Модель обструктивного хронического панкреатита, установленная с помощью электрокоагуляции

Существует множество методов построения животных моделей хронического панкреатита, включая внутрибрюшинную инъекцию натрия и перевязку протока поджелудочной железы, которые имеют свои ограничения. Наша команда недавно разработала новую модель электрокоагуляции хронического панкреатита у мышей, преимущество которой заключается в том, что она не требует длительных инъекций лекарств или сложного метода для освоения. И они могут легко установить модель хронического панкреатита.

Использование электрической коагуляции для индуцирования хронического панкреатита у мышей представляет собой более удобную и экспериментальную модель, предлагающую многообещающее направление для будущих исследований в этой области. Для начала поместите мышь под наркозом на грелку, чтобы поддерживать температуру тела. С помощью триммера сбрейте волосы между грудью и нижней частью живота.

Затем с помощью ножниц сделайте двухсантиметровый разрез в центральной части живота, а затем разрез длиной в один сантиметр между верхней частью живота и мечевидным отростком. Используйте абдоминальный расширитель, чтобы определить область поджелудочной железы для электрокоагуляции. С помощью стерильного ватного тампона определите двенадцатиперстную кишку с задней части левой верхней части живота и поверните ее, чтобы визуализировать желчный проток, соединяющий печень.

Временно окклюзируйте проксимальный общий желчный проток с помощью микрососудистого зажима для предотвращения ретроградной инфузии в печень. Подсоедините полиэтиленовую трубу размером 0,25 на 0,35 миллиметра к игле диаметром 0,25 миллиметра и проколите область, окружающую ампулу, стремясь к большому сосочку двенадцатиперстной кишки. Вставьте трубку в сосочек и пропустите его наполовину в желчный проток, затем остановите вход.

Запустите инфузионный насос и вливайте 0,2% раствор метиленового синего до тех пор, пока проток поджелудочной железы не станет синим. После инфузии вытащите полиэтиленовую трубку и снимите микрососудистый зажим. С помощью стерильных ватных палочек зафиксируйте поджелудочную железу, а электрокоагуляционный нож направьте на участок синего цвета.

После установки рабочих параметров электрокоагуляции используйте в качестве материала электродов чистую медь и нанесите обработку на поджелудочную железу на две-три секунды, избегая при этом кровеносных сосудов. Продолжайте электрокоагуляцию до тех пор, пока окрашенная метиленовым синим цветом область не изменит цвет на желтый или коричневый. Когда раствор для окрашивания в синий цвет больше не виден в поджелудочной железе, прекратите электрокоагуляцию.

После операции поместите мышь в полиэтиленовую коробку, выстланную подстилочным материалом. После электрокоагуляции протока поджелудочной железы сделайте мышь под наркозом и поместите ее на операционную платформу. Чтобы собрать кровь через орбитальное сплетение, аккуратно придерживайте кожу на спине, чтобы создать небольшое выступание глазного яблока.

Затем поместите конец капиллярной трубки в уголок глаза и аккуратно введите его под глазное яблоко под углом от 30 до 45 градусов. Вращайте капилляр до тех пор, пока не начнет течь кровь. После сбора крови закройте веки, слегка надавливая марлей.

Центрифугируйте кровь при 1, 200г в течение 15 минут и соберите надосадочную жидкость в новую пробирку. Измерьте амилазу, билирубин и гиалуроновую кислоту с помощью имеющихся в продаже наборов, следуя рекомендациям производителя. Далее поместите усыпленную мышь на операционный стол, установленный при температуре четыре градуса Цельсия.

С помощью ножниц и щипцов сделайте V-образный разрез в брюшной стенке, чтобы обнажить брюшную полость. Удалите поджелудочную железу и разделите ее на три части для окрашивания. Зафиксируйте поджелудочную железу в 4% растворе полиформальдегида, затем вставьте неподвижную поджелудочную железу в парафин для разрезания.

Парафиновые блоки разрезать на участки толщиной 0,5 миллиметра и окрашивать их гематоксилином и эозином, а также красителем Массона для иммуногистохимического анализа. Понаблюдайте за окрашенной тканью поджелудочной железы под световым микроскопом. Окрашивание гематоксилин-эозином показало рассеяние ацинарных клеток поджелудочной железы и признаки хронического панкреатита в группе электрокоагуляции на 14-е сутки.

На 28-е сутки наблюдались признаки восстановления тканей и обращения вспять патологии в ацинарных клетках поджелудочной железы. Окрашивание по методу Массона выявило значительно больше фиброза в группе электрокоагуляции по сравнению с фиктивной группой. Иммуногистохимическое окрашивание показало повышенный уровень альфа-первого, коллагена первого типа и альфа-гладкомышечного актина в группе электрокоагуляции, что указывает на более высокую степень хронического панкреатита.

Уровень гиалуроновой кислоты увеличился в группе электрокоагуляции, достигнув пика примерно на 21-й день, оставаясь стабильным в группе симуляции. Уровень билирубина значительно повысился к 14-му дню в группе электрокоагуляции, показав пик примерно на 21-й день, в то время как в группе симуляции изменений не наблюдалось. Уровни амилазы в группе электрокоагуляции подскочили на 14-й день, за которым последовало снижение к 28-му дню, при этом в симуляционной группе наблюдались незначительные вариации.