Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:35 мин. • June 17th, 2025
Начните с адгезивной культуры первичных астроцитов мыши на покровном листе в чашке для культивирования.
Инкубируйте с помощью флуоресцентного ацидотропного зонда, который пересекает неповрежденные клеточные мембраны для проникновения в астроциты.
Зонд избирательно накапливается внутри кислых эндолизосомальных везикул и флуоресцентно помечает везикулы для контроля их транспортировки.
Вымойте для удаления излишков щупа и добавьте свежую среду.
Поместите культуру под конфокальный микроскоп и сфокусируйтесь на одной клетке, чтобы выполнить покадровую визуализацию.
Визуализируйте маркированный груз в виде флуоресцентных точек, распределенных в перинуклеарной области,
цитозоля и астроцитарных процессов.
Захват нескольких фокальных плоскостей вдоль оси Z для визуализации груза по всему объему трехмерной ячейки.
Выполняйте визуализацию через определенные промежутки времени, чтобы отслеживать внутриклеточный транспорт груза на различных глубинах в астроцитах.
Проанализируйте движение груза, чтобы отличить неподвижный груз, груз, движущийся к периферии клетки, и груз, движущийся к ядру.
За 30 минут до визуализации разведите подходящий зонд лизосомального мечения в 200 микролитрах питательной среды а
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео