Использование Цистометрия в мелких грызунов: исследование мочевого пузыря Chemosensation

Целью данной процедуры является определение влияния химических соединений на функции накопления и опорожнения мочевого пузыря. Это достигается путем имплантации катетера в мочевой пузырь. После короткого восстановительного периода через катетер вводится контрольный раствор в течение 30 минут.

Поскольку внутрипузырное давление и объем мочеиспускания регистрируются в течение еще 30 минут, животному вводят интересующее его соединение. В конечном счете, полученные результаты могут показать, как раздражающие химические вещества также влияют на характер выделения с помощью анализа частоты выделения. Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как регистрация сократительной способности изолированного мочевого пузыря, заключается в том, что функция этого органа может быть изучена в более физиологических условиях.

Например, сохраняется регуляторная деятельность центральной нервной системы. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку этапы операции сложны для изучения, потому что существует ряд технических деталей и маневров, которые необходимо соблюдать, чтобы обеспечить успех эксперимента. Чтобы подготовить трубку, которую вы хотите имплантировать в мочевой пузырь, сначала отрежьте трубку PE 50 нужной длины и наденьте небольшой белый кусочек катетера 18 калибра поверх основного катетера.

Затем создайте небольшую манжету на конце, обжегши один конец трубки и промойте его физиологическим раствором, чтобы выпустить воздух. Теперь индуцируйте анестезию самке крысы в возрасте от 10 до 12 недель с помощью изофа фтора. После введения анестезии установите поддерживающий уровень изофтора.

Расположите животное на спине и наденьте маленькую маску для анестезии, сделанную из шприца объемом 10 куб. см. После бритья живота и дезинфекции дермы приступают к операции. Следующая операция проводится как на крысах, так и на мышах таким же образом.

Начните с выполнения лапаротомии нижней средней линии, чтобы обнажить мочевой пузырь. Далее начинается самая важная часть операции. Под операционным микроскопом поместите кисетной нитевой шов в купол мочевого пузыря с помощью нерассасывающегося моноволокна с шестью нулями.

Далее с помощью иглы выполняют небольшую цистостомию внутри кошельковой нити. Вставьте катетер PE 50 с манжетой через это отверстие. Более тонкие катетерные трубки, такие как PE 10, могут иметь более высокое и переменное сопротивление, поэтому они не рекомендуются.

Закрепите шнур кошелька вокруг трубки с помощью хирургического узла. Затем осторожно потяните катетер наружу, пока кончик манжеты не окажется непосредственно под швом. Кусок катетера 18 калибра проталкивается к шву для предотвращения подтекания.

Проверьте наличие утечек между катетером и мочевым пузырем. С помощью щадящего настоя солевого раствора. Затяните любые протечки дополнительными швами.

Теперь закройте мышцы живота с помощью монофиламентных нитей, оставив проход для катетера в верхней части разреза. Проведите туннель катетера в межлопаточную область с помощью полого металлического стержня, тем самым предотвратив прокусывание трубки животными. После операции металлический стержень следует поместить под кожу и над мышцами живота и тыльной мышцы.

Протолкните стержень через животное подкожно в межлопаточную область. Завершите операцию, закрыв мышцы живота и кожу нерассасывающимися монофиламентными швами. Сейчас очень важно проверить проницаемость и стабильность имплантированного катетера путем промывания его физиологическим раствором.

Раствор для инфузий должен выйти из мочевого пузыря, обжечь мочеиспускательный канал. После подкожного введения анальгетика закройте внешний конец катетера пластиковой пленкой и закрепите катетер на коже нижней части спины крысы. Наконец, дайте животному восстановиться в течение 30 минут.

Перед началом цитометрии убедитесь, что инструменты были правильно откалиброваны. Поместите крысу в метаболическую клетку над емкостью с маслом, которая находится на цифровых весах. Следующим шагом является подключение имплантированного катетера к трехстороннему крану с помощью заглушки для приманки.

Кран должен быть подключен к преобразователю давления и инфузионному насосу. Датчик давления далее подключается через усилитель к системе сбора данных, и компьютер, использующий общедоступное программное обеспечение, начинает контрольные измерения с запуска инфузионного насоса для введения физиологического раствора в мочевой пузырь. В течение 30-минутного периода метаболическая клетка подвешивается над цифровыми весами, которые используются для оценки объема мочеиспускания крысы.

Внутрипузырное давление регистрируется по мере наполнения и опорожнения мочевого пузыря. На следующем этапе препараты могут вводиться системно или внутрипузырно в течение еще 30 минут сбора данных. Когда эксперимент завершен, животное следует принести в жертву.

Типичный след давления у крысы показывает, что во время инфузии жидкости происходит медленное нарастание давления в мочевом пузыре до тех пор, пока не будет достигнут определенный порог. Затем мочевой пузырь сократится, и мочевой сфинктер раскроется, что позволит закапывающемуся раствору пройти через мочеиспускательный канал. Таким образом, мочевой пузырь опорожняется.

Сокращение прекратится, и давление снова упадет до базального уровня. Данные, собранные с помощью мыши, обладают теми же функциями. Цитометрия была использована для идентификации молекулярных мишеней горчичного масла или mo MO является высокореактивным соединением, которое уже давно используется в экспериментальных моделях воспаления и гипералгезии висцеральных органов, таких как мочевой пузырь.

Как и ожидалось, внутрипузырная инфузия 10 миллимолярного МО индуцировала сильное снижение сократительного интервала у мышей дикого типа. Любопытно, что мыши с дефицитом рецептора MO T RPA A имели результат, аналогичный диким типам в тех же условиях. Напротив, MO индуцировал гораздо более слабое изменение системных параметров у мышей с нокаутом TRP V one, чем у мышей дикого типа, двойные нокаут как TRPA one, так и TRP V one почти не реагировали на дозу Mmo.

Данные свидетельствуют о том, что TRP V one может играть ключевую роль в висцеральном раздражении, вызванном mo. Средняя частота мгновенного мочеиспускания до и во время внутрипузырной инфузии МО подтверждает эти данные. Средняя частота показана относительно инфузии физраствора.

Во время этой процедуры важно убедиться, что катетер остается прочно прикрепленным к мочевому пузырю, чтобы не было утечки раствора в брюшную полость. После просмотра этого видео следует хорошо понимать, как измерять внутрипузырное давление, что влечет за собой имплантацию катетера в мочевой пузырь и помещение бодрствующих или обезболенных животных в стадию цитометрии под контролируемым обилием мочевого пузыря.