Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Helene Mens; Mary Kearney; Ann Wiegand; Jonathan Spindler; Frank Maldarelli; John W. Mellors; John M. Coffin

doi:10.3791/2960

Amplificar e Quantificação do HIV-1 RNA no indivíduos infectados pelo HIV com carga viral abaixo ...

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Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplificar e Quantificação do HIV-1 RNA no indivíduos infectados pelo HIV com carga viral abaixo do limite de detecção pela Standard Ensaios Clínicos

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13:58 min

September 26, 2011

DOI: 10.3791/2960-v

Helene Mens¹, Mary Kearney¹, Ann Wiegand¹, Jonathan Spindler¹, Frank Maldarelli¹, John W. Mellors², John M. Coffin³

¹The virology Core at the HIV Drug Resistance Program,NCI-Frederick, ²Division of Infectious Diseases,University of Pittsburgh, ³Department of Molecular Biology and Microbiology,Tuffts University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Quantificar os níveis de HIV-1 RNA no plasma e seqüenciamento única HIV-1 genomas de indivíduos com carga viral abaixo do limite de detecção (50-75 cópias / ml) é difícil. Aqui nós descrevemos como extrair e quantificar RNA viral no plasma usando um ensaio de PCR em tempo real, que de forma confiável medidas HIV-1 RNA até 0,3 cópias / ml e como amplificar genomas virais por seqüenciamento do genoma único, a partir de amostras com cargas virais muito baixas.

Neste vídeo, são demonstrados métodos para quantificar e sequenciar genomas únicos do HIV de indivíduos com cargas virais inferiores a 50 cópias por mililitro de plasma. Primeiro, um tubo contendo sete mililitros de plasma é centrifugado no palato. O RNA do vírus é então extraído para quantificar o nível de HIV.

Um ensaio de cópia única é realizado no qual o RNA é transcrito reversamente, carregado em uma placa de 96 poços com padrões e controles e submetido a PCR quantitativo em tempo real. O nível de viremia é então calculado com base no volume de entrada do plasma. Apenas 0,3 cópias por mililitro podem ser detectadas para caracterizar a população viral.

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