Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Deneysel İnsan Pnömokok Taşıma

doi: 10.3791/50115 Published: February 15, 2013

Summary

Deneysel insan pnömokok taşıma taşıma doğal bir modeli ve aşı geliştirme kullanım için potansiyel model sunmaktadır. Bu teknik çok değerli ama karmaşık ve bir insan bir patojen getirerek klinik risklidir. Biz ayrıntılı bir protokol geliştirmiştir.

Abstract

Streptococcus pneumoniae nazofarengeal taşıma iletim ana kaynağı ve invaziv hastalık önkoşulu çünkü her iki Deneysel insan pnömokok taşıyıcısı (EHPC) bilimsel önemlidir. Taşıyıcı bir model, koruma bağışıklık karşılıkları doğru tespiti, taşıma immünizasyonu etkisi ve nazofaringeal niş patojen üzerinde ana basınç etkisine izin verir. Dahası, aşı çalışmaları dahil olmak üzere epidemiyolojik çalışmalarda, kullanışlı taşıma algılama yöntemleri, mukayese edilebilir.

Amaç

Biz aşı kaynaklı bağışıklığın bir vekil olarak taşıma önlenmesi ile aşağı-select aday romanı pnömokok aşıları için kullanılan olabilir yararlı ve güvenli bir tekrarlanabilir bir yöntemdir bir EHPC platformu geliştirmeyi hedefliyoruz. Bu EHPC ve taşıyıcısının gelen aşı koruması altında yatan mekanizmaların aday aşıların ve açıklamaları test yolunda çalışacakge 1. Yeni aşılar geçerli aşı olmayan bakteriyemik pnömoniye karşı optimum koruma taninmasi anlamina gelmez acil olarak ihtiyaç vardır ve non-aşı serotipleri 2-4 serotip değiştirme kanıt olmasına rağmen pnömokok karşı Cari konjuge aşılar invaziv hastalık çocukları korumak.

Yöntem

Biz S. ile inoküle pneumoniae tuzlu 100 ul içinde askıya alınır. Güvenlik EHPC modelinin gelişmesinde önemli bir faktör olduğunu ve yoğun gönüllü tarama ve izleme yoluyla elde edilir. Klinisyen ve çalışma bağımsız bilim adamlarından oluşan bir güvenlik komitesi haftalık bazda objektif geribildirim sağlar.

Bakteriyel inokulum standardize edilmiştir ve hiçbir hayvansal ürünlerin gönüllü (bitkisel bazlı medya ve salin) inoküle gerektirir. Kolonizasyonu (10 4 -10 5) için gerekli olan doz çok daha düşük olan than bu (10 7) hayvan modellerinde 5 kullanılır. Pnömokok Taşıyıcı algılama ücretsiz nispeten mukus burun yıkama (ideal> 10 ml) yüksek hacimli tarafından geliştirilmiştir. Bu protokol sırayla protokolünün en önemli parçaları ile ilgileneceğiz. Bunlar (a) gönüllü seçim, (b) pnömokok inokulum hazırlanması, (c) aşılama, (d) takip edilmesi ve (e) taşıyıcı algılama vardır.

Sonuçlar

Mevcut protokol iki farklı bakteri serotipleri 6 kullanarak doz aralığında 100'ün üzerinde gönüllü güvenli olmuştur. S. kullanarak bir doz aralığında çalışması pneumoniae 6B ve 23F anda% 50 taşıma için en uygun aşı dozu belirlemek için yapılmaktadır. Taşıyıcı bir tahmin% 50 oranında EHPC modelinde küçük çalışma numaraları ile aşı etkinliği için yüksek duyarlılığa sahip sağlayacaktır.

Protocol

1. Seçimi ve Tarama Gönüllü

  1. Sağlıklı gönüllüler NHS Araştırma ve Etik Komitesi yönlendirmeleri doğrultusunda, reklam afişleri aracılığıyla ve üniversite web sitesinde işe alınırlar.
  2. Katılım için dahil edilme kriterleri şunlardır:
    1. 18-60 yaş arası yetişkinler.
    2. Akıcı İngilizce konuşuyor ve mobil telefon ve kısa mesaj hem kolayca iletişim kurabilmektedir.
  3. Katılım için dışlama kriterleri şunlardır:
    1. Riskli bireyler (çocuklar, bağışıklık sistemi baskılanmış yetişkinler, yaşlılar, kronik hastalık) de yakın temas.
    2. Halen içen veya önemli sigara öyküsü (> 10 paket-yıl).
    3. Astım ya da diğer solunum hastalığı.
    4. Gebelik.
    5. Penisilin veya amoksisilin alerji.
    6. Gözlemsel sürece veya girişimsel olmayan faz bir başka klinik çalışmada Mevcut tutulumu.
    7. Tamamen bilgilendirilmiş rıza açılamıyor.
  4. Bir ilk eleme ziyareti, yaklaşık bir hafta inokülasyon öncesinde, odaklanmış bir klinik öykü ve hedeflenen klinik muayene içerir.
  5. Önceden tanınmayan bir anormallik bulunursa, gönüllü çalışmaya dahil edilecek ve uygun soruşturma birincil bakım yoluyla düzenlenecektir.
  6. Ilk tarama sırasında beyaz küre sayısı inokülasyon ziyaretten önce normal sınırlar içinde olmasını sağlamak için alınan bir tam kan sayımı ziyaret edin. Bir nazal yıkama (6.1) doğal pnömokok taşıyıcıları dışlamak için yapılır.
  7. Inokülasyon öncesinde, gönüllü çalışmaya katılımı ile riskleri üzerinde eğitimli ve acil hasta broşür, dijital termometre, acil telefon numaraları ve amoksisilin 3 günlük kurs ile sağlanır.

2. Aşılama Hisse hazırlanması

  1. Inokülasyon stoklarının hazırlanması temiz bir ortamda yapılmalıdır. Kullanılan pipetler sadece kullanmak gerekirinokülum hazırlanması için d. Tüm cam ve plastik eşya steril olmalıdır. Biz inokülasyon stokları adanmış fumehood ve inkübatör kullanarak, özel bir odada hazırlanmalıdır öneririz.
  2. Pnömokok suşları bir kan agar plağına inoküle edilir. Plakalar% 5 CO2 içinde gece boyunca 37 ° C sıcaklıkta inkübe edilir. Aşağıdaki gün tüm bakterilerin kan agar plaka koparılmış ve bir boncuk stok koruma sistemi içine inoküle edilir. Bunlar boncuk stokları inokülasyon stoku hazırlanması için kullanılır. Bir aşı stoku hazırlamadan önce kontaminasyon ve koloni tekdüzelik için boncuk stokları sınayın.
  3. Inokülasyon stok hazırlamak için tüm plaka kapsayacak şekilde çizgiler, istenen pnömokok serotipi boncuk stok iki boncuk ile bir kan agar plağına inoküle edin. 2 gece boyunca% 5 CO içinde 37 ° C 'de plakaları inkübe edin. Bütün ileri inkübasyonlar bu aynı koşullar kullanacaktır. Ayrıca kısırlık sağlamak için gecede Vegitone medya kuluçkaya yatmaktadır.
  4. Ertesi sabah çubuklayarım tabak, dikkat çekici herhangi bir kan agar çıkarın ve önceden ısıtılmış Vegitone suyu 12 ml eklemek değildir. Plaka diğer yarısını kullanarak tekrarlayın. Bulanıklık değişikliği belirgin hale gelinceye kadar 2 saat veya 37 ° C'de iki 12 ml şişe bırak, hangisi önce gelirse.
  5. Önceden ısıtılmış Vegitone suyu 40 ml 12 ml ekleyin ve iyice karıştırın. Diğer 12 ml flakon için tekrarlayın. Bu sefer noktası = 0'dır. 600 nm'de optik yoğunluk (OD) okuma 100 ul çıkarın. Miles ve Misra (M & M) 7 tarafından yöntemin bir varyasyonunu kullanıyor koloni oluşturan birim (CFU) sayısı ile bakteri ölçümü için 20 ul çıkarın. Her iki flakon inkübe edin.
    1. M & M için altı bölüme bir kan agar bölün. 96 plaka altı kuyularının (U-alt) için steril PBS 180 ul ekleyin. Iyi iyi ve karıştırmak için suyu 20 ul ekleyin. Seri numune 01:10 altı kez sulandırmak ve altıncı kuyudan 20 ul atın. Ilk bölüme iyi yanı Sıra üç 10 ul damlakan agar plaka. Diğer beş kuyu için tekrarlayın. Terslenir ve inkübe önce plaka kuru olduğundan emin olun.
    2. Ertesi gün her seyreltme bölüm ve kayıtlarında görülmesi kolonilerin sayısını saymak. , 30 ve 300 arasında bir sayı ile seyreltme bölümünü kullanarak bir ortalama elde etmek için üç tarafından görünür kolonilerin sayısı bölün.
    3. Seyreltme faktörü ile kolonilerin ortalama sayısını çarpın ve sonra 10 (10 ul damla miktarı) bölün. Bu ul / CFU verir.
    4. CFU / ml almak için 1,000 bu sayı çarpın.
  6. Erken, orta-log fazı, 0,25 OD ulaşılıncaya kadar M & M yöntemi her saat OD 600 okumalar ve bakteri ölçümü gerçekleştirin.
  7. Bu OD ulaşıldığında, bir şişe sterilize% 10 gliserol ekleyin ve 1 ml alikotları hazırlamak. -80 Mağaza alikotları ° C
  8. Bir daha konsantre stok için, 15 dakika boyunca 3,345 x g de santrifüj diğer şişeye ve süpernatan çıkarın. Vegiton 22.5 ml pelet yeniden süspanse edinE orta ve% 10 gliserol ilave edin. -80 1 ml alikotları ve mağaza hazırlayın ° C.
  9. Çözülme ve miktarının önce en az 48 saat boyunca -80 ° C'de stokları bırakın.
  10. M & M yöntemi ile dondurulmuş bakteriyel stok sayısal. Tekrarlanabilirlik sağlamak için ayrı ayrı üç stok tüpleri sınayın. Aşağıda açıklandığı gibi, tuzlu su ile istenen konsantrasyona inokulum stok sulandırmak için elde edilen değerini kullanın.
  11. , Bir aşılama için, inokulum içerisinde pnömokok miktar inokülasyondan önce ve sonra hesaplanır. M & M yöntemi ile bakteri bu miktar da tüm prosedürü tamamlamak için gereken süreyi hesapları inokulum içerisinde pnömokok ortalama sayısını belirlemek için kullanılır.
    1. Bir inokulum hazırlanması istenilen konsantrasyona seyreltilmesi ve "ön-inokülasyon" saymak için M & M yöntemi ile ölçümü gerçekleştirin.
    2. Bizim Klinik Araştırma Tesisi yılında tüm aşılama prosedürünü tamamlamak için takım 30 dakika sürer. Pnsalin içinde eumococcal süspansiyonlar genellikle bu aralıkta bir azalma sayısını gösterir. Bu hesap için, 30 dakika için oda sıcaklığında seyreltilmiş inokulum bekletin ve sonra M & M yöntem ile bakterilerin bir "post-aşılama" ölçümü gerçekleştirmek.
    3. Nihai inoküle konsantrasyonunu belirlemek için önce ve sonra, ortalama al. Klinik protokolüne göre "oturma" zamanı ayarlayın ama mümkün olduğunca kısa süre tutun.
  12. Tüm yeni hisse senedi stoku saflık ve kimlik doğrulama için bir referans laboratuvara gönderilmesi gerekmektedir.

3. İnokulum Hazırlık

  1. Inokulum hazırlanması planlanan gönüllü inokülasyon randevu 30 dakika önce başlamalıdır.
  2. -80 ° C dondurucu önceden yapılmış stok tüplerinden biri çıkar, çözülme ve 3 dakika boyunca 17.000 xg'de mikrosantrifüj yılında tüp dönerler.
  3. 37 ° C inkübatör Sıcak kanlı agar plaklarına. HazırlamakBir 96 M & M yöntemi ile bakteri ölçümü için plaka ve istenilen doza göre seyreltme tüpleri hazırlayın.
  4. Santrifüje tüp suyu süpernatantı ve tuzlu su, 1 ml pelet tekrar süspansiyon. Bu adım, inokulum gelen suyu kaldırır.
  5. Santrifüj basamağı tekrarlayın.
  6. Tuzlu süpernatantı ve tuzlu su, 1 ml pelet tekrar süspansiyon.
  7. İstediğiniz inokulum konsantrasyonu dilüsyon set yapın ve M & M yöntemi ile ölçmek.
  8. Gönüllü randevuya inokulum atın ve gönüllüler inokülasyon sonrasında, laboratuarda ölçümü tekrarlayın. -80 Tarih ve inokulum dozu ve mağaza ile tüp etiketleyin ° C.
  9. Inokülasyon gelen inokülasyon tutarlılık sağlamak için, aynı pipetler ve özel laboratuvar ekipmanı her zaman kullanmak önemlidir.

4. Aşılama

  1. Gönüllüler bir yarı yatar pozisyonda rahatça oturmuş olmalıdır.
  2. Yavaşça dairesel hareketlerle kullanarak nazal mukoza üzerine inokulum sınırdışı.
  3. Bu pipet ucu kan dolaşımına giren bakteriler neden olabilir epitelinin bütünlüğünün bozulması gibi burun mukozası ile temas olmadığı önemlidir.
  4. Bu inokülum çok geriye yerleştirilmiş olması veya boğazına çalışacağını da çok önemlidir, bu nazal kavite içinde bulunması gerekir.
  5. Diğer Naris için tekrarlayın.
  6. Gönüllü burun koklama veya üfleme olmadan 10 dakika yarı yatar pozisyonda kalır mı. Bu bakteriler için zaman mukozaya boyunca dağıtmak için izin verir.

5. İzleme

  1. Gönüllüler aşılanmasını takiben günlük olarak takip edilmektedir. Bu 2 pm önce araştırmacılara gönüllü tarafından gönderilen günlük bir metin mesajı içerir.
  2. Eğer metin is gönüllü onun / onu refahı sağlamak için sizinle temasa geçecektir öğleden sonra saat 2'de alınmadı. O / o yanıt vermezse, akrabası tahsis yanındaki gönüllünün refahını sağlamak için sizinle temasa geçecektir.
  3. Gönüllüler her randevu herhangi bir üst solunum yolu semptomları rapor istenir. Klinik personeli onun / onu belirtileri tanımlamak için gönüllü soracaktır ve herhangi bir şikayetleri takip edecektir.
  4. Gönüllüler için antibiyotikler üç koşullar altına alınması için sadece vardır; onlar hasta ve bunların çalışma sonunda pnömokok taşıma, ya da hasta eğer varsa, araştırma ekibi tarafından bunu yapması için talimat olması durumunda, ve araştırma ekibi iletişim kuramadı. Gönüllü çalışma sırasında her zaman onlarla bu acil paketi tutmak için teşvik edilir ve sonraki 7 gün için günlük bazda araştırma ekibi ile irtibata geçmeleri rica edilir.
  5. Ekibimiz ho üzerinden mesai saatlerinde hemşire kişiyle 7/24 mevcuttur ve iki doktor mevcuttururs. Tüm sorgular telefon ve / veya derhal gözden tarafından ele alınmaktadır. Gerekirse Karşılıklar, bir Enfeksiyon Hastalıkları servisinde anında, doğrudan kabul için kullanılabilir.

6. Burun yıkama (KB) Prosedür

  1. Burun yıkamaları (NW), bir başlangıç ​​tarama ziyaret yanı sıra, 48 saat, 7 ve 14 gün aşılama sonrası gerçekleştirilir. Ikinci KB yöntem Naclerio et al alınmıştır. 8 Gönüllüler doğal olarak S. tarafından kolonize pneumoniae aşılama dışında ve takip edilmektedir.
  2. Gönüllü rahatça oturduğundan ve kafası dikey geri 30 ° eğilir.
  3. Derin bir nefes alın ve ağız çatı karşı geriye kendi dil yukarı itip ederken nefeslerini tutmak için gönüllü değildir. Bu pozisyonda iken, gönüllü onlar hazır olduğunu işaret etmesi istenir.
  4. 20 ml tuzlu su ile doldurulmuş bir şırınga ön burun boşluğuna yerleştirilir ve tuzlu 5 ml dışarı atılır. Volunteer sonra hemen öne doğru eğilir ve bir folyo kaseye burundan hızla exhaling tarafından sıvı dışarı atar.
  5. Bu işlem her Naris iki kez yıkanmış ve tam 20 ml kullanılır olmuştur böylece 3 kez daha tekrarlayın.
  6. Bir santrifüj tüpü içinde bir arada Havuz tüm örnekler ve işleme için oda sıcaklığında laboratuvar için gönderir.

7. Burun yıkama İşleme

  1. 3,345 x g'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin.
  2. -80 Etiketli Eppendorf tüplerine 1 ml alikotları gibi süpernatant ve mağaza kaldırın ° C
  3. Pelet orta 9 STGG 100 ul ekleyin ve iyice karıştırın. Bu noktada tüp içinde toplam hacmi belirlendi olduğundan emin olun. Bu seyreltme, bir taşıma pozitif NW CFU hesaplanmasında kullanılır.
  4. Plaka gentamisin ve çizgi tüm plaka içeren bir kan agar plaka üzerine yeniden süspanse pelet içeren STGG bir 20 ul damla.
    1. NW aşılama sonrası ise, Yeniden süspanse pelet ve M & M yöntemi ile bakteri ölçümü için kullanılmasını içeren STGG 10 ul çıkarın.
  5. NW tüp STGG başka 800 ul ekleyin ve iyice karıştırın.
  6. Tüm plağı çizgiler bir kan agar ve çikolata agar plaka üzerine 25 ul üzerine Tabak 25 ul,.
  7. -80 2 kriyotüplerin ve mağaza içine orta STGG asılı kalan miktar bakteri Böl ° C.
  8. % 5 CO2 içinde 37 ° C de bir gece de plakaları inkübe edin.
  9. Plakaları pnömokok ve diğer potansiyel solunum patojenleri için ertesi gün inceleyin.
  10. Pnömokok koloni morfolojisi ile plakalar üzerinde tanımlanır. Ressam morfolojiye sahip Alfa hemolitik koloniler bir optokine diski ile kan agara alt-kültür ve gece inkübe.
  11. Optokine duyarlı Presumptive pnömokok koloniler Gram Gram pozitif diplokoklar onaylamak için lekeli ve Statens Serum Institut Pneu kullanarak serotiplendirilmiştir edilirmotest-Lateks kiti.

Representative Results

Biz deneyim, 35 pnömokok yapmışlardır olan 159 kişi inokülasyon var. Bu serotip 6B ile birlikte taşıma elde en düşük doz en yüksek doz Naris başına 313,000 CFU/100 ul idi Naris başına 11,100 CFU/100 il idi. Bu serotip 23F kullanılarak taşıma elde en düşük doz en yüksek doz Naris başına 84,500 CFU/100 ul idi Naris başına 9.000 CFU/100 il idi.

Taşıyıcı değerlendirme Bizim yöntemi yeni bir çalışma 10 gönüllülerin% 91 nazofarengeal sürüntü daha rahat olmak için nazal yıkama bulduğunu gösterdi çünkü seçilen bir nazal yıkama, olduğunu; burun yıkama, ayrıca mikrobiyolojik kültür kullanarak patojenler tespit etmek daha olasıdır. KB ile inoküle kan agar plaklarına kurtarıldı mikrobiyal flora okumak için değişken ve zor olabilir. Gentamisin pnömokok için seçmek için ilk kan agar kullanılır. Çukulata agar plaka ve ikinci kan agar diğer potansiyel solunum yolu tespit etmek için kullanılırpnömokok kolonizasyonu yardımcı ya da engel olabilir ogens. Okunması kolay KB ile aşılanmış bir kan agar plaka bir örneği Şekil 1a'da gösterilen flora birçok türü ihtiva eden bir zor plaka Şekil 1b 'de gösterilmiştir.

Her randevu gönüllüler anda herhangi bir üst solunum yolu semptomları tanımlamak için istendi, eğer varsa, taşıyıcı ve taşıyıcı olmayan arasındaki karşılaştırmalar çizildi. Son zamanlarda pnömokok ile inoküle 145 kişiden, 28 semptomları (Tablo 1) şikayet etti. Bunların sekizi taşıyıcıları, yirmi değil idi. En sık görülen semptomlar non-spesifik nazal semptomlar (Tablo 1). Ateş ve / veya halsizlik gibi sistemik belirtiler vardır bildirildi hangi olgunun, yapılan araştırmaların hiçbiri pnömokok hastalığı ve belirtileri kanıt tonsillit bir olgu dışında eşzamanlı viral enfeksiyon ile uyumlu olduğunu göstermiştir. Iki pnömokok positivE gönüllüler antibiyotik ile tedavi edildi. Bir boğaz ağrısı ve kulak ağrısı şikayet ve çalışma doktor ile tanıştıktan sonra, bir önlem olarak antibiyotik almaları tavsiye edildi. Diğer gönüllü tonsillit ile klinik tanısı kondu. Tüm gönüllüler semptomları hızla düzelmişti.

Şekil 1
Şekil 1. Kan agar KB ile aşılanmış. KB ile inoküle Kan agar plaklarına okunması zor olabilir. 1a açıkça görülebilir pnömokok ile okunması kolay bir tabak bir örnektir. 1b daha yapım co-kolonize flora dolu bir tabak pnömokoklar mevcut olup olmadığını tespit etmek zordur.

Belirtileri Taşıma (n = 32) Hayır Taşıma (n = 112)
Tümsemptomlar 24% % 18
Sistemik Ateş % 3 4%
Kırıklık * % 9 4%
Yerel Kulaklar % 9 % 3
Burun 0 % 10
Boğaz % 12 % 3

Tablo 1. Gönüllü Karakterizasyonu S. Aşağıdaki belirtiler bildirilmiştir pneumoniae 6B inokülasyon. tüm şikayetler tam incelemelerden sonra, dış güvenlik komitesi tarafından gözden edildi ve hiçbir belirti pnömokok hastalığı atfedilmiştir. En sık görülen semptomlar, boğaz ağrısı vardı burun ve grip benzeri hastalık dolması.

Discussion

EHPC platformu mukozal aşı model olarak ve yeni protein aşıları test etmek için bir koruma vekil olarak kullanımı da dahil olmak üzere potansiyel kullanım bir numarası vardır. Yöntem, bir sürekli aşılama tekniği ve bir yüksek kaliteli B bağlıdır.

Tekrarlanabilirlik inokulum ile ilgili bir sorun olabilir. Donmuş bakteri alikotları değişken doğası nedeniyle, istenen doz çoğaltmak için zor olabilir. İstenen doz bir yarıya indirmek ya da iki katına çıkarılması aralık içinde yer alır. Bu bakteri miktarının doğru CFU bakterilerin miktarının belirlenmesi amacıyla, aşılama hemen öncesinde ve aşağıdaki işlemlerin yapılması çok önemlidir. Gönüllü randevuları oluşursa bu nedenle sadece bir inokulum hazırlanan ve önceki aşılama ve sonrasında yapılan miktar kaplama dışında en fazla 30 dk olur edilmesi ihtiyacı olduğunu aynı anda çok yararlı olabilir.

NW yöntem coope gerektirirgönüllü ve rasyon çocuklarda ideal bir yöntem olmaz. Verim az 5 ml ise, işlem bir fazladan 20 ml kadar kullanarak tekrar edilebilir. Giyim protez KB verimini düşürebilir. Gönüllünün / bloke sıkışık burun vardır ve tuzlu takıldıktan sonra anteriorda üzerinden çalışıyorsa, burnunu, Biraz daha geriye şırınga takın ve daha geri gerekirse başını hafifçe.

KB uygulama ile daha iyi olur bir tekniktir. Amacı, en azından 10 ml 'lik bir dönüş amaçlı olup bu nedenle bazı hacmi genellikle kaybolur. Gönüllü KB sırasında salin tadabilirsiniz Eğer posterior nazofarenks ve orofarenks arasındaki bağlantı yeterince gönüllü dilini tarafından kapatıldı olmamıştır. Gönüllü yutar salin çoğu ise, ağız çatısı karşı dil itme vurgulayarak, prosedüre tekrar açıklayabilir. Sonra ses döndü artırmak için işlemi tekrarlayın.

NW substant içeriyorsamukus ial miktarı, bu santrifüj önce kaldırmak en iyisidir. Vorteks mukus bağlı ve mümkün olduğu kadar az tuzlu olarak çıkarılırken, daha sonra mümkün olduğu kadar büyük parçaları ortadan kaldırmak herhangi bir şey olabilir gevşetmek şekilde örnek.

ABD'de bir önceki EHPC çalışmada güvenle tamamlanmış ve hiçbir advers olaylar 11 vardı. EHPC platformunun sürekli güvenliğini sağlamak için, araştırma ekibi, 24 saat erişim etrafında dayanır acil durum protokolü kurdunuz. Gönüllüler onları bir gün araştırma ekibi, 24 saat erişim sağlayan iletişim bilgilerini verilmiştir. Gerekli her türlü tıbbi bakım Royal Liverpool Üniversite Hastanesi sağlanmaktadır. Koruma bir başka önlem olarak, klinisyenler ve araştırma grubu dışından bilim adamlarından oluşan bir güvenlik komitesi haftalık güvenlik raporu alır. Rapor, her gönüllü alınan ve herhangi bir semptom ya da hastalık rapor edilip bakteriyel doz içerir. Bu rapor th güvenliği sağlarE çalışmada dışarıdan önyargısız eleştirilmesi gereken. Güvenlik komitesi ayrıca acil olası olay bir gün 24 saat mevcuttur.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Bu çalışma Bill ve Melinda Gates Vakfı (SBG için Grand Challenge Keşif Ödülü), Sağlık Araştırması (NIHR), Mikrobiyal Hastalıklar Biyomedikal Araştırma Merkezi ve NIHR Kapsamlı Yerel Araştırma Ağı Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından finanse edildi. Biz altyapı desteği için NWDA kabul. Biz pnömokok izolatlarının Prof J. N Weiser, Pennsylvania Üniversitesi ve Prof P Hermans, Nijmegen Üniversitesi ederim. Fotoğraf çekmek için onların katılımı için tüm gönüllülere ve Mathieu Bangert için verdikleri destek ve tavsiye için EHPC Güvenliği Komitesi sayesinde.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glycerol Fisher G/0650/08
0.9% Sodium Chloride B. Braun 3627667
Skim milk powder Fluka 70166
Tryptone soya broth Becton Dickinson 211768
Glucose BDH 284504S
Columbia Agar with chocolated horse blood Oxoid PB0124
Pneumotest-latex kit Statens Serum Institut 51823

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ferreira, D. M., Jambo, K. C., Gordon, S. B. Experimental human pneumococcal carriage models for vaccine research. Trends in Microbiology. 19, 464-470 (2011).
  2. Mera, R., Miller, L. A., Fritsche, T. R., Jones, R. N. Serotype replacement and multiple resistance in Streptococcus pneumoniae after the introduction of the conjugate pneumococcal vaccine. Microbial Drug Resistance. 14, 101-107 (2008).
  3. Tocheva, A. S., et al. Declining serotype coverage of new pneumococcal conjugate vaccines relating to the carriage of Streptococcus pneumoniae in young children. Vaccine. 29, 4400-4404 (2011).
  4. Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination. Lancet. 378, (10), 1962-1973 (2011).
  5. Wu, H. Y., et al. Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice. Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).
  6. Wright, A. K. A., Ferreira, D. M., Gritzfeld, J. F., Wright, A. D., Armitage, K., Jambo, K. C., Bate, E., Batrawy, S. E. l, Collins, A., Gordon, S. B. Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage. PloS Pathogens. 8, (4), e1002622 (2012).
  7. Miles, A. A., Misra, S. S., Irwin, J. O. The estimation of the bactericidal power of the blood. The Journal of Hygiene. 38, 732-749 (1938).
  8. Naclerio, R. M., et al. Mediator release after nasal airway challenge with allergen. Am. Rev. Respir. Dis. 128, 597-602 (1983).
  9. O'Brien, K. L., Nohynek, H. Report from a WHO working group: standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae. Pediatr. Infect. Dis J. 22, 133-140 (2003).
  10. Gritzfeld, J. F., Roberts, P., Roche, L., Batrawy, S. E. l, Gordon, S. B. Comparison between nasopharyngeal swab and nasal wash, using culture and PCR, in the detection of potential respiratory pathogens. BMC Research Notes. 4, 122 (2011).
  11. McCool, T. L., Cate, T. R., Moy, G., Weiser, J. N. The immune response to pneumococcal proteins during experimental human carriage. J. Exp. Med. 195, 359-365 (2002).
Deneysel İnsan Pnömokok Taşıma
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gritzfeld, J. F., Wright, A. D., Collins, A. M., Pennington, S. H., Wright, A. K. A., Kadioglu, A., Ferreira, D. M., Gordon, S. B. Experimental Human Pneumococcal Carriage. J. Vis. Exp. (72), e50115, doi:10.3791/50115 (2013).More

Gritzfeld, J. F., Wright, A. D., Collins, A. M., Pennington, S. H., Wright, A. K. A., Kadioglu, A., Ferreira, D. M., Gordon, S. B. Experimental Human Pneumococcal Carriage. J. Vis. Exp. (72), e50115, doi:10.3791/50115 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter