通过乳腺成像窗口Dendra2 Photoswitching

摘要

Dendra2标记通过乳腺成像窗口肿瘤细胞的活体photoswitching和跟踪是一种技术，它使我们的图像多天的时间刻度选择了肿瘤微环境中的肿瘤细胞的转移行为。

摘要

在过去的十年，活体显微镜的分辨率在单细胞在小鼠和大鼠乳腺肿瘤

方案

1。荧光肿瘤生成肿瘤细胞注射到乳腺脂肪垫：

1. 长出的细胞系表达Dendra2蛋白（细胞质标记）40 - 80％汇合。
2. 冲洗菜至少3次，用PBS W / O ^型的Ca ² +或^{Mg 2} + 。
3. 添加每10厘米的菜，并培育3毫升的胰蛋白酶在37℃直至大部分细胞分离，然后撞到一个平面上动摇它的菜。
4. 冲洗关闭菜中的所有细胞，并用刮板（橡胶警察），以及收集矩阵。新增的5毫升的PBS。取一个分装在离心计数。
5. 离心5分钟，在800克。
6. 吸用PBS重悬，以浓度为5 - 10倍10 ^{6 /}毫升。冰商店，直到注射（30 min内注入）。
7. 无菌罩内含有4-5周龄女性免疫（如免疫缺陷）缺陷小鼠放在一个笼子里。
8. 第四届（腹部）用70％乙醇的乳头周围喷洒的面积。
9. 乳腺脂肪垫注入0.1毫升。如果可以找到一个助手，一个人就可以举行到位的鼠标，而其他针插入乳腺脂肪垫内。如果你自己注射用异氟醚，浅麻醉下鼠标。
10. 一旦肿瘤已经发展到5-​​7毫米，乳腺影像窗口（MIW）应插入。
    注：另外，对于某些应用，可以插入MIW健康的乳腺脂肪垫的顶部和细胞随后被注入。这种方法允许在生理环境中瞬时转染的细胞成像。

2。手工制作的乳腺影像窗口（....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
PBS w/o Ca, Mg	GIBCO，由Life Technologies生产	14190-144
胰蛋白酶	GIBCO，由Life Technologies生产	25300
HBSS	GIBCO，由Life Technologies生产	14025
DMEM培养基（MDA-MB-231细胞）	GIBCO，由Life Technologies生产	11965
异氟烷（Aerrane）	Baxter Internationl Inc.	# NDC 10019-773-40
SCID小鼠	国家癌症研究所	N/A
培养皿	BD Biosciences	353003	定制订单
圆形盖玻片 8 mm	Scientific, Inc.	8CIR-1-FIS