Bu video kullanımını gösterir In vivo Biyoparlaklık görüntüleme sıçanlarda Engineered Kalp Dokusu implantasyonu (EHT) sonra bağışıklık yanıtlarını okumak için.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme
Bu makalede
Özet
Özet
Çeşitli kardiyak doku mühendisliği teknikleri, yerli veya biyoyapay ya iskele malzemeleri, örneğin fibrin ve kollajen gibi hidrojeller, kardiyak miyositler miyosit mono tabakaları 1 tuzak ve istifleme kullanarak iskele stratejileri de dahil olmak üzere geçmiş yıllarda takip edilmiştir . Bu kavramlar tehlikeye kalp fonksiyonu (örneğin miyokard enfarktüsü sonra) restorasyonu veya deneysel modellerde (örneğin tahmin toksikoloji ve madde taraması ya da hastalık modelleme) olarak hedefliyoruz. Mühendislik kalp dokusu (EHT) implantasyon sonrası hücre sağkalım hassas izleme biyoparlaklık görüntüleme (BLI) teknikleri 2-vivo kullanarak mümkün hale gelmiştir. Burada bir ateşböceği lusiferaz (3 ROSA / lusiferaz LEW Tg) her yerde ifade ile transgenik sıçan suşu fibrin tabanlı EHT nesil açıklar. İmplantasyon EHT implantasyon sonrası alıcı organizmanın bağışıklık yanıtlarını değerlendirmek için farklı sıçan suşlarının büyük omentum içine yapılır. BLI ve Enzim Bağlı İmmüno Nokta Tekniği (ELISPOT) bağışıklık yanıtlarının değerlendirilmesi için BLI kullanılabilirlik onaylayın tarafından oluşturulan sonuçların karşılaştırılması.
Protokol
1. EHT Üretimi ve Kültür Koşullar
Fibrin EHT imalatı başka yerde 4 açıklandığı gibi yapıldı. Kısacası, implantasyon amaçlı fibrin tabanlı EHT oluşturmak için, bir master karışımı yenidoğan ROSA / lusiferaz LEW transgenik sıçan kalpleri, sığır fibrinojen ve Matrigel izole hücreler içeren hazırlanmıştır. Agaroz döküm kalıpları, 6 kuyu kültür yemekleri yerleştirilen teflon ayırıcılar kullanılarak hazırlanmıştır. Agaroz katılaşma sonra, ayırıcılar çıkarıldı ve silikon yazılan rafları, kalıplar içine ulaşan mesajların kültür kaplarına yerleştirildi. EHT oluşturmak için, Mastermix kısaca trombin hesaplanan miktarı ile karıştırılır ve k....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Klinik uygulama önce kalp onarımı için EHT teknoloji, implantasyon sonrası hücresel ve matriks bileşenleri veya greft sağkalım immünojenitesini gibi temel sorular deneysel modellerde değerlendirilmesi gerekir. In-vivo biyoparlaklık görüntüleme transplantasyonu sonrası izleme hücrenin hayatta kalabilmek için yeni ve yararlı bir tekniği temsil eder . Biz başarıyla içeren fibrin tabanlı EHT oluşturulan olumlu lusiferaz (luc +) kurulmuş bir protokol 4 adaptasyon kalp hücreleri. Bu EHT alıcı sıçanların bü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi ve Arne Hansen Deutsche Forschungsgemeinschaft (SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1 DFG) fon aldı. Bu çalışma aynı zamanda, Avrupa Birliği Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart ve Angioscaff) hibe tarafından desteklenen oldu.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
- LEW-Tg (Gt (ROSA) 26Sor-luc) 11Jmsk sıçan (NBPR sıçan numarası 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Sığır fibrinojen (% 0.9, Sigma F4753 stok solüsyonu: NaCl içinde 200 mg / ml artı aprotinin 5 mg / ml fibrinojen)
- Matrigel (BD Bioscience 356.235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- At serumu (Gibco 26.050)
- Penisilin / streptomisin (Gibco 15140)
- İnsülin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-luciferase (Biosynth L-8220)
- Enzim-linked immunosorbent spot (ELISPOT) tahlil plakaları (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Kaynaklar
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Tr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
