Name: Quantificação da captação de ácidos graxos endoteliais usando análogos de ácidos graxos fluorescentes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Aprenda a quantificar a captação de ácidos graxos em células endoteliais usando análogos fluorescentes BODIPY. Este ensaio in vitro oferece insights sobre o metabolismo lipídico e possíveis alvos terapêuticos para doenças metabólicas.

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<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-Hidroxiisobutirato (3-HIB)</td><td>Cayman Chemicals</td><td>26105</td><td>Controle positivo, concentração final de 5 ou 20 mM</td></tr><tr><td>Microplaca de poliestireno preta de 96 poços, fundo transparente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3603-48EA</td><td>Para que as células de chapa sejam analisadas</td></tr><tr><td>BODIPY FL C12 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3822</td><td>Ácido graxo fluorescente verde de cadeia longa</td></tr><tr><td>BODIPY FL C16 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3821</td><td>Ácido graxo de cadeia muito longa fluorescente verde</td></tr><tr><td>Solução de Albumina Sérica Bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9205-50ML</td><td>Usado para preparar o complexo Bodipy:BSA</td></tr><tr><td>Dimetil sulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Solvente para ações farmacêuticas</td></tr><tr><td>Reservatórios de Pipetagem Descartáveis</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>Contém as várias soluções a serem pipetadas nas células</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modified Eagle' s Médio</td><td>Ciências da Vida Corning</td><td>10-013-CV</td><td>Mídia para células EA.hy926</td></tr><tr><td>Células EA.hy926</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp;</td><td>Linha híbrida de células endoteliais imortalizadas</td></tr><tr><td>BulletKit EGM-2 Meio de Crescimento de Células Endoteliais-2</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Mídia para HUVECs</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>Suplemento de 10% em EGM-2 e DMEM</td></tr><tr><td>Leitor de microplacas de fluorescência</td><td>Vários</td><td>N/A</td><td>Qualquer leitor de microplacas capaz de medições de fluorescência</td></tr><tr><td>Solução gelatinosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1393-100ml</td><td>Usado para revestir placas com 0,1% de concentração de trabalho</td></tr><tr><td>Solução Hoechst 33342</td><td>Ciências da Vida</td><td>62249</td><td>Coloração nuclear para normalização celular (4 & mu; M)</td></tr><tr><td>Células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs)</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td>Células endoteliais humanas primárias</td></tr><tr><td>Pipeta Multicanal</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>Para pipetear em uma placa de 96 poços</td></tr><tr><td>Niclosamida &nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>N3510-50G</td><td>Controle negativo, 1 & mu; M&nbsp; Concentração final</td></tr><tr><td>PBS, com cálcio e magnésio</td><td>Fisher Scientific</td><td>21031CV</td><td>Usado para preparar tratamentos e como tampão de lavagem (com BSA)</td></tr><tr><td>PBS, sem cálcio e magnésio</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-508</td><td>Para diluição de gelatina, manchas Hoechst e lavagens gerais</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>suplemento de 1% em EGM-2 e DMEM</td></tr><tr><td>L-lactato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-5G</td><td>Controle positivo, concentração final de 5 ou 20 mM</td></tr><tr><td>Solução Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>Usado a 0,08% para extinguir a fluorescência extracelular</td></tr><tr><td>Sistemas de Filtro a Vácuo, 500ml de membrana PES, 0,45 e micro; m</td><td>GenClone</td><td>25-227</td><td>Para esterilizar a solução de gelatina</td></tr></tbody></table>

quantificação da captação de ácidos graxos endoteliais usando análogos de ácidos graxos fluorescentes

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Quantificação da captação de ácidos graxos endoteliais usando análogos de ácidos graxos fluorescentes

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

quantification-endothelial-fatty-acid-uptake-using-fluorescent-fatty

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neste vídeo, demonstramos uma técnica ex vivo para medir a depleção análoga de glicose extracelular em órgãos de camundongos colhidos. Envolve a incubação do tecido do camundongo em uma solução contendo desoxiglicose marcada com fluorescência, que é absorvida pelas células. A captação de análogos de glicose pode ser determinada indiretamente medindo a fluorescência do meio incubado.

Medição da depleção análoga de glicose fluorescente extracelular: uma técnica de medição substituta para avaliar a captação de glicose em órgãos de camundongos ex vivo

Relatamos um método in vitro que permite a quantificação do número real de células adesivas dentro de uma monocamada de células endoteliais.

A quantificação da Adesividade celular endotelial<em&gt; In Vitro</em

Fornecemos um protocolo detalhado para estudar a dinâmica dos ácidos biliares em células vivas usando um sensor BAS FRET geneticamente codificado. Este sensor de ácido biliar representa uma ferramenta única para estudar (regulação do) transporte de ácido biliar e ativação de FXR em uma ampla gama de tipos de células.

Monitoramento em Tempo Real de intracelular Bile Ácido Dynamics usando um sensor Ácido Bile baseado em FRET codificados geneticamente

As células endoteliais primárias da veia umbilical humana (HUVECs) foram cultivadas até a confluência dentro de um dispositivo de rede microfluídica. A junção celular endotelial e as distribuições de F-actina foram ilustradas e as mudanças na concentração de cálcio intracelular e na produção de óxido nítrico em resposta ao trifosfato de adenosina (ATP) foram quantificadas em tempo real em níveis celulares individuais.

Desenvolvimento e Caracterização de<em&gt; In Vitro</em&gt; Rede de microvasos e medições quantitativas de endotelial [ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; E óxido nítrico Produção

Endotélio vascular controla firmemente o recrutamento de leucócitos. Extravasamento de leucócitos inadequado contribui para doenças inflamatórias humanas. Portanto, à procura de novos elementos reguladores de ativação endotelial é necessária projetar terapias melhoradas para desordens inflamatórias. Aqui, descrevemos uma metodologia abrangente para caracterizar o romance reguladores endoteliais que podem modificar leucócitos tráfico durante a inflamação.

Ensaios de caracterização de romance endoteliais reguladores envolvidos na resposta inflamatória de triagem

Os métodos tradicionais de avaliação adipogenic diferenciação são baratos e fáceis de usar, mas não são específicos para alterações na expressão gênica. Nós desenvolvemos um ensaio para quantificar a diferenciação de células mesenquimais em adipócitos maduros, usando um marcador específico de linhagem. Este ensaio tem diversas aplicações através de pesquisa básica e clínica médica.

Visualização e quantificação de células mesenquimais Adipogenic diferenciação potencial com um marcador específico da linhagem

Este protocolo fornece uma abordagem eficiente para medir a absorção de colesterol LDL com taxas de fluxo em tempo real usando uma célula viva, sistema em vários tipos de células de imagem. Esta técnica fornece uma plataforma para a atividade farmacológica de compostos afetando o influxo de LDL enquanto monitora para morfologia celular e citotoxicidade, portanto, potencial de tela.

Ensaio de absorção de LDL colesterol usando célula viva análise com célula de imagem monitoramento de integridade

Medição da capacidade de efluxo de colesterol in vitro de soro ou plasma em modelos de celular de macrófagos é uma ferramenta promissora como um biomarcador para a aterosclerose. No presente estudo, podemos otimizar e padronizar um método de efluxo de colesterol NBD fluorescente e desenvolver uma análise do elevado-throughput usando placas de 96 poços.

Ensaio de efluxo de colesterol Nitrobenzoxadiazole-etiquetadas do elevado-throughput

Ensaios automatizados usando microplatas multi-poços são abordagens vantajosas para identificar reguladores de vias, permitindo a avaliação de uma infinidade de condições em um único experimento. Aqui, adaptamos o bem estabelecido protocolo de imagem e quantificação de macropinoso para um formato de microplacão de 96 poços e fornecemos um contorno abrangente para automação usando um leitor de placas de vários modos.

Imagem e Análise Automatizada para a Quantificação de Macropinoss fluorescentes rotulados

Neste artigo, demonstramos um protocolo otimizado baseado em fluorescência BODIPY 493/503 para caracterização de gotículas lipídicas em tecido hepático. Através do uso de projeções ortogonais e reconstruções 3D, o fluoróforo permite o sucesso da discriminação entre esteatose microvesicular e macrovesicular e pode representar uma abordagem complementar aos protocolos histológicos clássicos para avaliação da esteatose hepática.

Análise de Gotículas Lipídicas Coradas por Fluorescência com Reconstrução 3D para Avaliação da Esteatose Hepática

Aprenda a quantificar a captação de ácidos graxos em células endoteliais usando análogos fluorescentes BODIPY. Este ensaio in vitro oferece insights sobre o metabolismo lipídico e possíveis alvos terapêuticos para doenças metabólicas.

Quantificação da captação de ácidos graxos endoteliais usando análogos de ácidos graxos fluorescentes

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