Summary
Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.
Abstract
Bu protokol bir zebrafish laboratuvar düzenli bakım ve açıklar. Zebrafish şimdi genetik, farmakolojik ve davranışsal araştırma popülerlik kazanmaktadır. Bir omurgalı olarak, insanlarda ve birlikte zebrafish pay önemli genetik sekans benzerlik çeşitli insan hastalık durumları için bir hayvan modeli olarak kullanılmaktadır. Diğer ortak omurgalı modellere kıyasla zebrafish avantajları yüksek yumurta verimi, düşük bakım maliyeti, şeffaf embriyo ve hızlı bir gelişme vardır. Zebrafish araştırma, üretken zebrafish konut tesis kurmak ve sürdürmek için ihtiyaç ilgi teşvik nedeniyle de artmaktadır. Literatürde bir zebrafish laboratuvar bakımı için kullanılabilir olsa da, kısa bir video protokol yoksundur. Bu video, beslenme üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme, düzenli konut protokolünü gösterir. Bu süreç araştırmacılar zebrafis doğal davranış ve uygun koşulları anlamanıza yardımcı olacaktırh hayvancılık ve dolayısıyla balık yetiştiriciliği koşullarından kaynaklanan deneysel sorunları. Bu protokol bir zebrafish laboratuvar kurmak ve aynı zamanda bir hayvan modeli olarak zebrafish kullanmak isteyen öğrenciler mezun olmak için planlama araştırmacılar için büyük yardım olacaktır.
Protocol
1. Sistem Bakım
- Zebra balığı sürekli filtreleri sirkülasyon sistemi tutulur ve sağlıklı bir su ortamı için gerekli olan su kalitesini korumak için sistem suyu havalandırır edilir. Sirkülasyon sistemi ayrıca aşırı gıda ve balık dışkısı filtrelemeye yardımcı olmaktadır. Farklı şirketlerin zebrafish sistemleri sağlamak ama bizim laboratuvarda, ABD Sucul Habitatlar gelen sistemleri kullanırlar. (: Karanlık ışık) Oda sıcaklığı veya tank sıcaklığı genellikle 26-28,5 ° C ve aydınlatma koşulları 14:10 saattir korunur. Sucul Habitatlar A zebrafish sistemi (örneğin, Tezgahüstü sistemi) maliyetlerini ~ 9.000 USD. İki raflı Bu benchtop sistemi her rafta altı 10 litre, 3 litre oniki ya da yirmi 1.5-litrelik tanklar tutabilir. Balık Çoklu çizgiler (örneğin, transgenik, mutant, vahşi tip) de aynı sistem üzerinde yerleştirilebilir.
- Filtre farklı bir dizi sistem kullanılmaktadır. Tüm tankları PA Sistemimizde, su120 mikron filtre pedi, 50 mikron dış filtre, biyolojik filtre, aktif karbon emilimi filtre ve UV dezenfeksiyon filtresi aracılığıyla sses önce tankın içine geri sirküle ediliyor. De-chlorinated/aged su zebrafish sisteminde kullanılmaktadır. Su en az 48 saat boyunca yaşlanma ile de-klorlu edilebilir. İdeal koşullar altında, su sıcak tutmak için su sirkülasyon pompa ile bir rezervuar tutulur ve de-klorlama hızlandırmak olmalıdır.
- Sistem suyunun pH günlük olarak kontrol edildi ve 6.8 ve 7.5 arasında muhafaza edilmelidir. Gerekli olduğunda, sodyum bikarbonat, pH arttırmak için kullanılabilir.
- Balık tankları düzenli olarak temizlenmelidir. , Bir balık tankı temizlemek bu tanka su akışını kapatmak, geriye eğerek tank tarafından fazla suyu boşaltın ve sistemin dikkatlice depo kaldırmak için. Kir ve yosun tankı ve alt tarafta belirgin olacaktır.
- Temiz bir tanka bölme yerleştirin, ve de-klorlu su (aka Sistemi wa ile doldurmakTer). Dikkatlice bir balık ağı ile bu tankın içine balık aktarın. Kapağını kapatın ve tank ad etiketi aktarın. Dikkatlice sistemi içine temiz tanka yerleştirin ve su beslemesini açın.
- % 70 etanol ile balık ağı, sprey dezenfekte etmek için, su ile durulayın ve tekrar kullanmadan önce kurumasını bekleyin. Kirli tanktan bölmesini çıkarın ve% 70 etanol ile iki parça püskürtün. Musluk suyu ile iyice durulayın ve tank izin ve tekrar kullanmadan önce tamamen kurumasını kafasını karıştırır.
- Sirkülasyon sistemi filtreleri kontrol edilmeli ve bunların düzgün çalışmasını sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir. Bu filtreler tüm balık tankları için uygun ve temiz su temini sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir.
- 120 mikron filtre pedi genellikle yeniden yerleştirilebileceğini ya da günlük olarak değiştirilir; yenisi ile değiştirmeden önce cihazın tamamen kullanmak için su akışını doğru konumlandırmak.
- Kapak filtresi haftalık değiştirilmesi gerekir. Dış filtre değiştirmek için, karınca bükerek filtre ünitesi çıkarınBir anahtarı veya ellerle iclockwise. Plastik bir levha veya su dökülmesini önlemek veya absorbe için aşağıdaki havlu yerleştirin. Yenisi ile teneke kutu filtresini değiştirin ve filtre ünitesi geri sistemine sığması, dikkatle ellerini ve bir anahtar gerekirse sıkın.
- Karbon filtresi (her iki hafta) iki haftada bir değiştirilmelidir. Karbon filtre değiştirmek için, bir anahtar ile dikkatlice karbon filtre birimini çıkarın. Kullanılan aktif karbon atın ve yeni aktif karbon ile değiştirin. Karbon tutucu yeniden uyum ve filtre ünitesi içine geri yerleştirin. Sistem içine filtre ünitesine geri takın. Sistemi açın ve suyun filtreye akıyor kontrol edin. Eğer gerekirse, sistem içine filtre takılmadan önce boru içinde kir temizlemek için boru ile bir miktar su yıkayınız.
- Biyolojik filtre her altı ayda bir temizlenmesi gerekir. Bir biyolojik filtre genellikle sirkülasyon sistemi içinde teneke kutu ve karbon filtresi arasında yer almaktadır. Biyolojik filtre, rem değiştirmek içinsisteminden filtre ünitesi ove. Baskı serbest bırakma düğmesine basarak filtre basıncı serbest bırakın. Bir anahtar ile sökün filtresi. Genellikle iki kişi bu adım için gereklidir. Filtre ünitesinin kapağını çıkarın. Su siporax ayırmak için bir elek kap içine filtre içeriği boşaltılır. Not: siporax nitrifikasyon-denitrifikasyon hem gerçekleştirme yeteneğine sahip bir ince gözenekli biyo-filtre medya.
- Siporax çok kirli ise yeni ile değiştirin. Sistem su (de-klorlu su) ile filtre ünitesi doldurun, kapağını kapatın, sistemi ve su kaynağı anahtarına filtre ünitesi döner. Not: Bir acclimated akvaryumda, siporax birkaç nitrifikasyon bakterileri için evde olacak. Bu mikroorganizmalar, bir nitrit başak ardından, ciddi bir amonyak başak neden olabilir akvaryum içerisindeki azot döngüsünü sürdürmek ve biyolojik filtre (kirli siporax) için birincil konut kaldırılması için kritik olan ise new biyolojik filtre (yeni siporax ile) yeniden kurulması. Azot döngüsü bu ara devletlerin Hem Sudaki organizmalar için toksik olabilir ve uygun yanıt değilse zebrafish öldürebilir. Bu nedenle, bu yeni siporax bu mikroorganizmaların hızlı bir repopulation izin vermek için başka zebrabalığı muhafaza sistemi (örneğin, Sucul sistem içinde toplama tankı) içinde bir ikincil biyolojik filtre olması önemlidir.
- UV filtreleri sistemi biyolojik kirleticilerin (bakteriler gibi) kontrol etmek için kullanılır ve her geçen dokuz on ay değiştirilmesi gerekir. UV filtre dezenfeksiyon doz oranı ~ 110 mJ / lamba süresinin başlangıcında cm2 ve doz oranı da o yine de görünse de dünya değiştirmek için gerekli olan, dolayısıyla zamanla azalır olduğu not edilmelidir fonksiyonel.
2. Besleme
- Zebra balığı larvaları t için 100 mikron kuru gıda (gıda boyutu ile beslenebiliro 300 / yetişkin balık) ya da canlı yem (salamura karides) için 400 mikron. Salamura karides (Artemia sp.) Yumurta yerel evcil hayvan dükkanları mevcuttur ve aşağıda açıklanan basit adımları takip ederek laboratuvar yumurtadan olabilir.
- Daha iyi çözünürlük için bir manyetik karıştırıcı üzerinde tuz ile bir behere koyarak yaşlı suda kırmızı deniz tuzu eritin. Alternatif olarak, tuz havalandırma borusu ile havalandırılmasıyla su içinde çözülebilir. Kırmızı deniz tuz mevcut değilse, anlık okyanus tuz aynı zamanda bir kuluçka çözelti olarak kullanılabilir. Salamura karides tuzluluk geniş tolere edebilir, ancak biz 30-35 g / L kırmızı deniz tuzu su bizim salamura karides (10-15 g) çıkar. Not: durumda salamura karides yumurta ardından kapsüle salamura karides de karides kuluçkahane eklemeden önce gruplar halinde "Dekapaj" sonra kullanılabilir yerel evcil hayvan mağazalarında hazır değildir. Bu aynı zamanda evcil hayvan mağazası sık geziler önlemek olabilir.
- Sa ile salamura karides çıkım doldurunlt su ve 1.2 kaşığı / litre 'lik bir konsantrasyonda karides yumurta ilave edin. Bir hava pompası ile kuvvetlice çıkım havalandırınız ve ~ 48 saat süreyle kuluçkaya salamura karides yumurta bırakın.
Not: Bu un-zenginleştirilmiş artemia besin değeri her saat sonrası kuluçkalık kaybetmek olduğu unutulmamalıdır. Bu nedenle, 24 saat boyunca ya da yumurtadan uygun olabilir veya salamura karides maksimum besin değeri elde etmek için 48 saat boyunca zenginleştirebilir. - Kuluçka sistemi Atık su çamaşır suyu ile dezenfekte ve daha sonra bertaraf edilmek üzere karantinaya atık eklenir.
- Salamura karides toplamak için, hava borusu çıkarın ve kültür ama fazla 10 dakika 4-5 dakika yerleşmek için izin verir. Yumurtadan salamura karides Hatcher altında toplamak.
- Çıkım altındaki musluk kullanarak salamura karides toplayın. Un yumurtadan salamura karides yumurta oluşur ilk akış atın.
- Bir tuzlu su karidesi koleksiyonu Net (~ 350 mikron naylon mesh) kullanarak, tuzlu su tuzlu karides ayırın. Sistemi su kullanarak bir kabın içine net salamura karides durulayın.
- Toplanan tuzlu su karides genellikle oldukça turuncu renk veren kabın altındaki yüksek bir konsantrasyonda mevcuttur.
- Bir pipet veya damlalık / squeezy şişe kullanarak zebrafish için salamura karides besleyin. Dağıtılan gıda miktarı bireysel tanklarının nüfusun büyüklüğüne bağlıdır. Zebrafish için yaygın kabul oranı günlük gıda vücut ağırlığının% 4 almaktır. Bu bazı balık overeating nedeniyle ölebilir gibi muhtemelen, üreme veya canlılığını etkileyen, suda nitrat seviyesini artırabilir olarak Zebrafish overfed asla.
- Içine gıda enjekte üzerinesu, aç balık salamura karides yakalamak için yüzebilirsiniz.
- Kuru besleme bir Sucul Eko-System / Sucul Habitatlar basit yaylı tabanlı balık yiyecek dağıtıcı kullanılarak yapılabilir. Alternatif olarak, kuru besleme de basit bir kaşık kullanarak gerçekleştirilen ya da bir küçük kaşık bir görünüm vermek için makas ile çapraz bir plastik damlalığı keserek edilebilir.
3. Üreme
- Işık başlangıcında yetiştirme başlatmak zebrafish. Döllenmiş yumurta tank içi üreme ya da ikili yetiştirme yoluyla elde edilebilir. Depo içi yetiştirme daha emek-verimli ve laboratuvarımızda düzenli embriyo toplama için uygulanan edilirken genler veya mutasyonlar, bireysel balık taranacak olduğunda, ikili ıslahı tercih edilir.
- Depo içi üreme için, depo içi damızlık monte ve ışık başlangıcından sonra akvaryum içine yavaşça bırakın. Alternatif olarak, tank içi ıslah kurulum akvaryum içinde gece boyunca bırakılabilir.
- Lsaçak yaklaşık 15 dakika depo içi damızlık balık tanktan damızlık çıkarmadan ve yumurta toplama öncesi çiftleşmek için izin vermek.
- İkili üreme genellikle beslenmeden sonra afternoon kurulur.
- Üreme tankı kurma ve yaşlı sistemi su ile doldurun.
- Islah tankın zıt taraflarına bir dişi biri erkek aktarın. Dişiler, çünkü onların büyük Göbek erkeği ayırt edilebilir. Onlar kadınlarda daha renkli daha ince ve koyu çünkü Erkeklerde de kadınlarda ayırt edilebilir. Ayrıca, erkekler dişilerden (bkz. Şekil 1) ile karşılaştırıldığında anal yüzgeç daha sarı renge sahip. Ne zaman kadın Zebra balığı yumurtlama borusu (bkz. Şekil 4) için şüphe görünüm.
- Kısa bir süre ışığın başlangıcından sonra ertesi sabah bölücü çıkarın. Embriyoların yeterli sayıda tankın altına yerleştirilir kadar, 20 dakika süre ile veya bozulmamış meydana çiftleşme izin verir.
- Islah sonra,onların tankları balık dönün. Bir süzgeç kullanarak yumurtaları toplayın.
- Sistemi su ile iyice embriyolar yıkayın.
- Aka EM3 (NaCl, 13.7 mM;; KCl, 0.54 mM; MgSO4, 1,0 mM; CaCl 2, 1.3 mM; Na 2 HPO 4, 0.025 mM; embriyo orta süzgeç durulama tarafından Petri kabı embriyolar transfer KH 2 PO 4, 0.044 mM; NaHCO 3, 4.2 mM).
- Embriyolar mikroskop altında görülebilir. Döllenmiş yumurta sonra bir iğne ile bir pipet (bakınız Şekil 3) kullanılarak döllenmemiş yumurta ayrılır.
4. Larva yetiştiriciliği
- Döllenen yumurtalar, kuluçka (~ 28.5 ° C) 72 saat boyunca larvalar yumurtadan kadar tutulur.
- Şimdi larva özgürce bir ana balık tankına aktarmak için hazır koryon ve yüzme dışında. Larva (kompozisyon açıklanan 5 gün sonrası fertilizasyon (DPF) beslenen gerekir ve embriyo ortamda tutulurBölüm 3, 10) veya sistem su. Larva suyun ~% 50 ya da daha fazla burada günlük olarak değiştirildi yuvarlak yemekleri muhafaza edilebilir. Su değişimi ölü ya da hastalıklı larva ve diğer enkaz kaldırma içermelidir.
- Küçük ölçekli bir siper (300-400 mikron) içeren bir tank içine yavaşça larvaları aktarın. Ölü larva ve hastalıklı kaldırılır ve çok az su mL günlük olarak yavaş yavaş ilave edilmelidir.
- 14 gün sonra, larvalar tank sistem içine rafa olabilir, ve bisiklet suyun küçük bir akım (saniye başına 1-2 damla) ile birlikte verilmektedir. Larvalar büyüdükçe, su akış arttırılabilir. Sürgüler farklı boyutlarda yetişkin balıklar için kullanılması gereken larvaları (örn. bölmesinin boyutu 300-400, 500, 700-750, 1000 mikron) ve normal bir plastik bölmesinin boyutuna bağlı olarak kullanılabilir.
- Embriyoların cinsel olgun yetişkin haline gelmesi için genellikle 3 ay sürer.
Representative Results
Zebra balığı konut ve bakım geleneksel kemirgen modelleri daha kolay ve ucuzdur. Binlerce zebrafish küçük bir laboratuvarda muhafaza edilebilir. Bu protokol sonucunda, araştırmacılar zebrafish sağlıklı koşullar sağlayacak bir zebrafish tesisi yönetmek mümkün olacak. Buna ek olarak, aşağıdaki resimlere tanımlamak döllenmiş yumurta, yetişkin zebrafish, ve bunların gıda yardımcı olacaktır. Bir erkek zebrafish (Şekil 1A) ve kadın zebrafish (Şekil 1B ve 1C) bir illüstrasyon araştırmacılar erkek ve amaç damızlık dişi zebrafish ayırt edilmesine yardımcı olması gösterilmiştir Şekil 2 bir mikroskopik görünümü resmediyor;. 12X az tuzlu karides (Şekil 2A), 90X (Şekil 2B) tek bir salamura karides ve 90X (Şekil 2C) bir döllenmemiş salamura karides yumurta. Bu pervane için döllenmemiş ve döllenmiş salamura karides arasındaki farkı anlamada yardımcı olacaktırer besleme amaçlar. Döllenmiş yumurta döllenmemiş ve Şekil 3 'de gösterilmiştir. Şekil 3A ve döllenmiş döllenmemiş embriyo mikroskopik bir görünümünü tasvir etmektedir. Döllenmemiş embriyolar koryon içinde rüptüre hücre (leri) (siyah ok) döllenmiş embriyo iken sağlam ve (zebrafish embriyolar farklı aşamalarında ayrıntılı okuma için 1'e bakınız) sonraki hücreye bölünme devlet büyüyen görünür genelde opak ve / veya vardır. Döllenmiş ve döllenmemiş yumurta sırasıyla Şekil 3B gösterilir ve 3C edilir. Şekil 4 Yüksek büyütme araştırmacılar bir erkek ve bir dişi zebrafish ayırt yardımcı olmak için bir kadın zebrafish kullanıcısının yumurtlama borusu göstermektedir.
Bir zebrafish laboratuvar meydana gelebilecek birçok kritik sorunları / bireyin bütün konut sisteminde tankları, kötü su kalitesi ve sirkülasyon sisteminin boruları veya rezervuar kaçak su tıkanma vardır. Buna ek olarak,ıslah embriyolar elde etmedeki problemlerle başka endişe olabilir. Bu konuların Giderme aşağıda ele alınmıştır.
Şekil 1. Bir erkek zebrafish (A) ve dişi zebrafish (B, C) lik bir örnek.
Şekil 2.. 12X (A), 90X (B) tek bir salamura karides ve 90X (C) bir döllenmemiş salamura karides yumurta az tuzlu karides bir mikroskopik görünümü.
Şekil 3. Yalnızca iki yumurta döllenmemiş olan döllenmiş ve döllenmemiş yumurta, mikroskopik görünümü (16X), döllenmemiş yumurta (A) siyah oklar ile gösterilir. Yüksek büyütmeuygunluğu (90X) döllenmiş bir (B) ve bir döllenmemiş yumurta (C).
Şekil 4. Bir dişi zebrafish kullanıcısının yumurtlama borusu (siyah ok ile gösterilen) illüstrasyon.
| Parametre | Optimum aralık |
| Alkaliklik | 50-150 mg / L CaCO 3 |
| pH | 6,8-7,5 (6.0-8.5 tolere) |
| Sıcaklık | 26-28,5 ° C |
| Sertlik | 50-100 mg / L CaCO3 |
| Un-iyonize Amonyak | <0.02 mg / L |
| Nitrat (NO 3 -) | <50 mg / l |
| Nitrit (NO 2 -) | <0.1 mg / L |
| Çözünmüş oksijen | > 6.0 mg / L |
| Tuzluluk | 0.5-1 g / L |
| Iletkenlik | 300 -1.500 μS |
Tablo 2. Su kalite parametreleri. Su kalite parametreleri. Zebrafish akvaryum 11 çevresel parametrelerin optimum kullanım alanı.
Discussion
Kuzey Hindistan'da Ganj Nehri kaynaklanan zebrafish ve Spence ve arkadaşları tarafından incelenir, onların yetişkin ve larva evreleri 2 hem de araştırma daha popüler hale gelmektedir. 3. Zebra balığı, yüksek doğurganlık, bakım kolaylığı, embriyoların optik mesafesi, hızlı embriyonik gelişim ve düşük bakım maliyeti gibi diğer hayvan modelleri üzerinde çeşitli avantajlar sahip. Bunlar genetik manipülasyonu için müsait 6 ve yüksek verimli ilaç eleme 4,5 uygundur. Onların döllenme gelişimsel biyologlar tarafından kendi kullanımı için avantajlı olan dış olduğunu. Bu olumlu özellikleri nedeniyle, zebrafish genetiği 7, farmakolojik 8 ve davranış araştırmaları 9,10 popülerlik kazanmaktadır. Embriyo elde etmek için bir zebrafish imkan ve zebrafish hayvancılık korumak için bir takım zorluklar vardır. Bu yazıda, bu zorlukları ve o ele tecrübelerimizi ve öneriler tarifsistem bakımı için bir protokol, beslenme üreme ve larvaların yetiştirme utline.
Sistem bakımı
Sağlıklı bir durumda zebrafish korumak için, düzgün işleyen bir akvaryum sistemine temiz bir çevre ile bunları sağlamak için önemlidir. Bu önemli bir kısmı düzenli böylece tüm tanklar uygun su akışı ve temiz su almasını sistemi filtreleri değişiyor. Bu bloke sistemi boruları nedeniyle her bir tank için bisiklet su kaynağının yetersizliği önlemek için hayati önem taşımaktadır. Tıkanıklık meydana gelirse boruları normal su basıncı yüksek ve akış kullanılarak temizlenebilir. İdeal olarak, sistem suyun yaklaşık 10% iyi su kalitesini korumak için günlük değiştirilmesi gerekir. Kapak ya da karbon filtresi değiştirme sırasında alternatif olarak su değiştirilebilir. Bu bu filtreleri bağlayan boru yatırılan kir kaldırılır sağlar. Su kalitesi düzenli olarak kontrol edilmelidir. Böyle alkalinite, pH, temperat gibi parametrelerure, sertlik, amonyak, çözünmüş oksijen, tuzluluk ve iletkenlik sistemi su (ayrıntılar için bkz Tablo 2) kalitesini temsil eden önemli faktörler olarak kabul edilmelidir. En azından nitrat azından, pH ve sıcaklık konut zebrafish için iyi su kalitesi sağlamak için düzenli olarak izlenmelidir. İdeal nitrat (NO 3 -) seviyeleri <50 mg / L 11, yüksek düzeyde varsa, bu yeni sistem ile su sirkülasyon sistemi su ile değiştirerek azaltılabilir. Bazen, filtreler iyi oturuyor ve bir filtre değişiminden sonra herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol etmek için önerilir böylece sızıntı yok. Ana rezervuar su akış su pompası değiştirme veya filtreyi değiştirdikten sonra ya da bloke olursa, su akışı gevşetmeden veya borularda üretilen herhangi bir vakumu boşaltmak için birkaç saniye filtresini kaldırarak ya tarafından restore edilebilir. Filtreleri değiştirmek için gerekli zaman gibi toplam biyolojik yük o gibi çeşitli faktörlere bağlı olarak değişebilirn sistemi, diğer filtrelerin temizliği, ve kir borular yatırılır. Onlar kirli görünüyorsa veya tüm tankların doğru su almıyor yüzden, eğer filtreleri derhal değiştirilmelidir. Ayrıca, balık ağı% 70 etanol ile temizlendi, ve temizlemek için su içinde durulanmış ve tekrar kullanılmadan önce, kurumasına izin önerilir. Kurutma aksi balıklar için toksik etanol buharlaşmasını sağlar.
Zebrafish sistemlerinin çoğu de-klorlu musluk suyu kullanın, ancak bazı sistemlerde deiyonize su kullanın. Bu balık vücut tuzları korumak için gerekli olan enerji miktarını azaltarak olarak 300 ve ~ 1,500 μS arasında sistem suyun iletkenliğine tutmak için önemlidir. Tuzları optimum iletkenlik seviyenin muhafaza edilmesi için ilave edilir Bu yüzden, zebrafish deiyonize su içinde muhafaza edilemez. Karbon filtre bakır kaldırmaz çünkü musluk suyu kullanılması durumunda sistem su olası yüksek bakır konsantrasyonları riski vardır. Bu nedenle, users bakır konsantrasyonları kontrol ve mümkünse boru bakır kaçınmalısınız.
Besleme
Bazı balık overeating nedeniyle ölebilir, bu, muhtemelen onların üreme 11 veya canlılığını etkileyen, suda nitrat seviyesini artırabilir olarak Zebrafish overfed asla. Biz balık tankı 10 dakika içinde bitirebiliriz dışında herhangi bir besleme sırasında daha yiyecek sağlayan öneririz. Bu aşırı tuz konsantrasyonu ölüme neden olarak zebrafish onları beslemeden önce salamura karides tuz kaldırmak için çok önemlidir. Daha zebrafish yumurta gerekli olması halinde, balık, günde üç kez beslenebilir. Günlük damızlık balık tankları temizliği de yumurta üretim düzeylerini artırır.
Sucul Habitatlar sistemlerinde besleme zaman biz genellikle balık 10 dakika boyunca yemek yemek için izin su pompası ve hava pompası kapatın. Bu filtre içine yıkanır gıda miktarını azaltır. Ancak, kullanıcılar rem dikkatli olmalısınızdaha sonraları bu pompalar açmak için Ember.
Üreme
Zebra balığı ~ 3 ve 18 aylık arasındaki optimal üreme kondisyonuna kısmındadır. İkili üreme iki gün üst üste 11 değil gerçekleştirilmesi gerektiğini, ancak, depo içi yetiştirme bir tank gibi günlük yapılabilir bir satırda iki gün boyunca yetiştirilen balıkların aynı çifti şansını azaltır birçok balık tutabilir. Damızlık yumurta gerekli olmasa bile düzenli aralıklarla yapılmalıdır. Bu işlem, balık yetiştiriciliği döngüsü korunmasını sağlar. Bir üreme erkeklerde set-up daha kadın olduğunu önerilir. Erkek zebrafish daha bu tavsiyeyi destekler günlük olarak 12 onların kadın ortakları değiştirmek. Ayrıca, laboratuvar içinde biz başlangıçta kurulum sorunu çözmeye yardımcı üreme erkeklere göre daha fazla kadın ile, ancak, üreme ile ilgili sorunlar yaşadı. Ayrıca, yüksek protein conte ile beslement diyet ve salamura karides iki-üç kez bir gün, set-up 27 ve 28 ° C arasında, ve bloke over tüpleri ile kadınların karınlarını sıkma kullanarak üreme sıcaklığı muhafaza farklı tanklar (farklı veliler) dan karıştırma balık yumuşak masaj fazla yumurta üretimi geliştirdi. Biz balık çizgiler / kökenleri rekor kardeşler arasında-ıslahında önlemek için tutmak öneririz. Bu da embriyo üretimi artırır. Her tank balık tarafından atılmıştır embriyo sayısı bir kaydını tutmak da tavsiye edilir. Bu iyi yetiştirme balık tanklarının bir parça tutmak ve yumurta değil balık yetiştiriciliği geliştirmek için önlemler alarak yardımcı olmaktadır.
Larva Raising
Larvaların beslenmesi 5 dpf (gün sonrası fertilizasyon) dan başlamalıdır. Genç larvalar ~ 100 boyutu mikron (örneğin, ZM100) veya amip ve rotifer (büyüme uyarır) gibi canlı gıda, kuru gıda ile beslenebilir. Gıda boyut yavaş yavaş arttırılabilir200 mikron (örn. ZM200) ya da 300/400 mikron (örn. ZM300) için. Erişkin balık A nüfus litre suya 6-7 çevresinde balık olmalıdır. Bu uygulama tanklara BOİ (Biyolojik Oksijen İhtiyacı) daha iyi bakım için tavsiye edilir.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Yazarlar laboratuvar sarf yönetiminde ona yardım için Tammy Esmaili teşekkür etmek istiyorum. AA Alzheimer Hastalığı Araştırma ve Bakım, Tıbbi Bilimler, Edith Cowan University School of Excellence Merkezi'ne Doktora Bursu sahibidir. MC Rotary Kulübü, Perth Doktora finansman desteği alır. AM, GV, KT ve RNM McCusker Alzheimer Araştırma Vakfı tarafından finanse edilmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
| Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
| Microscope | Olympus | SZX12 | |
| Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
| Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
| In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
| Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
| Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
| Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
| Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
| Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
| Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
| Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. | |||
References
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F.
- Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
- Best, J. D., et al.
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
- Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
- Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
- Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
- Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).
