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DOI: 10.3791/56630-v
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This manuscript describes the applications of proton-selective electrodes and patch clamping methods to measure the activity of proton transport systems. These methods provide improved sensitivity and control over the intracellular environment compared to traditional techniques.
Este manuscrito descreve as aplicações dos eletrodos seletivos-próton e patch aperto métodos para medir a atividade dos sistemas de transporte de prótons. Esses métodos de superar algumas limitações das técnicas comumente utilizadas para estudar a actividade de transporte de prótons, como sensibilidade moderada, resolução de tempo e controle do meio intracelular insuficiente.
O método de manchas gigantes combinadas com microeletrodos seletivos de íons é um método versátil usado para detectar e quantificar fluxos de íons. Especificamente, é usado para medir os fluxos de prótons gerados pela atividade do transportador de íons eletroneutros, o trocador de sódio-hidrogênio ou NHE, que é expresso na membrana celular. O trocador de sódio-hidrogênio gera um gradiente de prótons nas proximidades da membrana plasmática, indicado aqui como um anel laranja.
Esse gradiente de prótons através da membrana celular é medido pelo registro de patch clamp de célula inteira combinado com uma técnica que usa um microeletrodo seletivo de prótons. O microeletrodo seletivo de prótons é movido para perto da superfície celular, onde registra o fluxo de prótons saindo das células, mostrado aqui na posição A.E para longe da superfície celular, onde registra a concentração de prótons livres presente na solução indicada pela posição B.E então, de volta à posição A, perto da membrana celular, em um movimento repetitivo e oscilatório. A diferença de tensão de A para B é registrada e depende do representante da atividade do NHE.
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