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DOI: 10.3791/67740-v
Julie Ziobro*1, Dalis Collins*2, Chunling Chen3, Yan Chen3, Luis F. Lopez-Santiago3, Gail Rising2, Amber Yanovich2, Jack M. Parent4, Lori L. Isom3
1Department of Pediatrics,University of Michigan, Ann Arbor, 2Unit for Laboratory Animal Medicine,University of Michigan, Ann Arbor, 3Department of Pharmacology,University of Michigan, Ann Arbor, 4Department of Neurology,University of Michigan, Ann Arbor
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Os mecanismos de morte súbita inesperada na epilepsia (SUDEP) são pouco compreendidos e difíceis de traduzir a partir dos modelos atuais. Coelhos transgênicos podem oferecer informações sobre esses mecanismos. Descrevemos um método para eletroencefalografia contínua de longo prazo e registros eletrocardiográficos em kits de coelhos transgênicos para avaliar eventos graves que podem levar à morte.
[Instrutor] Para começar, posicione o kit anestesiado em decúbito dorsal em uma almofada de aquecimento infravermelho controlada por um termômetro retal. Coloque o nariz e a boca em uma máscara facial impressa em 3D personalizada conectada por meio de um conector giratório a um circuito Jackson-Reese sem reinalação com um saco de 0,5 litro. Monitore a profundidade da anestesia usando um oxímetro de pulso na orelha ou na pata. Coloque toalhas cirúrgicas adesivas em ambos os lados do kit e cubra-o com uma grande cortina cirúrgica. Faça um orifício de tamanho apropriado na cortina para expor o abdômen e o peito. Abra o implante no campo cirúrgico e coloque suturas de âncora não absorvíveis em cada um dos orifícios de ancoragem do implante, deixando uma cauda de cinco a seis centímetros em cada sutura. Coloque o implante em uma tigela com solução salina estéril quente até que esteja pronto para colocação. Usando um bisturi, faça uma incisão de três centímetros através da pele ao longo da linha alba. E faça uma incisão cuidadosa no músculo para abrir a cavidade peritoneal. Em seguida, coloque o implante na porção cranial da cavidade abdominal e posicione-o à esquerda da incisão. Use um trocarte para tunelar o eletrocardiograma positivo, ou ECG, e o fio de EEG para fora da cavidade peritoneal e da pele aproximadamente três a quatro centímetros à esquerda da incisão. Tunelamente o fio de ECG negativo dois centímetros à direita da incisão, permitindo que o implante se encaixe confortavelmente dentro da cavidade. Agora, prenda o implante com suturas de âncora na parede ventral da cavidade peritoneal, garantindo que nenhum intestino fique preso. E feche a parede abdominal com uma sutura absorvível em um padrão interrompido. Em seguida, feche a incisão na pele com uma sutura não absorvível em um padrão interrompido. Tunelizar os eletrocardiogramas negativos eletrocardiogramas por via subcutânea para a parte superior direita do tórax, ao nível da primeira costela. Disseque sem rodeios uma bolsa subcutânea para enrolar frouxamente aproximadamente 10 centímetros de fio. Corte qualquer excesso de fio e crie um laço depois de amarrar a extremidade exposta ao fio isolado com uma sutura não absorvível. Prenda a alça ao músculo com duas suturas não absorvíveis. Em seguida, faça um túnel do eletrodo de ECG positivo para a costela inferior esquerda e repita os passos demonstrados para prendê-lo ao músculo e fechar a incisão. Enrole os fios de EEG expostos com papel alumínio estéril. Deixe um assistente não estéril remover a cortina estéril e a amarração das pernas. Vire o kit para a posição de bruços, garantindo que a máscara facial permaneça firmemente no lugar, girando o conector giratório entre a máscara facial e o circuito. Ajuste o oxímetro de pulso e o monitor Doppler conforme necessário para manter o monitoramento anestésico contínuo. Em seguida, posicione uma sonda Doppler sobre o coração. Coloque uma toalha adesiva estéril sob o lado esquerdo, enquanto o assistente segura o pacote de papel alumínio contendo os fios. Remova cuidadosamente os fios do pacote de alumínio e coloque-os no campo estéril e conclua o processo de drapeamento com a toalha estéril. Faça uma incisão de três centímetros ao longo da linha média do couro cabeludo para expor o crânio. Use um trocarte para tunelar subcutaneamente os eletrodos do EEG do lado esquerdo para o crânio. Em seguida, limpe e raspe o periósteo dos ossos parietais expostos usando um bisturi. Insira uma broca portátil em uma capa de ultrassom estéril e guie uma broca de um milímetro na broca. Em seguida, faça furos de rebarbas bilaterais nos ossos parietais, aproximadamente 0,5 centímetros anteriores à lambda e 0,5 centímetros laterais à sutura sagital. Use uma pinça fina para colocar um parafuso no orifício da rebarba. Em seguida, use uma chave de fenda para inserir o parafuso aproximadamente na metade do crânio. Agora, disseque sem rodeios uma bolsa subcutânea ao longo da parte de trás do pescoço para enrolar frouxamente aproximadamente 10 centímetros de fio. Corte o excesso de fio e retire o isolamento da ponta, esticando o fio. Para criar um laço na extremidade do fio exposto, dê um nó deixando um pequeno laço. Coloque o laço sobre o parafuso e aperte o parafuso no crânio, garantindo que o fio entre em contato com o parafuso. Posicione o fio terra à esquerda e o fio de gravação à direita. Agora, prenda os parafusos e fios ao crânio usando acrílico dental. Finalmente, injete bupivacaína por via subcutânea em cada local da incisão para alívio da dor. E cubra cada incisão com uma pequena quantidade de cola para a pele. Depois que todos os fios estiverem no lugar, avalie os sinais de telemetria usando um software de análise para verificar a fidelidade do sinal. Espere que os sinais de EEG apareçam em baixa amplitude enquanto o kit estiver sedado. A cirurgia de implante foi realizada com sucesso em 15 kits de coelhos, com 12 sobrevivendo até o desfecho experimental. Os registros de telemetria imediatamente após o retorno dos kits às gaiolas domésticas mostraram sinais de EEG de baixa amplitude, que melhoraram à medida que os kits se recuperavam da anestesia. A morfologia do sinal do ECG mudou ligeiramente nos primeiros dias após a cirurgia devido à cicatrização e estabilização do fio. Mas, no geral, a qualidade do sinal permaneceu robusta ao longo do tempo. O sistema de telemetria implantado permitiu o registro de múltiplos biopotenciais, incluindo eletroencefalografia, temperatura, aceleração, eletrocardiografia e qualidade do sinal.
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