الأسطورة يسمح للكشف حساسة للتفاعلات عابرة ومستقرة بين البروتينات التي يتم التعبير عنها في البيرة الكائن السكيراء النموذج. وقد تم تطبيقه بنجاح لدراسة خارجية والخميرة بروتينات الغشاء لا يتجزأ من أجل تحديد شركائهم التفاعل بطريقة إنتاجية عالية.
دفعت الأهمية الأساسية والسريرية البيولوجي للبروتينات الغشاء لا يتجزأ من تطوير نظام الخميرة المستندة لتحديد إنتاجية عالية من البروتين البروتين التفاعلات (PPI) لبروتينات عبر الغشاء كامل طول. تحقيقا لهذه الغاية ، وضعت في مختبرنا تقسيم اليوبيكويتين الخميرة يستند الغشاء الهجين ثنائي (الأسطورة) النظام. تسمح هذه التكنولوجيا للكشف عن البروتين حساس للتفاعلات عابرة ومستقرة به<em> السكيراء الجعوية</em> بوصفها الكائن المضيف. الأسطورة يستفيد من الملاحظة التي يمكن فصلها إلى قسمين اليوبيكويتين شاردات مستقرة : C – النصف النهائي للخميرة اليوبيكويتين (C<sub> UB</sub>) والنصف N – محطة للشاردة اليوبيكويتين (N<sub> UB</sub>). في الأسطورة ، ويتم تكييف هذا المبدأ لاستخدامها بوصفها "الاستشعار" من البروتين البروتين التفاعلات. باختصار ، هو تنصهر الطعم الغشاء لا يتجزأ من البروتين إلى C<sub> UB</sub> الذي يرتبط إلى عامل النسخ الاصطناعية. البروتينات الفريسة ، سواء في شكل فردي أو مكتبة ، وتنصهر في N<sub> UB</sub> شاردة. التفاعل بين البروتين الطعم وفريسة يؤدي إلى إعادة تشكيل شاردات اليوبيكويتين ، وتشكيل كامل طول "الزائفة اليوبيكويتين' الجزيء. هذا الجزيء هو بدوره معترف بها من قبل الإنزيمات deubiquitinating عصاري خلوي ، مما أدى إلى انشقاق عامل النسخ ، وتحريض لاحقة في التعبير الجيني المراسل. النظام قابل للتكيف إلى حد كبير ، وخاصة مناسبة تماما لفحص سرعة عالية. وقد استخدمتها بنجاح لتحقيق التفاعل باستخدام بروتينات الغشاء لا يتجزأ من كل من الخميرة وغيرها من الكائنات.
الأسطورة هي أول نظام الإنتاجية العالية التي تسمح بتحديد من التفاعلات بين البروتينات الغشاء كامل طول وعصاري خلوي أو غشاء محدد الشركاء. وقد تم استخدامه لدراسة البروتين الغشاء من مجموعة من الكائنات [3-7]. هناك ، ومع ذلك ، والتفاصيل المحددة التي قد تحتاج إلى تمحيص لضمان ال…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نشكر ادموندز الفجر لقراءة نقدية لهذه المخطوطة. يتم اعتماد مختبر Stagljar من أموال من المؤسسة الكندية للابتكار (CFI) ، والمعهد الكندي للبحوث الصحية (CIHR) ، ومؤسسة القلب والسكتة الدماغية ، وجمعية السرطان الكندية ، وشركة نوفارتيس.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Polyethenlene Glycol (PEG3350) | Bioshop | PEG335 | ||
Lithium Acetate Bihydrate | Bioshop | LIA001 | ||
X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside) | Bioshop | XGA001 | ||
N`,N-dimethyl formamide | Bioshop | DMF 451 | ||
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT) | Bioshop | ATT124 | ||
Sodium phosphate dibasic | Bioshop | SPD307 | ||
Sodium phosphate monobasic | FisherBiotech | BP329-500 | ||
Salmon Sperm DNA | VWR | CA80601-120 | ||
D-Glucose | Bioshop | GLU501 | ||
LB Broth LENOX | Bioshop | LBL405 | ||
Yeast Nitrogen Base | Bioshop | YNB406 | ||
Yeast Extract | Bioshop | YEX401 | ||
Peptone | Beckton Dickinson | 211677 | ||
Bio-Tryptone | Bioshop | TRP402 | ||
Adenine Sulphate | Bioshop | ADS201 | ||
L-Uracil | Bioshop | URA241 | ||
L-Threonine | Bioshop | THR002 | ||
L-Histidine | Bioshop | HIS200 | ||
L-Methionine | Bioshop | MET222 | ||
L-Valine | Bioshop | VAL201 | ||
L-Phenylalanine | Bioshop | PHA302 | ||
L-Isoleucine | Bioshop | ISO910 | ||
L-Tyrosine | Bioshop | TYR333 | ||
L-Leucine | Bioshop | LEU222 | ||
L-Arginine | Bioshop | ARG006 | ||
L-Tryptophane | FisherBiotech | BP395-100 | ||
L-Lysine | Bioshop | LYS101 | ||
L-Alanine | FisherBiotech | BP369-100 | ||
Agar | Bioshop | AGR001 | ||
Soda Lime Galss Beads | BioSpec Product | 11079105 | ||
Sodium Chloride | Bioshop | SLD002 |