Основной Caenorhabditis Элеганс Методы синхронизации и наблюдения

В этом видео мы покажем вам, как синхронизировать C elegance на первом уровне. Это простой метод, но очень распространенный, поэтому он будет довольно полезным. Вы все еще новичок.

Если вы являетесь экспертом по C, вы можете найти здесь несколько советов по оптимизации этого протокола. В основе синхронизации глистов лежит относительная устойчивость клена и эмбрионов к раствору щелочного гипохлорита взрослых особей кроликов. Эти взрослые черви с большим количеством эмбрионов внутри инкубируются с раствором гипохлорита, так что они погибают, и остаются только эмбрионы.

Вторая часть синхронизации достигается за счет недостатка пищи, так что даже несмотря на то, что эмбрионы заражаются в разное время, они не развиваются дальше L. Первым шагом для начала блиц-протокола является наличие червей на стадии закладки яиц и высыпание нескольких яиц на тарелку. Используйте М девять, чтобы вернуть взрослых особей и собрать урожай.

Кроме того, эмбрионы уже ведут поверхность пластины и могут быть соскоблены с помощью мягкого материала, такого как кусок рентгеновской пленки, смывают бактерии, восстановившиеся с помощью нескольких М девяти промывок. Обычно достаточно пары. После того, как черви были вымыты, пришло время добавить свежеприготовленный отбеливающий раствор в соответствии с нашими предпочтениями.

Контролируйте время инкубации, пока вы встряхиваете трубку. Вы можете наблюдать за рождением взрослых особей под стереомикроскопом. Если туши почти не рекомендуются, остановите реакцию, добавив М 9 до тех пор, пока пробирка полностью не заполнится.

Чтобы закончить протокол, выполните не менее трех стирок. При использовании M nine яйца инкубируются с непрерывным перемешиванием в течение ночи в буфере M nine, что позволяет вылупиться, но предотвращает дальнейшее развитие червей. Хотя синхронизация может выполняться при любой температуре от 15 до 25 градусов, рекомендуется использовать 15 градусов.

Поскольку развитие происходит медленнее, как мы уже упоминали во время своего развития, элеган проходит четыре личиночные стадии до взрослого возраста, время, зависящее от температуры, при которой он выращивается. В то время как тип С элган хорошо переносит температуру роста в пределах от 15 до 25 градусов. Однако темпы роста выше.

Верхняя температура здесь, можно увидеть, как через 24 часа, стадии, на которых находятся черви, отличаются. При 15 и 25 градусах через 48 часов при 25 градусах мы уже наблюдаем эмбрионы. Однако мы должны ждать более 80 часов, чтобы увидеть эмбрионы на поверхности пластин.

При выращивании червей при температуре 15 градусов для получения оптимальных результатов необходимо учитывать несколько моментов при проведении эксперимента с блицингом. Также важно распознать червей, которые являются стадией желания для проведения эксперимента. Поэтому мы покажем вам, как различать стадии по размеру, дифференциальной интерференции, контрастной микроскопии или окрашиванию.

На этом графике вы можете оценить скорость роста GaN червей, в зависимости от температуры, как мы говорим, выращиваются гораздо быстрее при 25 градусах. Существует корреляция между размерами животных и развитием морских элементов. С помощью соответствующего программного обеспечения можно измерить животных, а затем классифицировать их по соответствующим показателям развития.

Однако, согласно этому графику, сайт является валовым маркером стадий развития. Более согласованная стадия может быть достигнута путем наблюдения за частями морей, анатомии, которая может быть использована и распознана либо с помощью дифференциальной интерференции, либо с помощью контрастной микроскопии, либо с помощью окрашивания DPI. В нашей лаборатории мы использовали этот протокол для синхронизации червей для различных экспериментов, таких как микрояйца при моноокрашивании, визуализации in situ и окрашивании вверх.

Более того, этот протокол также помогает вам избавиться от загрязнений. Для усиления контраста используется дифференциальный интерференционный контраст или номарная микроскопия. В неокрашенных прозрачных образцах животные устанавливаются живыми на основание 2%.Агрос агрос может быть предварительно подготовлен и при необходимости храниться при четырех градусах.

Его можно расплавить и держать при температуре 65 градусов. Как только агрос растает, наклейте немного ленты на предметное стекло и поместите их по обе стороны от третьего предметного стекла. Аккуратно возьмите немного агроса и положите каплю на горку без скотча.

Накройте агрос еще одной горкой, расположенной поперечно. Как только дорожка станет сплошной, разделите два слайда, осторожно скользя один по другому. Подушечка будет прилипать к одному из них.

Добавьте немного амазонки на подушечку, чтобы обездвижить червей. Соберите несколько червей под препарирующим микроскопом и перенесите их в каплю леле. Избегайте повреждения дорожки.

Возьмите накладку и нанесите немного лака для ногтей по краям Осторожно поместите защитную накладку на эту горку, предотвращая образование кишечника. Препарат можно наблюдать сразу под микроскопом. Одной из самых простых особенностей анатомии c Элгана является Альва.

Например, аава с формой рождественской тройки характерна для стадии L четырех. Подробную информацию об анатомии селган через разработку можно получить в www.orla.org. Окрашивание таписом является распространенной процедурой для идентификации отдельных клеток.

Фиксация с помощью тоннеля является быстрым методом фиксации червей. Для окрашивания пятен сначала добавьте каплю буфера M nine на поверхность предметного стекла микроскопа. Сорвите несколько червей прямо с пластины и перенесите их в каплю М девять.

Устраняют избыток М девяти либо трубкой, либо мягкой тканью. Добавьте к червям туннель. Сделайте это снова.

Как только первая капля высохнет, добавьте немного монтажного материала с API и просыпателем, прежде чем поднести препарат к микроскопу. За развитием го можно легко наблюдать в теплом стенте с api.