El procedimiento quirúrgico para el suministro de células madre embrionarias derivadas de las células endoteliales de las extremidades inferiores isquémicas se demuestra, con no invasiva de seguimiento por imágenes de bioluminiscencia.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Células madre embrionarias-las células endoteliales derivadas de tratamiento de la isquemia Miembro Posterior
En este artículo
Resumen
Resumen
Enfermedad arterial periférica (PAD) se debe a un estrechamiento de las arterias periféricas que irrigan sangre oxigenada y nutrientes a las piernas y los pies, esta patología provoca síntomas como la claudicación intermitente (dolor al caminar), dolorosas úlceras isquémicas, o incluso gangrena del miembro en peligro. Se cree generalmente que el endotelio vascular, una monocapa de células endoteliales, que invierte la superficie luminal de los vasos sanguíneos y linfáticos, juega un papel dominante en la homeostasis vascular y la regeneración vascular. Como resultado, las células madre basado en la regeneración del endotelio puede ser un enfoque prometedor para el tratamiento de PAD.
En este vídeo, se demuestra el trasplante de células madre embrionarias (ESC)-derivados de las células endoteliales para el tratamiento de la isquemia hindimb unilateral como un modelo de PAD, seguido por el seguimiento no invasivo de homing de las células y la supervivencia de imágenes de bioluminiscencia. Los materiales y procedimientos específicos para la entrega de la celda y las imágenes se describen. Este protocolo sigue a otra publicación en la descripción de la inducción de isquemia extremidades inferiores por Niiyama et al 1.
Protocolo
1. Diferenciación de los CES murino en células endoteliales
- El protocolo para la diferenciación de los CES en las células endoteliales se describe en otro lugar y no es el objetivo de este protocolo 2,3. En pocas palabras, las células pueden diferenciarse, y las células que son positivas para los marcadores endoteliales como el CD31 o caderina del endotelio vascular (VE-cadherina) se purifican por clasificación celular activado por fluorescencia (FACS).
2. La construcción de la fusión de genes reportero doble y transducción de lentivirales
- Bioluminiscencia puede ser usado para rastrear las células qu....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
CES es una fuente de células prometedoras para el tratamiento de la isquemia tisular, debido a su plasticidad de diferenciación y su capacidad de dar lugar a linajes de células que comprende las tres capas germinales, incluyendo las células endoteliales. Para superar los problemas éticos asociados con la CES, células madre pluripotentes inducidas (CMPi) puede ser una madre pluripotentes alternativa fuente de células que supera las preocupaciones éticas. Además de los CES, las células madre adultas, como las células progenitoras endoteliales.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Velotta Jeff, MD, Hoyt Grant, Robert C. Robbins, MD, Yu Jin, MD, Tim Doyle, PhD, y el Stanford pequeño núcleo de imágenes de animales para la asistencia técnica. Los autores también agradecen AM Bickford, Inc. para el apoyo del equipo de veterinarios. Esta investigación fue financiada por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), el tabaco de California las enfermedades relacionadas con el Programa de Investigación de la Universidad de California (15IT-0257 y 0169-1514RT) , y el Instituto de Medicina Regenerativa de California (RS1-00183).
NH es a....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Herramientas quirúrgicas | Herramienta | Fine Science Tools | ||
| Aguja de jeringa | Herramienta | BD Biosciences | Se prefiere una jeringa de insulina de 28G | |
| Solución salina tamponada con fosfato | Reactivo | Invitrogen | ||
| D-luciferina | Reactivo | Biosynth International, Inc | Preparar D-luciferina con antelación en soluciones stock filtradas de 15 mg/mL en PBS | |
| Sistema de imagen de bioluminiscencia IVIS 200 y software de adquisición | Equipo |  Xenogen Corporation |
Referencias
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
