Overview
यह वीडियो बायोएक्टिव यौगिकों के आंतों के तेज का मूल्यांकन करने के लिए आंत को अलग करने की तकनीक का वर्णन करता है। इस नमूने में, हम इम्यूनोस्टिमुलेंट्स के तेज का विश्लेषण करने के लिए आंत को वयस्क जेब्राफिश से अलग कर देंगे।
Protocol
1. जेब्राफिश आंत विच्छेदन
- एक निर्धारित अवधि के बाद इंटुबेशन(जैसे, 5 घंटे और/या 24 घंटे) के बाद, मछली को इच्छामृत्यु के लिए ३०० मिलीग्राम/एल एथिल 3-अमीनोबेनजोएट मीथेनसुलफोनेट (एमएस-२२२) समाधान में नेट का उपयोग करके रखें । सुनिश्चित करें कि ऑपरकुलम आगे बढ़ना बंद हो जाता है और कोई पूंछ चुटकी पलटा नहीं है। पांच मिनट सामान्य रूप से पर्याप्त है।
- एक नेट के साथ इच्छामृत्यु जानवर उठाओ और यह एक फिल्टर कागज पर जगह है।
नोट: आंत के साथ चिपकने वाले ऊतक को हटाने के लिए फिल्टर पेपर बहुत उपयोगी है। - तेज विच्छेदन कैंची का उपयोग करके, गुदा से ऑपरक्यूलम तक अर्ध-गोलाकार चीरा बनाएं और ठीक चिमटी का उपयोग करके खुला चीरा दें। आंत के दोनों सिरों को काटें, सभी आंतरिक अंगों को बाहर निकालें, और उन्हें फिल्टर पेपर पर रखें।
सावधानी: सेल मेटाबॉलिज्म और डेथ को कम करने के लिए जल्दी से काम करें।
नोट: वैकल्पिक रूप से, पीबीएस और बर्फ पर चिपकने वाले ऊतक को हटा दें। - आंत को आंतरिक अंगों से अलग करें जिससे इसके अभिविन्यास (पीछे आंतों के खंड तक पूर्वकाल) रखना सुनिश्चित किया जा सके और इसे फैलाया जा सके। आमतौर पर, आंत का पूर्वकाल खंड पीछे के खंड की तुलना में व्यापक होता है। विच्छेदन करते समय आंत के सभी प्राप्त करने के लिए ध्यान रखें।
नोट: पीछे का अंत छोटी मछलियों में काफी ठीक और नाजुक है और विशेष रूप से जानवरों और लेफ्टिनेंट;0.7 ग्राम में टूट सकता है। - आंत से चिपकने वाले ऊतक को अलग करने के लिए चिमटी के साथ फिल्टर पेपर पर आंत को रोल करें।
- विभिन्न डाउनस्ट्रीम विश्लेषणों के लिए आंत तैयार करने के लिए आगे बढ़ें
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
