Измерение активности протеасом в различных субклеточных компартментах мозга крысы

Начните с субклеточных ядерных и синаптических фракций, собранных из латеральной миндалины мозга крыс с контрольной обусловливанием и обусловленностью страха.

Каждая субклеточная фракция содержит различные концентрации 20S протеасом, каталитического ядра протеасомного комплекса, ответственного за деградацию нежелательных клеточных белков.

Добавьте в образцы буфер для анализа, содержащий АТФ, и субстрат из флуорогенных пептидов и инкубируйте.

В присутствии АТФ протеасома расщепляет флуорогенный пептид, высвобождая свободные флуорогенные молекулы.

С помощью планшетного ридера измеряйте интенсивность флуоресценции через равные промежутки времени.

Количественно оцените флуоресценцию, сравнив ее с известными стандартными концентрациями флуорогенной молекулы.

Интенсивность флуоресценции пропорциональна активности протеасом в образце.

Повышенная активность протеасом в ядерной фракции крыс с состоянием страха предполагает изменения в экспрессии генов, связанных с памятью, в то время как снижение активности в синаптической фракции указывает на изменения в экспрессии синаптических белков, необходимых для поддержания долговременной памяти.

Чтобы настроить пробу, предварительно прогрейте планш