Поверхностные мышей хирургии лимфатических узлов

Общая цель этой процедуры заключается в хирургическом удалении лимфатических узлов у мыши, находящейся под наркозом. Это достигается путем первичной локализации лимфатических узлов. Лимфатические узлы собираются, а затем разрез закрывается.

Наконец, для экспериментального анализа можно получить суспензию одной клетки. В конечном счете, жизнеспособные популяции лимфоцитов могут быть оценены с помощью проточной цитометрии. Визуальная демонстрация этой техники имеет решающее значение, поскольку для освоения необходимо рассмотреть локализацию и удаление лимфатических узлов.

После обезболивания мыши нанесите глазную мазь, введите бупренорфин и подтвердите седативный эффект ущипыванием пальца ноги, затем переверните мышь на бок. Сначала локализуют плечевой лимфатический узел, а затем бреют область, которую нужно рассекать. После удаления выпавших волосков нанесите дезинфицирующее средство на эту область, а затем сделайте крошечный надрез около пяти миллиметров на тыльной стороне четырех легов.

Используйте две пары щипцов, чтобы растянуть разрез до плечевого лимфатического узла, который может казаться сероватым или темнее, чем может быть виден окружающий жир. Затем перещипывают фасцию, прикрывающую лимфатический узел, одной парой щипцов. Поместите вторую пару щипцов как можно дальше под лимфатическим узлом и слегка потяните за мембрану, не повреждая окружающие ткани.

Затем с помощью первой пары щипцов разорвите фасцию и удалите лимфатический узел. Если лимфоузел был успешно собран, на месте ранее располагался лимфоузел появится пятно крови. Поместите иссеченный лимфатический узел в изотонический раствор, если он опускается, это подтвердит, что собранная ткань является лимфатическим узлом, а не жиром.

Затем убедитесь, что в ране нет волосков, и закройте разрез, склеив две внутренние части кожи вместе и скрепив их одним-двумя зажимами, в зависимости от размера разреза. Теперь локализуйте паховой лимфоузел и побрейте область, которую нужно рассекать. После удаления выпавших волосков нанесите дезинфицирующее средство на эту область, а затем сделайте крошечный надрез примерно в пяти миллиметрах над задней лапой возле брюшка.

После вскрытия разреза двумя парами щипцов, как показано только что для плечевого лимфатического узла, определите паховый лимфатический узел, расположенный в окружающей жировой ткани. Затем удалите лимфатический узел с помощью двух пар щипцов, как показано выше. Опять же, подтвердите успешное забор лимфоузла, обратив внимание на пятно крови, которое появляется там, где ранее располагался лимфоузел, а затем капните паховый лимфоузел в отдельную емкость с изотоническим раствором.

После того, как все лимфатические узлы будут собраны, поместите мышь в клетку и добавьте влажный корм, чтобы мышь могла легко питаться. После операции, примерно через шесть-восемь часов, проверьте мышь, чтобы убедиться, что она не испытывает боли. Внимательно следите за тем, чтобы осанка, походка, взаимодействие с геном и внешний вид шерсти были схожи с таковыми у нормальной здоровой мыши.

Наконец, диссоциируйте лимфатический узел, прижав его к матовым предметным стеклам в чашке Петри, а затем перенесите его в трубку для получения одноклеточной суспензии. После окрашивания клеток на предмет представляющих интерес антигенов клеточной поверхности анализируйте клетки с помощью проточной цитометрии. Здесь показаны диаграммы рассеяния для лимфатических узлов, собранных либо у обезболивающих, либо у принесенных в жертву животных.

Профили и процентное соотношение клеток в воротах живых лимфоцитов двух диаграмм рассеяния одинаковы. Демонстрация того, что хирургия лимфатических узлов является подходящей техникой для забора клеток После освоения операция на лимфатических узлах может быть выполнена за 5-10 минут на мыши, если она выполнена правильно.