Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 첫째, NMJs 또는 신경 근육 접합의 다른 측면을 강조하는 마커가있는 면역 스테인 드로소필라 애벌레. 이것은 운동 신경 축종의 결말이 근육에 닿는 영역이며, 그 형태는 시냅스 기능의 판독으로 사용됩니다.
축축은 boutons에게 불린 불룩을 형성하는 몇몇 가지에서 종료합니다. 신경 전달물질은 boutons에서 풀어 놓이고 근육 수축을 일으키는 원인이 됩니다. 신경 전달물질 방출의 지역은 활성 영역이라고 합니다.
다음으로, 현미경을 사용하여 NMJ 이미지를 획득하고 반자동 이미지 분석 소프트웨어로 자신의 형태를 정량적으로 평가합니다.
다음 예에서는, 우리는 DLG1, 포스트 냅틱 마커 및 BRP, 액티브 존 마커로 염색된 Drosophila NMJs의 형태를 분석할 것입니다.
- 이 프로토콜의 경우, NMJ의 이미지 스택을 생성하고 채널 1이 DLG1 염색 또는 유사한 마커를 표시하고 채널 2는 BRP 염색을 보여줍니다 개별 TIFF 파일로 저장합니다.
이제, 현미경이 TIFF로 저장할 때 이미지 계열에 할당 된 고유 파일 문자열을 식별합니다. 이것은 이미지 이름의 끝에있을 것입니다.
각 이미지 파일에 대해 두 개의 새 파일은 기본 이름 스택과 플랫 스택으로 만들어지고 원본 이미지 이름이 뒤따릅니다. 원본 파일은 저장 공간을 저장하기 위해 삭제할 수 있습니다. 다음으로 Drosophila NMJ morphometrics 인터페이스에서 정의된 ROI 하위 매크로를 선택하고 이미지 파일 디렉터리를 선택할 수 있습니다.
첫 번째 프로젝션이 열리면 프리핸드 선택 도구를 선택한 다음 마우스를 사용하여 전체 NMJ 단말이 포함된 영역을 정의합니다.
NMJ 기능을 정량화하기 위해 먼저 Drosophila NMJ morphometrics 인터페이스로 이동하여 배율을 설정합니다. 예를 들어 이미지의 1 픽셀이 0.72 미크론에 해당하는 경우, 스케일 픽셀을 1으로 설정하고 스케일 거리를 0.072로 설정한 다음 하위 매크로 분석을 선택하고 두 개의 채널 이미지가 있는 경우, 또한 선택 검색자 당 검색 시간 처리를 할 수 있습니다.
분석 후 분석된 각 시냅스에 대한 새 이미지 파일이 부모 폴더에 저장되고 정량적 측정이 결과에 저장됩니다.txt 파일. 모든 이미지를 검사하고 세분화 오류가 있는 사진을 제외합니다.
예를 들어, 시냅틱 단말의 일부가 노란색 윤곽선에 포함되지 않을 수 있습니다. 배경의 일부는 시냅스 단말내에 포함될 수 있습니다.
