MALDI пробоподготовки: ультра тонкий слой Метод

Summary

Это видео демонстрирует подготовку ультратонкие матрицы / анализируемого слоя для анализа пептидов и белков Matrix-активированная лазерная десорбция ионизации масс-спектрометрии (MALDI-MS).

Abstract

Это видео демонстрирует подготовку ультратонкие матрицы / анализируемого слоя для анализа пептидов и белков Matrix-активированная лазерная десорбция ионизации масс-спектрометрии (MALDI-MS) ^{1, 2.} Ультра-тонкий слой метод включает в себя производство подложки слоем кристаллов матрицы (альфа-циано-4-гидроксикоричных кислота) на образец пластина, которая служит посевом почву для последующей кристаллизации матрицы / аналита смеси. Преимущества ультра-тонкий слой метода по сравнению с другими образец осаждения подходы (например, сухой капли) в том, что он предоставляет (я) большей терпимости к примесей, таких, как соли и моющих средств, (II), более высокое разрешение, и (III), более высоким пространственным единообразия. Этот метод особенно полезен для точного определения массы белков. Протокол был изначально разработан и оптимизирован для анализа мембранных белков и успешно использованы для анализа ионных каналов, метаболит транспортеры, и рецепторы, содержащие от 2 до 12 трансмембранных доменов ^2. С первоначальной публикации, он также показал, в равной степени полезны для анализа растворимых белков. Действительно, мы использовали его для большого количества белков, имеющих широкий спектр свойств, в том числе с молекулярной массой выше, чем 380 кДа ^3. Текущее время наш метод выбора для молекулярного анализа масса всех белков. Описанная процедура последовательно производит высококачественные спектры, и она чувствительна, надежный и простой в реализации.

Protocol

Это очень важно носить неопудренные перчатки во время подготовки тонким слоем.

Очистка образца пластину

1. Использование нержавеющей стали или золота MALDI образец пластины.
2. Промыть метанола и осторожно протрите Kimwipe. Не тереть или скраб поверхность с Kimwipe, чтобы не поцарапать поверхность.
3. Промыть H ₂ O и осторожно протрите Kimwipe.
4. Промыть метанола и осторожно протрите Kimwipe.
5. При необходимости повторите MeOH / H ₂ O / MeOH цикл очистки, всегда заканчивая MeOH.
6. Убедитесь в том, что Есть не призрак пятна или остатки, оставшиеся на пластине. Если Есть призра....

Materials