Измерение множественных митохондриальных параметров в нейронах с помощью проточной цитометрии
Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:09 мин. • July 8th, 2025
Возьмите неподвижные и пермеабилизированные нейроны в трубке.
Добавьте блокирующий буфер для предотвращения связывания неспецифических антител.
Центрифугируйте суспензию и удалите надосадочную жидкость. Затем восстановите нейроны в буфере.
Равномерно перенесите суспензию в пробирки, содержащие первичные антитела, не помеченные и помеченные флуорофорами.
Инкубация, позволяющая антителам специфически связываться с митохондриальной дыхательной цепью или субъединицами комплекса MRC, белком, связанным с митохондриальной ДНК, и белком внешней мембраны митохондрий внутри нейронов.
Удалите все несвязанные антитела.
Инкубируйте с меченными флуорофорами вторичными антителами, которые связываются с немеченными первичными антителами.
Центрифугируйте смесь и выбросьте надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте нейроны в буфере и перенесите их в микроцентрифужные пробирки.
Проточную цитометрию проводят для обнаружения флуоресцентных сигналов на меченых нейронах, соответствующих уровням экспрессии субъединиц комплекса MRC и измерению относительных уровней митохондриальной ДНК.
Заблокируйте образцы в 1 миллилитре блокирующего буфера и промойте клетки центрифугированием с PBS, как показано на рисунке.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео