Larva Locomotion Tahlil: Zebra Balığı Larvalarındaki Bir Bileşiğin Nörobehavioral Toksisitesini İncelemek için Yüksek Verimli Yöntem

- Başlamak için, embriyoları 3 Petri kabında yetiştirin. Birincisi Hank'in çözeltisini içeren bir kontrol plakası-- dengeli bir tuz çözeltisi. İkinci ve üçüncü plakalar, Hank'in farklı konsantrasyonlarda potansiyel olarak nörotoksik bileşik içeren çözümüne sahiptir.

Maruz kalma çözeltisindeki nörotoksik bileşik, pasif difüzyon ile embriyoların dış zarına nüfuz eder ve sinir sisteminin dikkat, koordinasyon ve kas aktivitesi gibi süreçlerini değiştirir. Embriyolar uygun yaşta larvalara dönüştüğünde, her larvayı 48 kuyu plakasının bireysel bir kuyusuna aktarın. Her hayvan için tedavi durumunu takip edin.

Kuyu plakasını bir kayıt platformuna aktarın ve kapağı aşağı çekin. Larvaların 10 dakika alışmasına izin verin. Yazılımı kullanarak alternatif ışık ve karanlık dönem döngüleri ayarlayın.

Zebra balığı larvaları normalde karanlıkta daha fazla hareket ve ışıkta daha az hareket gösterir. Her dönemde kontrolün larvaları ve maruz kalma gruplarının kat ettiği toplam mesafeyi kaydedin. Bileşik nörotoksikse, larvalar karanlıkta ve ışıkta kontrol hayvanlarından daha fazla hareket gösterir.

Aşağıdaki protokolde, nörotoksik bileşiklere maruz kalan zebra balığı larvaları üzerinde davranış testleri yapacağız.

- Bir deney yapmadan en az 2 saat önce, oda sıcaklığını 28 santigrat dereceye ayarlayın ve 48 kuyunun her kuyusuna 800 mikrolitre maruz kalma çözeltisi ekleyin. Ardından, bir lokomotion ve yol açısı deneyine hazırlık olarak, 200 mikrolitre maruz kalma çözeltisinde bir larvayı mikro plakanın her kuyusuna aktarmak için modifiye uçlu 1 mililitrelik bir pipet kullanın.

Tüm parametreler ayarlandığında, test odasındaki aydınlatmayı kısın ve larvaların sistemde 10 dakika alışmasına izin verin. Alıştırma süresinin sonunda Deneme ve Yürütme'ye tıklayın ve deneysel dosyaların kaydedilecek klasörünü oluşturun.

Deneyin sonunda, Deney ve Durdur'a tıklayın.