幼虫ロコモーションアッセイ:ゼブラフィッシュ・ラーヴェにおける化合物の神経行動毒性を研究するハイスループット法

- まず、3ペトリ皿で胚を成長させる。最初のものはハンクの溶液(バランスのとれた塩溶液)を含むコントロールプレートです。

暴露溶液中の神経毒性化合物は、受動的な拡散によって胚の外膜に浸透し、注意、協調、筋肉活動などの神経系のプロセスを変化させる。胚が適切な年齢の幼虫に発展したら、各幼虫を48のウェルプレートの個々の井戸に移す。

井戸板を記録プラットフォームに移してカバーを引き下げろ幼虫を10分間順応させなさい。

ゼブラフィッシュの幼虫は通常、暗闇の中でより多くの動きを示し、光の中で動きが少ない。各期間のコントロールと暴露群の幼虫が移動した総距離を記録する。化合物が神経毒性である場合、幼虫はコントロール動物よりも暗闇と光の中でさらに多くの動きを示す。

以下のプロトコルでは、神経毒性化合物に曝露されたゼブラフィッシュ幼虫に対する行動検査を行います。

-実験を行う少なくとも2時間前に、室温を摂氏28度に設定し、48ウェルマイクロプレートの各ウェルに800マイクロリットルの暴露溶液を追加します。

すべてのパラメータが設定されたら、試験室の照明を下げ、幼虫がシステム内で10分間順応できるようにします。

実験の最後に、「実験」と「停止」をクリックし、48ウェルマイクロプレートを光インキュベーターに戻して、その後の実験を行います。