Количественная оценка образования мембранного оборки с помощью сканирующей электронной микроскопии

Внешние стимуляторы активируют клетки и вызывают трехмерное выпячивание круговой мембраны, или образование мембранного выпячивания, необходимого для различных клеточных активностей.

Чтобы визуализировать образование оборки на мембране, начните с многолуночного планшета, содержащего покровное стекло в основании. В верхней части покровного стекла имеются культивированные макрофаги.

Обрабатывайте эти макрофаги молекулами-стимуляторами, которые активируют клетки, способствуя реорганизации цитоскелета и образованию протрузии мембраны. Наложите на клетки фиксирующий раствор, сшивая белки и сохраняя клеточную структуру.

Обрабатывайте фиксированные макрофаги возрастающими концентрациями спирта для полного обезвоживания. Высушите эти макрофаги с помощью сушилки для критических точек, удалив любые следы воды для лучшей визуализации.

Закрепите покровное стекло на держателе образца для сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) с помощью проводящей ленты. Покройте макрофагсодержащую покровную ленту тонким металлическим слоем, обеспечивающим хорошую электронную проводимость во время визуализации.

Поместите покровное стекло в камеру SEM. Сфокусируйте электронный луч на покровном листе. Электронны