В этой статье показано два совершенно разных методов инъекций: 1) в головном мозге (intracerebroventricular) и 2) системные (внутривенное) введение терапевтических агентов в центральной нервной системы у новорожденных мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Доставка терапевтических агентов Через Intracerebroventricular (ICV) и внутривенного (IV) инъекций у мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Несмотря на защитную роль, что гематоэнцефалический барьер играет в защитный головной мозг, это ограничивает доступ к центральной нервной системе (ЦНС), которое чаще всего приводит к отказу потенциальных терапии предназначен для нейродегенеративных 1,2 расстройств. Нейродегенеративных заболеваний, таких как спинальная мышечная атрофия (СМА), в которой нижние моторные нейроны влияют, могут извлечь большую пользу от введения терапевтических агентов в ЦНС. Цель этого видео, чтобы продемонстрировать две разные парадигмы инъекции для доставки терапевтических материалов в новорожденных мышей вскоре после рождения. Одним из таких методов является употребление инъекционных непосредственно в мозговой боковых желудочков (Intracerebroventricular), что приводит к доставке материалов в ЦНС через спинномозговую жидкость 3,4. Второй метод временные инъекции вену (внутривенно), которые могут вводить различные терапии в кровеносную систему, что приводит к системной доставки, включая ЦНС 5. Широкое трансдукции ЦНС достижимо, если соответствующие вирусный вектор и вирусных серотипа используется. Визуализация и использование временных вену для инъекции возможно до послеродового день 6. Однако, если поставленный материал предназначен для достижения ЦНС, эти инъекции должны проводиться в то время как гематоэнцефалический барьер более проницаемыми из-за его незрелые статус, предпочтительно до послеродового день 2. Полностью разработана гематоэнцефалический барьер значительно ограничивает эффективность внутривенной доставки. Оба систем доставки являются простыми и эффективными раз хирургических способностей достигается. Они не требуют обширных хирургических устройств и могут быть выполнены одним человеком. Однако эти методы не без проблем. Небольшой размер послеродовой день 2 щенков и последующих небольших участков целевой можете сделать инъекции трудно выполнить и поначалу сложно воспроизвести.
Протокол
1. Intracerebroventricular инъекции
- Первым шагом является подготовка инъекционных растворов состава; эти решения являются вирусный вектор, плазмидной ДНК, наркотиков, и должны быть введены в стерильных условиях.
- Смешайте желаемый титр вирусного вектора (5-7 мкл общего числа) с 0,05% вес / трипанового синего в ФСБ для визуализации месте инъекции.
- Плазмиды решение ДНК (5 л мкл общего числа) содержит D-(+)-глюкоза 20% (м / о) (1 мкл), трипанового синего (0,05%) PBS (1 мкл), плазмиды (~ 5 ~ г / ~ L ) (2 ~ L), и 2,5 кДа линейной PEI гомополимер (150 мм) (1 ~ L).
- Остановите PND 2 новорожденных с помощью крио-анестезии в течение 1-2 ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Исследования с помощью мыши моделях болезни часто требует введения препаратов или других веществ новорожденных. В этом видео мы продемонстрируем шаг за шагом процедуры, связанные с двумя типами инъекции стратегий, которые могут быть использованы для целевой центральной нервной системы: 1) с прямым впрыском в ЦНС использованием intracerebroventricular (ICV) инъекции, или 2) внутривенного введения временной таргетинг / лицевой вены. Сроки эти инъекции имеет большое значение. Так как ICV инъекция от руки, череп должен быть.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить Джон Марстон для экспертного животноводства и д-р Марко А. Пассини для оказания технической помощи на ранних этапах этого проекта. Эта работа финансировалась грантом Национального института здоровья в ХЛЛ (R01NS41584; R01HD054413).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии (необязательно) |
| Зеленый пищевой краситель | Маккормик | н / | Должно быть отфильтрованы |
| Гамильтон стеклянный шприц (100 мкл) | Sigma Aldrick | 20702 | |
| LuerMxF тема Стиль Белый нейлон | Мелкие детали, Inc | VPLF-LC78-1-25 | |
| Изобразительное шприцы калибр | Стрелок | 7111 | Размер: 33 (СРГ) х ¼ "(6,35 мм) |
| Ви Transilluminator Зрение | Respironics | 1017920 | |
| 2.25x головная повязка лупы | MagEyes | Модель № 5 | Выберите увеличения с учетом индивидуальных предпочтений |
Ссылки
- Blanchette, M., Fortin, D. Blood-brain barrier disruption in the treatment of brain tumors. Methods Mol. Biol. 686, 447-463 (2011).
- Foust, K. D., Kaspar, B. K. Over the barrier and through the blood: to CNS delivery we go. Cell Cycle. 24, 4017-4018 (2009).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
