Análisis cuantitativo de la metástasis del cáncer utilizando un modelo de embrión aviar

Resumen

El uso de PCR cuantitativa, se demuestra cómo la bien establecida chica modelo CAM se puede utilizar para analizar cuantitativamente la metástasis de células tumorales humanas a órganos distantes.

Resumen

En las células de la metástasis del cáncer de difundir el tumor primario, invaden los tejidos circundantes, y se extendió a órganos distantes. La metástasis es un proceso complejo que puede involucrar a muchos tipos de tejido, los períodos de duración variable de tiempo, y con frecuencia se producen en lo profundo de los órganos, por lo que es difícil de investigar y cuantificar. Además, la eficacia del proceso de metástasis está influido por diversas etapas de la cascada metastásica lo que hace difícil evaluar la contribución de un solo aspecto de la conducta de las células tumorales. Como consecuencia de ello, los ensayos de metástasis se realiza con frecuencia en animales de experimentación para proporcionar un contexto necesariamente realista en el que para estudiar la metástasis. Desafortunadamente, estos modelos se complica aún más por su compleja fisiología. El embrión de pollo es un único modelo in vivo que supera muchas limitaciones para el estudio de la metástasis, debido a la accesibilidad de la membrana corioalantoidea (CAM), un bien vascularizado extra-embrionarios de tejido situado debajo de la cáscara del huevo que es receptivo a los xenoinjertos de células tumorales (figura 1). Por otra parte, desde el embrión de pollo es, naturalmente, inmunodeficientes, la CAM fácilmente compatible con el injerto de tejidos normales y tumorales. Lo más importante, la CAM aviar apoya exitosamente la mayoría de características de las células del cáncer, incluido el crecimiento, la invasión, la angiogénesis y la remodelación del microambiente. Esto hace que el modelo excepcional para la investigación de las vías que conducen a la metástasis del cáncer y para predecir la respuesta del cáncer metastásico de nuevas terapias potenciales. La detección de células diseminadas por especies específicas PCR Alu hace posible evaluar cuantitativamente la metástasis en órganos que son colonizados por tan sólo 25 células. Utilizando la línea Humanos epidermoide carcinoma de células (HEp3) que utilizan este modelo para analizar la metástasis espontánea de las células del cáncer a órganos distantes, como el hígado de pollo y de pulmón. Además, utilizando el protocolo de Alu-PCR se demuestra la sensibilidad y reproducibilidad de la prueba como una herramienta para analizar y cuantificar intravasation, el arresto, la extravasación y la colonización como elementos individuales de la metástasis.

Protocolo

1. La preparación de los huevos de xenoinjerto (metástasis espontánea)

1. Recién puestos los huevos fertilizados de pollo se incuban en una incubadora de rotación de 10 días a 100 ° F y 60% de humedad. Los huevos se giran cuatro veces cada hora.
2. El día 10 en el desarrollo de los huevos se colocan a su lado en un bastidor de huevo. Una fuente de la lámpara cuello de ganso o de otro tipo de luz adecuada se utiliza para las velas de los huevos por el resplandor de la luz en la cáscara del huevo en el extremo romo del huevo donde se encuentra la sacos aéreos.
3. La vena corioalantoidea es ubicar y marcar. Esta vena se localiza en la parte superio....

Discusión

El CAM de pollo se ha utilizado durante décadas como un sistema modelo para estudiar diversos aspectos de la biología del cáncer y la progresión metastásica. Evaluación de las habilidades principio metastásico se han realizado en este modelo por una variedad de grupos, incluyendo el análisis de latencia (Ghiso Aguirre et al, 1999;. Ossowski y Reich, 1983), la remodelación de tejidos (Deryugina et al, 2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999) y metástasis (Zijlstra et al, 2008;. Zijlstra .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios (opcional)
1X Dulbecco Eagle modificado (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbecco buffer fosfato salino (D-PBS) (1X), líquido	Invitrogen	14190250	pH 7,4
Tripsina, 0,05% (1X) con EDTA 4NA, líquido	Invitrogen	25300054
Deportista nacedora	Berry Hill	1550HA	Estas incubadoras son algunos de los más fácilmente disponibles. Sin embargo, el vídeo se muestran los diferentes equipos.
Deportista incubadora	Berry Hill	1502EA
Herramienta rotativa Dremel	Dremel
Dremel ruedas de corte no. 36	Dremel	409
Portable Ayuda pipeta	Pescador	1368115E
Bastoncillos de algodón	Pescador	23-400-001)
Los huevos fertilizados	Varios		Diferentes proveedores pueden usar muchos. Los huevos deben ser de aproximadamente 35-55 gramos. Las gallinas que establece que debe estar entre 36 y 55 semanas de edad.
Hemocitómetro	Hausser Científico, VWR	15170-090
De fibra óptica de microscopio iluminador	Amscope	HL250-AY	150W
25 calibre de la aguja
SYBR Green Extract-N-Amp tejido PCR Kit	Sigma-Aldrich	XNATRG