Ортотопическая резекционная мышиная модель рака поджелудочной железы

Этот протокол описывает надежную и воспроизводимую хирургическую резекционную модель рака поджелудочной железы у мышей, которая может быть использована для тестирования адъювантной и неоадъювантной терапии. Этот метод сочетает в себе ортотопическую модель коинфекции, которая эффективна при повторении рака поджелудочной железы человека, с безопасной и эффективной техникой резекции поджелудочной железы. В то время как в данном протоколе описана иммунодефицитная модель, может быть выполнена альтернативная иммунокомпетентная модель с использованием опухолевых клеток КПК, имплантированных мышам типа C57 «черная шестерка».

Эта альтернатива была бы полезна для тестирования иммунной терапии. Для начала поместите мышь, находящуюся под наркозом, на стерильное поле в положении лежа на спине и нанесите повидон-йод, а затем 70% этанол для подготовки кожи. Рассеките кожу, сделав продольный разрез в левом краниальном квадранте брюшной полости, и надрежьте мышечные слои между щипцами.

После установки шприца с клеточной суспензией на инъекционное устройство поместите тампон из кисетной оболочки на разрез лапаротомии и выведите наружу селезенку и хвост поджелудочной железы через отверстие тампона. Затяните кошельковые нити, аккуратно смойте тампон и обнажите хвост поджелудочной железы для инъекции, следя за тем, чтобы марля соприкасалась с поджелудочной железой по окружности, но не сдавливала ее. Обхватите хвост поджелудочной железы с помощью щипцов и аккуратно надавите на него на боковое напряжение.

Проколите иглой поджелудочную железу, скос вверх и продвигайте ее, при этом кончик иглы слегка приподнят вверх до тех пор, пока скос полностью не войдет в брюшину. Медленно и контролируемо вводите в паренхиму поджелудочной железы клеточную суспензию. После инъекции удерживайте иглу на месте в течение нескольких секунд перед извлечением, чтобы свести к минимуму утечку.

Используйте тампон, смоченный повидоном-йодом, чтобы осторожно промокать участок, чтобы впитать любую случайно вытекающую клеточную суспензию. Верните селезенку и поджелудочную железу обратно в ортотопическое положение и закройте брюшную стенку швом полигликолевой кислоты 5-0. Закройте кожу зажимами.

Сделайте продольный разрез на коже левого краниального квадранта брюшной полости. Желательно через место предыдущего разреза. Тупо разрежьте кожу с нижней мышечной брюшной стенки и установите полностью удерживающийся ретрактор, чтобы удерживать рану открытой.

Надрежьте мышечный слой между щипцами, как раз с одной стороны от линии шва предыдущей операции. А затем расширить разрез, чтобы иссечь всю предыдущую линию шва. Выведите селезенку и поджелудочную железу наружу, втянув ее краниально.

В этом случае были обнаружены некоторые спайки, прикрепленные к нижней части опухоли. Она была разделена на прижигание. Толстая кишка может быть прикреплена к каудальной части поджелудочной железы пленчатыми спайками.

Если это обнаружено, резко рассеките толстую кишку. Обнажите сегмент поджелудочной железы для перевязки, осторожно проведя пару щипцов дорсально к сосудам селезенки на теле поджелудочной железы. Переложите проксимальную к опухоли поджелудочную железу с помощью титанового зажима, а затем пересеките поджелудочную железу дистальнее этого с помощью прижигания.

В качестве альтернативы следует перевязать поджелудочную железу непрерывно с помощью 5-0 полигликолевой кислоты перед пересечением, чтобы контролировать культю поджелудочной железы. Осторожно втяните поджелудочную железу каудально и прижгите желудочно-селезеночные сосуды между краниальным полюсом селезенки и желудком. Имейте в виду, что сосуды небольшие и могут легко кровоточить при взводе или недостаточном прижигании.

Такие сосуды могут втягиваться в брюшную полость и вызывать кровотечение, которое может быть трудно контролировать. Извлеките образец и осмотрите место операции для подтверждения гемостаза. Непрерывно закройте брюшную стенку швом полигликолевой кислоты 5-0 и закройте кожу зажимами.

Из 59 последовательных мышей, перенесших операцию по имплантации, грубая утечка произошла у восьми мышей. После трех недель роста опухоли биолюминесцентная визуализация перед резекцией позволила исключить мышей с грубым метастатическим заболеванием из хирургической резекции. Таким образом, осталось 45 мышей, которые приступили к панкреатэктомии.

Процедура была успешно проведена на 100% мышах. Макроскопический проксимальный край поджелудочной железы, превышающий пять миллиметров, был достигнут у 43 из этих мышей. На момент резекции локальные метастазы были обнаружены у девяти из 45 мышей.

В дополнение к метастазированию в линию шва, у трех мышей наблюдались изолированные метастатические узелки на большом изгибе желудка и субкапсулярный узел на печени у одной мыши. Местная экстрапанкреатическая инвазия произошла у шести мышей с прямой инвазией в линию шва у пяти мышей и в печень у одной мыши. Через неделю после резекции у 32 мышей максимальный коэффициент излучения составлял менее 10, что указывает на минимальное остаточное заболевание или его отсутствие.

Среднее время операции от индукции анестезии до закрытия составило 22 минуты. Ключевым этапом в процедуре резекции является распознавание бескровной эмбриологической плоскости дорсально к сосудам селезенки и поджелудочной железе. Рассечение этой плоскости освобождает сегмент поджелудочной железы для последующей лигирования.

После резекции мышей можно лечить адъювантной терапией. Затем можно оценить прогрессирование заболевания с помощью биолюминесцентной визуализации в сочетании с результатами вскрытия и выживаемостью животных, в зависимости от местных протоколов этики животных.