את כל הצרצרים.
    9. בדיקה חזותית שכל הצרצרים היטלטלו חופשי לפני שהם מחזירים את פיסת הקרטון לצד הפרוקסימלי של כלוב המקור כדי לאפשר לצרצרים הנותרים להיצמד לקרטון.
    10. חזור על שלבים 2.2.8-2.2.9 עם כל חתיכות הקרטון בכלוב, עובד ברצף מקדימה לחלק האחורי של הכלוב המקורי עד שכל הצרצרים הועברו לכלוב האמצעי.
    11. הטה בעדינות את הכלוב האמצעי המכיל את הצרצרים כך שכל הצרצרים הכלולים מופנים לעבר הפינה התחתונה.
    12. הרימו את הכלוב המכיל את הצרצרים מעל כלוב הנמען.
    13. הטה באיטיות את כלוב התורם כך שהצרצרים יתחילו להשיג רכישה בצדדים ויוכלו לנוע באופן מבוקר אל מחוץ למסה בפינה התחתונה כפי שמוצג באיור משלים S3.
    14. אם הצרצרים מתקדמים מהר מדי, התאימו את הזווית שבה מוחזק הכלוב האמצעי, מה שגורם לצרצרים ליפול לאחור.
    15. בזמן שהכלוב מוטה, השתמשו במברשת באורך 2.54 ס"מ (1 אינץ') כדי לכוון את הצרצרים לכלוב המקבל, וספרו כל אחד מהם עד שהספירה הכוללת תהיה שווה ל-150 פרטים. השתמשו במברשת כדי להרתיע את אלה שמתקדמים מהר מדי לספירה מדויקת.
    16. תייג את כלוב הקריקט החדש עם תאריך, מלאי הורי ומספר הצרצרים הכלולים.
    17. המתת חסד הומני של עודפי צרצרים שעדיין נמצאים בתחתית המכלים האמצעיים והמקוריים על ידי הכנסת המיכל כולו למקפיא בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות.
    18. בדוק את כלוב המקור כדי לוודא שכל הצרצרים הועברו.
    19. מקם את כלובי הקריקט על מדפי גידול צמחים 25 ס"מ מתחת למכסי אדים בהירים המכילים אורות פלורסנט בספקטרום מלא המוגדרים לטיימר חיצוני ברמה ביתית המתוכנת לשמור על פוטופריוד L/D של 12 שעות. ראה איור משלים S4.
    20. מעבירים את כל הצריפים, הכלים של מצע הידרציה ומזון מנוצלים, מגבת נייר, אקסוביה וצרצרים מתים שנותרו בכלוב המקור לתוך כלי קיבול הפסולת הניתן לאוטוקלאבים.
    21. אלא אם כן יש לאחסן את הפסולת באופן מיידי, אחסנו אותה במקפיא במתקן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
    22. בדקו את הרצפה, את בגדי העובדים, את כלוב ההכלה המשני ואת משטח העבודה לאיתור צרצרים נמלטים.
    23. יש לחטא את משטח העבודה ואת כלוב ההכלה המשני בעזרת תמיסת אקונומיקה של 10%, ולהשליך את מגבות הנייר לכלי הקיבול של הפסולת האוטוקלבית.
  3. האכלה והשקיה
    1. פתחו את מיכל אחסון ההזנה האטום ומלאו ריקה של 100 מ"ל עם הזנת קריקט. הושיטו יד לכל מושבה והפקידו רבע מהמזון המוחזק בכוס למכסה צלחת פטרי המחזיק את ההזנה.
    2. כדי להשקות צרצרים, הכינו צלחת פטרי של קויר בעקבות שלבים 1.1.9-1.1.13.
    3. הגדל את קצב ההזנה בהתאם לשיעור הצריכה כדי להבטיח זמינות של הזנת ad libitum .
      הערה: הביקוש לפיד קריקט משתנה במהלך הפיתוח.
  4. העברת צרצרים לכלובים נקיים
    1. מעבירים את הצרצרים לכלובים נקיים כל שבועיים. שכפלו את סידור הכלובים משלבים 2.2.1-2.2.4
      הערה: כמויות משמעותיות של פראס יצטברו בקעורים של קרטוני הביצים.
    2. העברת צרצרים לכלובים נקיים, לאחר שלבים 2.2.5-2.2.23.
    3. תמרן בעדינות את הקרטונים כך שרוב הצרצרים ייפלו לתוך כלוב המקור תוך מתן אפשרות לצרצרים להיאחז בקרטון במהלך חזרה על צעדים 2.2.7-2.2.10.
    4. השתמשו במברשת או בכף פלסטיק כדי לעודד את כל הצרצרים הלכודים בפרשה לעבור מהכלוב האמצעי לכלוב נקי.
    5. בדוק את כלוב המקור כדי לוודא שכל הצרצרים הועברו.
    6. מעבירים את כל הצריפים, הכלים של מצע הידרציה ומזון מנוצלים, מגבת נייר, אקסוביה וצרצרים מתים שנותרו בכלוב המקור לתוך כלי קיבול הפסולת הניתן לאוטוקלאבים.
    7. אלא אם כן יש לאחסן את הפסולת באופן מיידי, אחסנו אותה במקפיא במתקן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
    8. בדקו את הרצפה, את בגדי העובדים, את כלוב ההכלה המשני ואת משטח העבודה לאיתור צרצרים נמלטים.
    9. יש לחטא את משטח העבודה ואת כלוב ההכלה המשני עם תמיסת אקונומיקה של 10%, ולהשליך מגבות נייר בכלי קיבול לפסולת אוטוקלאבית.
  5. הקמת כלובים ניסיוניים
    הערה: כלובי ניסוי הם מיכלי פלסטיק המאכלסים פחות צרצרים. המערך שלהם זהה לכלובים של 29.3 ליטר המכילים מלאי רבייה אך מסתמכים על מיכלים של 7.1 ליטר המצוידים בכלים קטנים יותר של מים, מזון ומכילים שטח פנים מופחת של קרטון ביצים.
    1. מניחים שישה חתיכות קרטון בגודל 10.1 ס"מ על 15.4 ס"מ (4 אינץ' x 6 אינץ') לתוך הקצה הדיסטלי של כל כלוב ניסיוני כאשר הצירים הארוכים של הקרטונים משתרעים על פני רוחב הממד הצר של הכלוב והצירים הקצרים של הקרטונים המכוונים לכיוון המכסה והרצפה.
    2. ארזו 10 גרם מתערובת העבודה של הקויר הלח לתוך צלחת פטרי.
    3. השתמשו בבקבוק שטיפה המכיל מי DI כדי להוסיף כ-15 מ"ל של מי DI, או עד שנוצר מניסקוס על פני השטח של הקויר.
    4. הפוך את המכסה של צלחת פטרי 60 מ"מ x 15 מ"מ כדי להחזיק את ההזנה.
      הערה: קצב ההזנה עשוי להשתנות לאורך כל תקופת הניסוי. להליך האקראיות והגרב של קריקט הכלוב הניסיוני, ראו חומרים משלימים שלב 1.4.
  6. הפסקת חרקים
    1. כאשר הצרצרים אינם נחוצים עוד לרבייה או לשימוש ניסיוני, בצע את שלב 2.2.17.
    2. כאשר הצרצרים מתים, מוציאים את הכלוב מהמקפיא. הסר את המכסה והעביר את כל החומרים הכלולים לכלי קיבול לפסולת הניתנת לטיפול אוטומטי. מעבירים את הפסולת בחזרה למקפיא עד לאוטוקלאב.
    3. לטבול את הכלוב הריק לתוך תמיסת אקונומיקה 10% ולאפשר לו לשבת לפחות 5 דקות.
    4. שטפו את הכלוב הריק במי ברז קרים כדי להסיר את שאריות האקונומיקה, תוך שימת לב מיוחדת לתעלות בתחתית המיכל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

נתונים המוכיחים גידול קריקט מוצלח מבקיעה לגיל 65 ימים נאספו במהלך ניסוי הזנה בספטמבר 2021. צרצרים גודלו מביצים בעקבות שלבים 1.1.1-2.6.1 של פרוטוקולים אלה, ושישה כלובים משוכפלים היו מלאים ב-24 צרצרים אקראיים בני 22 יום (כוכב שלישי) בעקבות שלב 2.7 לעיל. צרצרים גודלו אז בתנאי חדר סביבה; עם זאת, בשל יחידת טיפול אוויר מתקן לא תקינה, טמפרטורת החדר הממוצעת הייתה 25 ± 1 מעלות צלזיוס ב -20% לחות יחסית במקום 27 מעלות צלזיוס המוצעות. מסת הקריקט נמדדה פעמיים בשבוע בין 22 ל-65 ימים לאחר הבקיעה. התוצאות מניסוי זה מתוארות להלן ומוצגות כאמצעים פלוס או מינוס סטיית תקן.

הנתונים המוצגים באיור 1 ובאיור 2 מייצגים את ששת הכלובים המשוכפלים שקיבלו את ההזנה הסטנדרטית המתוארת בפרוטוקול זה. צרצרים היו מלאים מאוכלוסייה עם מסה ממוצעת של 21 ± 9 מ"ג. בסוף הניסוי, המסה הממוצעת של כל הצרצרים הצעירים והבוגרים המשולבים הייתה 0.724 גרם ± 0.190 גרם (איור 1). מכיוון ש - G. bimaculatus הוא דימורפי מבחינה מינית, אנו מדווחים גם על מסה בוגרת לפי מין. יחס המינים בקציר היה 51% נשים. מתוך 30 זכרים בוגרים שנכחו בגיל 65 ימים עם סיום הניסוי, המסה הממוצעת הייתה 0.721 גרם ± 0.123 גרם. מתוך 58 הנקבות הבוגרות שנכחו בגיל 65 ימים, המסה הממוצעת הייתה 0.841 גרם ± 0.112 גרם (איור 2). שיעור הניצולים בין המלאי לקציר היה 89% ונמדד מדי שבוע על ידי ספירתם הכוללת של כל הצרצרים הבודדים בכל הכלובים. ביום ה-65, 68.2% מכלל הצרצרים הגיעו לכוכב הבוגר (איור 2).

Figure 1
איור 1: מסה ממוצעת של צרצרים בודדים 22-65 ימים לאחר הבקיעה. סורגים מייצגים רביעיות של מסת קריקט ממוצעת על ידי כלוב, n = 6 כלובים. כל הצרצרים נספרו ונשקלו 2 פעמים בשבוע, למעט בשבוע אחד של הניסוי, שבו הם נשקלו רק פעם אחת. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

Figure 2
איור 2: מסת קריקט בוגרת ממוצעת לפי מין בסוף הניסוי. צרצרים זכרים n = 30, צרצרים נקביים n = 58. סורגים מייצגים קוונטילים של מסה ממוצעת; 'x' מייצג מסת קריקט ממוצעת לפי מין. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

חומרים משלימים: (1) קויר קוקוס ובטיחות נשימתית, (2) הסרת חומר קויר קוקוס, (3) כיול אספקת ערפל, (4) בניית מכסה מוקרן, (5) גרב כלוב ניסיוני, (6) אקראיזציה של צרצרים לכלובים, (7) שיטות המשמשות לניתוח הזנה. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

איור משלים S1: מבט מהצד של כלוב הקריקט המכיל סידור נכון של קרטון, מזון וקויר קוקוס. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

איור S2 משלים: מבט למעלה על צלחות פטרי המכילות קואר קוקוס והזנת קריקט הממוקמות בתחתית הכלוב. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

איור משלים S3: צרצרים מועברים מתחתית כלוב לכלוב חדש על ידי הטיה איטית כמתואר בשלבים 2.2.11-2.2.2.13. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

איור משלים S4: כלובים המכילים צרצרים הממוקמים על מדפי גידול מוארים. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

טבלה משלימה S1: (1) ניתוחים תזונתיים של מזון מסחרי, (2) רשימת מרכיבי ההזנה של היצרן. אנא לחץ כאן כדי להוריד טבלה זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הפשטות של גישה זו לגידול קריקט יכולה להועיל למגוון תחומי מחקר ומייצגת תבנית גנרית לגידול קריקט מוצלח, הניתנת להתאמה בקלות למגוון צרכים ניסיוניים. בהשוואה למספר מחקרים אחרים על G. bimaculatus, גודל הגוף הבודד המבוגר קטן יותר וההתבגרות איטית יותר14, אותה אנו מייחסים לטמפרטורת גידול תת-אופטימלית המוטלת עלינו על ידי הנסיבות. השיטות שתוארו לעיל שימשו ושוכללו במשך שנתיים. תרביות חזקות נשמרו ללא עדויות לבעיות שנצפו לעתים בחקלאות קריקט מסחרית, כולל תמותה נרחבת מפתוגנים עם סימנים קליניים קלאסיים (למשל, נזילות פנימית עקב דנסווירוסים באצ'טה בייתוס) או קניבליזם מוגזם15. סביר להניח שהיעדר היכרות קריקט בעקבות הקמת המושבה הפחית מאוד את הסבירות לנטל מחלות.

מניעת צפיפות חשובה כדי להבטיח את בריאות הקריקט. Wild G. bimaculatus הם בודדים, והזכרים מגנים על הטריטוריות שלהם באמצעות תצוגות אגרסיביות ולחימה16. טיפול מוצלח בשבי דורש שמירה על צפיפות המושבה בטווח המתאים כדי להפחית התנהגות אנטגוניסטית ותגובות עקה כלליות13. זה נעשה על ידי מתן צרצרים עם מקלט בשפע בתוך הכלוב ועל ידי דילול מלאי הרבייה של צרצרים ל -150 פרטים לכלוב 29.3 ליטר ב -20 יום לאחר הבקיעה כאשר הם מגיעים לגודל ממוצע של 0.01 גרם, במהלך האינסטאר הצעיר השלישי או הרביעי. צפיפות גידול זו זהה לזו ששימשה בניסויי אופטימיזציה של הזנת G. bimaculatus של Sorjonen et al.14. שיקול בעל רלוונטיות מיוחדת במהלך העברת צרצרים ממכולה אחת לאחרת הוא הרמה הגבוהה של סיכון בריחה. הכלה משנית, תנועות מבוקרות, הכנה לתפיסת נמלטים וערנות הם כלים חיוניים למניעת בריחה מקריקט בתהליך זה. צעדים כאלה משקפים את ייעודו של משרד החקלאות של ארצות הברית Gryllus spp. צרצרים כמזיקי יבול פוטנציאליים, הדורשים היתרים פדרליים ומדינתיים לגידול בארצות הברית17.

בקרות סביבתיות ואיכות ההזנה בשלבי הביצים והנימפלים המוקדמים חשובים לבריאותן של כל תרבויות הקריקט בשבי, כולל G. bimaculatus. כדי להטיל ביצים בנות קיימא, נקבת G. bimaculatus זקוקה למצע לח שבו ניתן לגדל18. קוקוס coir נמצא בשימוש נרחב בתעשיית ייצור הקריקט המסחרית כמדיום עבור oviposition. שיטות אלה מסתמכות על קוקוס שנרטב במי DI כמצע הן לצורך התייבשות והן להידרציה של צרצרים לאורך כל מחזור חייהם. באופן דומה, השימוש במגבות נייר לחות בכלובי צעירים כדי לספוג עודפי טיפות מים ולספק שיפועי לחות בסביבת הלידה הוכיח את עצמו כיעיל ביותר בהפחתת מספר הצרצרים בני השבוע < שנכנעו להתייבשות או לטביעה, כפי שמעידים נוכחותם או היעדרם של צרצרים צעירים שנפטרו בתחתוני כלובים. תזונה לנוער ידועה כממלאת תפקיד גדול בחיזוי ביצועי צמיחה מוצלחים בצרצרים. ההבטחה שהזנה טרייה עם תזונה מלאה תהיה בגודל חלקיק המתאים <0.01 גרם צרצרים תוביל לניצולים גבוהים יותר, שכן צרצרים צעירים יותר יהיו רגישים יותר להשפעות השונות באיכות ההזנה19.

הזנת הקריקט הזמינה מסחרית ששימשה במחקר זה נבחרה בשל השימוש הנרחב בה בתעשיית חקלאות הקריקט בצפון אמריקה. ראשית, מתקשורת אישית עם שלושה חקלאי קריקט מסחריים, שניים במערב התיכון העליון של ארה"ב ואחד בדרום ארה"ב ברור כי מזון זה (מזורי) מיושם באופן נרחב בתעשיית החרקים האכילים עד כה. חקלאי קריקט מוצאים את זה מקובל על ביצועי צמיחה רצויים, fecundity, פיתוח, ועלייה במשקל מדדים. שנית, עבור טכנאים שתפקידם לתת מזון למספר רב של צרצרים במעבדות, שימוש באבקת מזון אחת מעורבבת מראש לאורך כל תוחלת החיים של החרקים הוא נוח. שלישית, הביקוש לחלבון ידוע כגורם חשוב בהתפתחות הקריקט ולמרות שצרכים תזונתיים ספציפיים רבים אחרים עבור G. bimaculatus אינם מובנים במלואם, תערובת מעוצבת זו מכילה אחוז חלבון גולמי, אשר נופל בטווח האופטימלי המדווח של 22%-30%14,20.

המקום באינקובטורים מוגבל לעתים קרובות. חוות קריקט מתחילות בדרך כלל את הצרצרים המוקדמים שלהן באינקובטורים ומעבירות מלאי בוגר יותר לסביבות באוויר הפתוח, שבהן מערכות לטיפול באוויר בכל המתקן מווסתות את הטמפרטורה והלחות. מסיבות אלה, שיטות אלה נועדו לחקות הסדרים כאלה בקנה מידה קטן יותר. לאחר 20 יום בתוך האינקובטור, הצפיפות מצטמצמת, וצרצרים מועברים לטיפולים ניסיוניים או לתנאי סביבה לשימוש כמלאי רבייה. כאשר מערכות טיפול באוויר מתפקדות כראוי, טמפרטורת מתקן הגידול צריכה להיות יציבה של 27 ± 1 מעלות צלזיוס עם לחות יחסית בין 20% ל -25%. לצרצרים מותרת גישה אד-ליביטום למים ולהזנה. ההזנה המוזכרת בכל השיטות הללו היא הזנת הקריקט של מזורי הנמצאת בשימוש נרחב על ידי חקלאי קריקט בצפון אמריקה. לניתוח תזונתי מלא, ראו טבלה משלימהS1.

על פי השיטות של Donoughe and Extavour (2016), ניתן להשתמש בצמר גפן במקום קויר קוקוס כמדיום oviposition או כחומר מעטפת על גבי הקויר כדי למנוע מחלקיקים של frass או הזנה לזהם את פני השטח של מדיום oviposition18. הם ממליצים להניח שכבה דקה של צמר גפן על המצע במהלך תקופת ה-oviposition ולאחר מכן להסיר אותה לאחר השלמת ה-oviposition, יחד עם ה-frass וה-detritus המצטברים. למרות שנתונים המודדים את ההשפעה של זיהום המצע על כדאיות הביציות או על התפתחות הקריקט אינם זמינים, הפרוטוקולים המתוארים כאן מניבים תוצאות משביעות רצון הן בייצור צרצרים צעירים והן בגידול. ניתן לייחס זאת לתכונות האנטי-מיקרוביאליות של הקוקוס, והוא מהווה עילה למחקר עתידי בזירת ייצור חרקים אכילים21.

בשל תקלה ביחידה המווסתת את הטמפרטורה של מתקן גידול הקריקט שבו פותחו שיטות אלה, הניסוי שעבורו אנו מדווחים על נתונים נערך בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס ב -20% לחות יחסית, שהיא 2° קרירה יותר ממה שפרוטוקולים אלה מכתיבים. יתר על כן, מטרות מחקר אלה המבוססות על הזנה צרות מביאות לזמינות מוגבלת של נתונים על מדדים מסוימים בעלי עניין כגון נקבות, תגובות אנדוקריניות, עומס פתוגנים וביטוי גנים. לאחר שהצרצרים הרבייה ייצרו באופן עקבי ביצי קריקט בנות קיימא בשפע ותמותת הצעירים נצפתה זניחה, המאמצים התמקדו בעיקר בניסויים הרלוונטיים ישירות לשאלות מחקר. לפיכך, דוח זה מציע רק תיאורים אנקדוטליים של השפעות ביצועי הצמיחה ארוכות הטווח של שיטות אלה על פני >10 דורות. לבסוף, השימוש בחומרים שמקורם בצמחים כמו קואר וקרטון בכלובים ניסיוניים מוביל ככל הנראה לבליעה מקרית של צרצרים. זה מקובל בתכנון של מחקרים אלה, אך עלול לפגוע בתוקף של תכנוני מחקר שבהם הממצאים מסתמכים על מדידות מדויקות של סך הביומסה שנבלעה.

הפרוטוקול המתואר כאן נועד להיות גם בסיסי וגם יסודי, עם צעדים ברורים וקלים לביצוע לגידול צרצרים בסביבה מעבדתית המוזנת במזון סטנדרטי זמין מסחרית. שימוש בהליך סטנדרטי שכזה עם ניקוי אופטימלי, צפיפות גרב ובקרות סביבתיות מאפשר תחזוקה של מושבות קריקט אחידות ובריאות לטווח ארוך; יתר על כן, הוא יתרום למחקר ההולך וגדל על G. bimaculatus כחרק אכיל הניתן לעיבוד עם השלכות על בריאות האדם. זה עשוי להיות שימושי גם למחקרים על פיזיולוגיה של חרקים, אופטימיזציה של גדילה וגנטיקה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

Acknowledgments

המימון לפרויקט זה התאפשר הודות למענקים פנימיים של אוניברסיטת ויסקונסין-מדיסון. תודה כנה לקווין באצ'ובר מ-Bachhuber Consulting Inc. על הגישה למדריך שלו שלא פורסם לגידול קריקט מסחרי ולמייקל ברטלט סמית' על עזרתו בעידון ופתרון בעיות של שיטות אלה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
31-qt (29.3 L) Snap-lid tote bin with lid HOMZ 3430CLBL Used to house breeding stock
3-tier/12-tray Grow Light Stand Fischer Scientific NC1938548
50-gal (189.27L) tote bin with lid Sterilite #14796603 Used as secondary containment when handling crickets
50 mL polypropylene graduated cylinder Fischer Scientific S95171
7.5-qt (7.1 L) snap-lid tote bin with lid HOMZ 3410CLBL Used to house exprimental stock
Accuris 500 g x 0.01 g Balance Manufactured by Accuris, a subsidieary of Benchmark Scientific W3300-500 Purchased from Dot Scientific through University of Wisconsin system purchasing service "ShopUW+"
Ace Premier 1 Inch Flat Chip Brush Ace Hardware  #1803261
Bel-Art SP Scienceware deionized water wash bottle Fischer Scientific 03-421-160 
Bright aluminum window screen  Phifer UNSPSC# 11162108 Mesh size 18 x 16"
Clear Disposable Plastic Portion Cups 5.5 oz w/ lids Wal-Mart N/A
Deionized water
Diablo 4-4/8" x 13 TPI Ultra Fine Finish Bi-Metal Jigsaw Blade Home Depot #313114935
Egg Filler Flats-Paper, 12 x 12" Uline S-5189
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 100 x 15mm Fischer Scientific FB0875714
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 60 x 15mm Fischer Scientific FB0875713A
Georgia-Pacific Envision Brown Paper Towels Home Depot #205675843
Infinity Tough Guy high performance hot-melt glue sticks Infinity Bond Infinity IM-Tough-Guy-12
Mazuri Cricket Diet Land O' Lakes International SKU#  3002219-105
Stanley TimeIt Twin 2-outlet Grounded Mechanical 24 Hour Timer Wal-Mart N/A
Vermont Organics Reclamation Soil 11 lb Coir Block Home Depot #300679904

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system. Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).
  2. Merkel, G. The effects of temperature and food quality on the larval development of Gryllus bimaculatus (Orthoptera, Gryllidae). Oecologia. 30 (2), 129-140 (1977).
  3. Bateman, P. W. Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus. Ecological Entomology. 23 (4), 473-475 (1998).
  4. Mito, T., Noji, S. The two-spotted cricket Gryllus bimaculatus: An emerging model for developmental and regeneration studies. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
  5. Ylla, G., et al. Cricket genomes: the genomes of future food. BioRxiv. , (2020).
  6. Hanboonsong, Y., Jamjanya, T., Durst, P. B. Six-legged livestock: edible insect farming, collecting, and marketing in Thailand. , Available from: http://www.fao.org/docrep/017/i3246e00.htm (2013).
  7. Halloran, A., Roos, N., Hanboonsong, Y. Cricket farming as a livelihood strategy in Thailand. Geographical Journal. 183 (1), 112-124 (2017).
  8. Wade, M., Hoelle, J. A review of edible insect industrialization: scales of production and implications for sustainability. Environmental Research Letters. 15, 123013 (2020).
  9. EL-Damanhouri, H. I. H. Studies on the influence of different diets and rearing conditions on the development and growth of the two-spotted cricket Gryllus bimaculatus de Greer. , Available from: https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf (2011).
  10. Ngonga, C. A., Gor, C. O., Okuto, E. A., Ayieko, M. A. Growth performance of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus production reared under improvised cage system for increased returns and food security. Journal of Insects as Food and Feed. 7, 301-310 (2021).
  11. Behrens, W., Hoffmann, K. -H., Kempa, S., Gäßler, S., Merkel-Wallner, G. Effects of diurnal thermoperiods and quickly oscillating temperatures on the development and reproduction of crickets, Gryllus bimaculatus. Oecologia. 59 (2-3), 279-287 (1983).
  12. Collavo, A., et al. Housecricket smallscale farming. Ecological implications of minilivestock. Potential of insects, rodents, frogs and snails. Paoletti, M. G. , Science Publishers. Enfield, N.H., USA. Chapter 27 (2005).
  13. Simmons, L. W. Competition between larvae of the field cricket, Gryllus bimaculatus (Orthoptera: Gryllidae) and its effects on some life-history components of fitness. Journal of Animal Ecology. 56, 1015-1027 (1987).
  14. Sorjonen, J. M., et al. The plant-based by-product diets for the mass-rearing of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus. PLOS ONE. 14 (6), 0218830 (2019).
  15. Maciel-Vergara, G., Jensen, A. B., Lecocq, A., Eilenberg, J. Diseases in edible insect rearing systems. Journal of Insects as Food and Feed. 7 (5), 1-18 (2021).
  16. Alexander, R. D. Aggressiveness, territoriality, and sexual behavior in field crickets (Orthoptera: Gryllidae). Behaviour. , 130-223 (1961).
  17. Pet food, fish bait, and animal feed. USDA APHIS. , Available from: https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed (2022).
  18. Donoughe, S., Extavour, C. G. Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus. Developmental Biology. 411 (1), 140-156 (2016).
  19. Dobermann, D., Michaelson, L., Field, L. M. The effect of an initial high-quality feeding regime on the survival of Gryllus bimaculatus (black cricket) on bio-waste. Journal of Insects as Food and Feed. 5 (2), 1-8 (2018).
  20. Lundy, M. E., Parrella, M. P. Crickets are not a free lunch: Protein capture from scalable organic side-streams via high-density populations of Acheta domesticus. PLOS ONE. 10, 0118785 (2015).
  21. Mazaya, G., Karseno, K., Yanto, T. Antimicrobial and phytochemical activity of coconut shell extracts. Turkish Journal of Agriculture - Food Science and Technology. 8 (5), 1090-1097 (2020).

Tags

ביולוגיה גיליון 184 אנטומופגיה חרק אכיל קריקט גרילוס מודל Paurometabolous שיטות גידול תקן הזנה צפיפות אורתופטרה
שמירה על תרביות מעבדה של <em>Gryllus bimaculatus</em>, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ventura, M. K., Stull, V. J.,… More

Ventura, M. K., Stull, V. J., Paskewitz, S. M. Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology. J. Vis. Exp. (184), e63277, doi:10.3791/63277 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter