Um modelo de coelho da doença aquosa-deficiente do olho seco induzida pela concanavalina Uma injeção nas glândulas lacrimal: aplicação a estudos de eficácia de drogas

Nosso método fornece o modelo animal de doença do olho seco que pode ser agudo ou crônico graças ao nosso método de injetar todas as glândulas lacrimais e reincidentes injeções. Esta técnica fornece de forma confiável Concanavalina A para a glândula lacrimal inferior usando orientação de ultrassom para as glândulas de tamanhos amplamente variáveis e até glândulas lacrimais superiores tornando este método uma abordagem completa. Este modelo fornece um meio simples, otimizado e não cirúrgico para induzir doenças oculares secas aquosas.

É adequado para estudar a eficácia da droga e a fisiopatologia da doença. Identificar a incisura posterior e utilizar a localização do ultrassom pode ser um desafio no início. Remover toda a pele é fundamental para ajudar na localização do ultrassom para ambas as etapas.

Demonstrando o procedimento será Wei Huang, uma estudante de pós-graduação do meu laboratório. Depois de confirmar a sedação leve observando uma posição relaxada da cabeça com os lóbulos da orelha não mais totalmente eretos, use uma micropipette para aplicar 25 microliters de lidocaína livre de conservantes ao primeiro olho e coloque um espéculo flexível da tampa de arame entre as pálpebras. Usando 0,3 fórceps, segure a membrana de nictating em seu ápice e estenda-a sobre a córnea.

Usando uma agulha afiada calibre 26, injete lidocaína 1%com 1:100, 000ª epinefrina subconjugada na base da membrana de nictação. Uma sangria moderada deve se formar sobre a membrana. Em seguida, remova o espéculo e faça uma injeção idêntica na membrana de nictating esquerda.

Após aproximadamente cinco minutos, coloque o espéculo da tampa de volta no olho do companheiro e use fórceps 0,3 para retrair a membrana de nictating em seu ápice. Usando uma tesoura de Westcott, corte a membrana de nictating em sua base e remova o espéculo. Em seguida, coloque pomada de antibiótico tópico no olho.

Para a porção palpebral da injeção superior da glândula lacrimal, após confirmar a sedação, corte a pele na área pré-orbital e couro cabeludo e use creme depilatório para remover completamente qualquer pele residual. Após dois minutos, retire o creme e aplique 25 microliters de lidocaína sem conservantes de 1%no olho apropriado. Everta a pálpebra superior e aplique uma pressão medial suave na borda orbital posterior até que a protuberância que marca a porção palpebral da glândula seja vista.

Usando fórceps finos e uma seringa tuberculina equipada com uma agulha calibre 27, penetrar diretamente na glândula através de uma abordagem transconjunta, avançando a agulha dois milímetros no tecido e injetar 100 microliters de uma solução de 500 microgramas de Concanavalina A ou Con A.Imediatamente após a injeção, aplique pressão medial ao globo para fazer com que a glândula lacrimal superior orbital se projeta da incisura posterior. Usando fórceps curvados fechados, recuem a área até que a abertura óssea no crânio seja sentida e aplique ainda mais pressão modesta com fórceps para deixar um recuo na pele para servir de marco para a colocação da agulha. Insira uma seringa tuberculina equipada com uma agulha de calibre 27 perpendicular à pele sobre a marca de recuo de cerca de um quarto de polegada na incisão e redirecione a agulha posterior e externamente em direção ao canthus lateral visando o ponto médio entre o local de injeção e a borda orbital óssea.

Uma vez que o hub da agulha é atingido, injete lentamente 0,2 mililitros de uma solução de 1.000 microgramas de Con A.For ILG injeção, visualize o animal do lado para localizar a proeminência do ILG ao longo da parte anterior inferior da órbita. Use uma caneta de marcação cirúrgica para desenhar uma linha vertical na pele onde a parte superficial da glândula ILG transita de seu lugar de descanso superficial no osso zigomático para sua localização mais medial na órbita. Varrer uma sonda de ultrassom verticalmente realizada através da linha na pele para identificar a extremidade do osso zigomático.

A transição do ILG ocorre quando a imagem da glândula muda de uma linha hiperecóica circunscrita para uma sem uma fronteira medial reconhecível. A posição relativa da peça de mão para a linha desenhada na pele quando esta mudança for observada será o local da injeção. Para colocar Con A em uma glândula em um ponto apenas medial para o osso do arco zigomático, definir a profundidade desejada de injeção como a profundidade do sinal hiperecérico ósseo zigomático mais um milímetro menos o comprimento conhecido da agulha.

Insira a agulha cerca de 12 milímetros na glândula no local da injeção antes de se retirar lentamente até que o comprimento da agulha exposta fora do corpo seja igual à diferença calculada. Em seguida, injete 0,2 mililitros de uma solução de 1.000 microgramas de Con A e confirme o sucesso da injeção por ultrassom. O ILG deve exibir um espaço hiperecorico característico.

As injeções con A induzem uma forte resposta inflamatória na glândula lacrimal caracterizada por um infiltrado linfocítico denso que é acompanhado por uma diminuição da produção de lágrimas. Os níveis de lactoferrina lacrime são suprimidos, resultando em um epitélio córnea e conjuntivival comprometido e um aumento da coloração de bengala rosa. A injeção dos três tecidos LG orbitais produz um estado consistente e uniforme de doença do olho seco.

Um único conjunto de injeções con A produz doença ocular seca que dura cerca de uma semana com todos os parâmetros clínicos normalizando até o dia 10. As injeções sequenciais con A com cerca de uma semana de intervalo estendem a duração da doença do olho seco em conformidade. Após aproximadamente cinco conjuntos de injeções, o estado da doença do olho seco muitas vezes se torna permanente sem a necessidade de novas injeções.

A localização ideal das estruturas lacrimais da glândula é o mais importante. Familiaridade com anatomia craniana e atenção aos detalhes finos, incluindo a remoção da pele, juntamente com a habilidade usando o ultrassom, todos melhoram os resultados. Como esta técnica simples requer o uso de afiadas, a investigação deve tomar as devidas precauções para evitar lesões na agulha.