Summary
Vi beskriver en metode for å måle aktivering av funksjoner Fc-mediert effektor av antistoffer som er rettet mot influensa virus hemagglutinin. Denne analysen kan også tilpasses for å vurdere muligheten av monoklonale antistoffer eller polyklonale sera målretting andre viral overflate glykoproteiner å overtale Fc-mediert immunitet.
Abstract
Antistoffer spille en avgjørende rolle i koblingen immunreaksjoner medfødte og adaptive mot viral patogener gjennom antigen bindende domener og Fc-regioner. Her beskriver vi hvordan måle aktiveringen av Fc funksjoner effektor av monoklonale antistoffer målretting influensa virus hemagglutinin med bruk av en genmodifisert Jurkat celle linje uttrykke aktiverings type 1 Fc-FcγR. med denne metoden, den bidrag av bestemte Fc-FcγR vekselsvirkningene av immunglobuliner kan bestemmes i vitro analysen.
Introduction
Immunitet fra sesongens influensavaksine har tradisjonelt blitt vurdert av hemagglutination hemming (HI) analysen1, som måler tilstedeværelse av antistoffer som mål reseptor binding området av hemagglutinin. Disse HI-aktiv antistoffer kan tildele sterilisering immunitet, men er generelt smale i deres bredden i beskyttelse, gi immunitet til bare en velge noen stammer av influensavirus. Isolering og karakterisering av grovt reaktive monoklonale antistoffer som gjenkjenner hemagglutinin (HA) tyder utviklingen av en universal influensavaksine er innen rekkevidde2,3,4, 5 , 6 , 7 , 8. en av de viktigste målene for en universell influensavaksine er å indusere en sterk antistoffet svaret mot de konserverte områdene av influensa virus9,10,11,12 , 13 , 14 , 15 , 16. bredt reaktive antistoffer som gjenkjenner disse bevarte epitopes, består av både nøytraliserende og ikke-nøytralisere antistoffer17,18, har vist seg å kreve Fc-FcγR vekselsvirkningene for optimal beskyttelse i vivo og høydepunkt bidrag av Fc-mediert immunitet til generelle immunforsvaret til influensa virus19,20.
Korrelerer beskyttelse er avgjørende i å vurdere immunitet mot infeksjon. Disse verdiene kan forskere og klinikere å beregne effekten av vaksiner, betydningen av data, og i løpet av behandling. Den eneste etablerte relateres til beskyttelse mot influensa virus smitte er hemagglutination hemming analysen. En titer 1:40 er forbundet med en 50% reduksjon i risikoen for sykdom1,21 - og gjenspeiler tilstedeværelse av antistoffer som hemmer agglutinerende ved målretting reseptoren bindende område ligger på globular hodet av HA. Men bør det også bemerkes at T-celle svar kan være en bedre relateres til beskyttelse mot influensa virusinfeksjon hos eldre. Interessant antyder en fersk rapport at neuraminidase hemming aktivitet kanskje være en bedre prediktor for immunitet til influensa22. Heldigvis, typisk i vitro søk som nøytralisering eller neuraminidase hemming analyser kan måle HA stengel - eller neuraminidase-spesifikke antistoffer. De fleste av disse konvensjonelle i vitro analyser, men bare tar hensyn til funksjonen i antigen bindende regionen antistoffer og måler ikke rollen regionen Fc. I tillegg bidrag av ikke-nøytralisere Antistoffene det beskytte via Fc reseptor engasjement i vivo er ikke oppdaget17,18. For å måle vern av antistoffer som induserer Fc-mediert immunitet som antistoff avhengige celle mediert cytotoksisitet (ADCC), er en robust i vitro analysen nødvendig.
Metoden beskrevet nedenfor vurderer muligheten for murine monoklonale antistoffer å overtale Fc-mediert funksjoner ved hjelp av en genetisk modifisert Jurkat celle linje uttrykke aktiverings murint type 1 FcR, FcγRIV. Antistoff engasjement i FcγR transduces intracellulær signaliserer at utløsere kjernefysiske faktor aktivert T-celler-mediert luciferase aktivitet. Analysen har flere fordeler sammenlignet med tradisjonelle teknikker som krever bruk av flowcytometri å merker aktivisering Fc-mediert effektor funksjoner19,23,24, isolasjon og kultur av primære Effektor celler ,25,26. Først kan protokollen beskrevet her lett tilpasses å inkorporere ulike viral mål, FcγRs og antistoffer fra ulike arter (menneskelige og murine). Andre, bruk av en modifisert Jurkat celle linje uttrykke en FcγR med en luciferase reporter gene under en kjernefysiske faktor på aktivert T-celle (NFAT) gir en stort format analysen som kan analyseres lett bruke en plate leser måle luminescence. Her, erstattes tradisjonelle aktivering av primære Effektor celler med induksjon av NFAT-luciferase på antistoff engasjement i en FcγR på overflaten av Jurkat cellen. Denne 96-brønns plate format analysen kan for måling av opptil fire forskjellige prøver triplicates med syv fortynninger-en rekke prøver som kan være tungvint benytter tradisjonell teknikker. Det er flere punkter du bør vurdere med denne analysen som kan påvirke utformingen av eksperimenter og tolkning av data. Viral målet må uttrykkes på cellens overflate for at antistoff anerkjennelse. For å løse dette, kan målet antigen (f.eks en intern viral protein) være direkte belagt på overflaten av en plate. Men har dette ennå ikke blitt grundig testet. I tillegg den endrede Jurkat celle linjen uttrykker bare én type aktivere FcγR og uttrykker ikke noen hemmende FcγRs, mens primære cellelinjer uttrykke alle reseptorer i fysiologiske sammenheng.
Vi har brukt denne analysen til å demonstrere at epitope spesifisitet i en polyklonale sammenheng spiller en avgjørende rolle i å regulere Fc-mediert effektor funksjoner og at optimal aktivering av antistoff-avhengig celle-mediert respons krever to punkter av Kontakt27,28. Her beskriver vi en metode som vurderer evne til strå-spesifikke monoklonale antistoffer å engasjere og aktivere murint aktivere FcγRIV. Men det er unntak29,30, et stort antall bredt reaktive antistoffer målrette antigenically bevart stilken regionen i hemagglutinin og dermed spille en viktig rolle i utviklingen av en universal influensa vaksine.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Eksperimenter utført i dette manuskriptet ble gjort følgende Icahn School of Medicines institusjonelle koden for etikk og forskrifter.
1. uttrykk for influensa Virus Hemagglutinin via Transfection eller infeksjon
Hva:
- Plate menneskelige embryonale (HEK 293T) nyreceller på en tetthet av 2 x 104 celler/godt i en hvit vev kultur behandlet 96-brønns plate og la det sitte 4 h i en 37 °C inkubator (med 5% CO2).
- Transfect celler med 100 ng av DNA koder for viral hemagglutinin og 0,2 μL transfection reagens per brønn i et totalt volum på 50 μL.
Merk: Begge plasmider og transfectant reagens er utvannet i 1 x Opti-Minimum Essential Media (MEM) redusert Serum Medium. - Etter rugende plater i en 37 °C inkubator med 5% CO2 18 h, fjerne hva media.
2. infeksjoner
- Platen A549 eller Madin Darby hjørnetann nyreceller på en tetthet av 2 x 104 celler/godt i en hvit vev kultur behandlet 96-brønns plate og vokse i minst 18 h i en 37 °C inkubator med 5% CO2.
- Fortynne virus i 1 x MEM og infisere cellene på et mangfold av infeksjon av 3, 1 eller 0,33 1t i en 37 °C inkubator med 5% CO2. Totalvolum bør tilsvare 100 μL.
Merk: 10 x MEM er fortynnet med vann for å lage en 1 x MEM arbeider lager for virus fortynning nevnt ovenfor. - Etter infeksjon, fjerne inoculum og tilsett 100 μL 1 x MEM inn platen i fravær av trypsin.
- Vokse infiserte celler for 18-24 h i en 37 °C inkubator med 5% CO2.
3. vurdere FcRg/NFAT-mediert aktivering av Luciferase aktivitet av monoklonale antistoffer eller Sera
- Først erstatte vekst medier av transfekterte eller infiserte celler med 25 µL av analysen medier (1 x RPMI 1640 supplert med 4% (vol/vol) lav IgG fosterets bovin sera).
- I en separat 96-brønns plate, kan du utføre fire ganger fortynninger av antistoffer rundt starter på 30 μg/mL bruke analysen mediet. Utføre fortynninger i triplicates og et eksempel plate oppsett er illustrert i figur 1A. Kontroller at en kontroll som utelukker antistoff (ingen antistoff kontroll) samt en bakgrunn kontroll (analysebuffer alene).
Merk: For både 'ingen antistoffer' og bakgrunn kontroller, legge til 25 µL av analysebuffer i stedet for antistoff. - Overføre 25 μL serielt utvannet antistoffer trinn 3,2 tilsvarende brønner på plate av transfekterte celler eller infiserte celler.
- Inkuber plate i en 37 °C inkubator (med 5% CO2) i 15 min.
- Legg til 25 μL aktuelle endrede effektor Jurkat cellen uttrykke murine FcgRIV eller menneskelig FcgRIIIa (75 000 celler/godt). Totalt volum for hver skal godt 75 µL og start siste konsentrasjonen av antistoffer er på 10 µg/mL (figur 1B).
Merk: For bakgrunnen kontrollen, legge 25 µL av analysebuffer i stedet for Effektor celler. For å undersøke antistoff-avhengig celle-mediert fagocytose, kan en modifisert Jurkat celle uttrykke den menneskelige FcgRIIa brukes. - Inkuber plate i en 37 ° C inkubator med 5% CO2 6 h.
- Tine og varme luciferase substrat buffer i 37 °C vann i ca 1 time før bruk.
Merk: For å gjøre luciferase Substratbufferen, Rekonstituer lyofilisert luciferase analysen underlaget i analysebuffer gitt. Rekonstituert Substratbufferen kan lagres på 30 °C til-10 °C for opp til seks uker. - Legge til 75 μL/vel luciferase substrat bufferen i alle brønnene bortsett fra på bakgrunn-skyveknappen.
- Les på en luminometer.
- Beregne kaste induksjon med følgende ligning: Brett induksjon = (utførte verdi-bakgrunn verdi) / (ingen mAb verdi-bakgrunn verdi).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi viste at en stengel-spesifikke mAb, 6F12, men ikke hodet-spesifikke en hode-spesifikke mAb, PY102, kunne aktivere primære naturlige drepe celler av upregulating CD107a og interferon γ19. For å modellere evne til en stilk-spesifikke antistoffer å aktivere primære menneskelige NK celler, viser vi at en stengel-spesifikke mAb, 6F12, robust kan aktivere modifisert Jurkat cellen uttrykke murine FcγRIV av ~ 14-fold. På den annen side, gjør leder-spesifikke mAb, PY102 og kontrollen IgG ikke (figur 2)28.
For å undersøke om mangfoldet av infeksjon (MOI) kan påvirke induksjon av Jurkat celler uttrykke murine FcγRIV, infisert vi MDCK celler med X31 (en reassortant influensa A virus uttrykke hemagglutinin og neuraminidase av A/Hong Kong/1/68 (H3N2) virus med de interne segmentene av A/Puerto Rico/8/34 (H1N1)) med en MOI 3, 1 eller 0,33. Tjuefire timer senere, ble Jurkat celler uttrykke murine FcγRIV og mAb 9H 10 lagt til de infiserte MDCK cellene. I Figur 3viser vi at celler som er infisert med en MOI 3 kan indusere luminescence rundt 3-fold høyere enn MDCK celler infisert med en MOI av 0,33.
Figur 1 : En skjematisk prøven plate layout og sammensetningen av eksperimentelle gruppene. (A) starter konsentrasjonen for hver antistoff prøve på 10 µg/mL og serielt fortynnet over platen (kolonne 1 kolonne 12) 4-fold. Hvert utvalg er gjort i triplicates. Rad G er reservert for ingen mAb kontrollen og rad H er bakgrunnen. (B) siste volumet for hver forsøksgruppen før addisjon luciferase substrat bufferen er 75 µL. Av notatet har prøven og 'ingen mAb grupper' 25 µL Effektor celler lagt, mens bakgrunn kontroll grupper har 75 µL av analysen media. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Induksjon av modifisert Jurkat celler uttrykke FcgR av en stengel monoklonalt antistoff. A549 celler var infisert med A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) med en MOI 3. Stolpe infeksjon, murine FcγRIV-uttrykke Jurkat celler i kombinasjon med PY102, 6F12 eller IgG kontroll ble lagt på 24 timer. Induksjon av Jurkat celler ble vurdert av luminescence signal generert av firefly luciferase under NFAT svar elementet. Feilfelt = standard avvik. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Mangfoldet av infeksjon påvirker induksjon av en stengel-spesifikke antistoffer. MDCK celler var infisert med X31 (H3N2) med en MOI 3, 1 eller 0,33. På 24 h stolpe infeksjon, FcgR-uttrykke Jurkat celler i kombinasjon med 9H 10 (Start fortynning av 10 µg/mL) lagt. Induksjon av Jurkat celler ble vurdert av luminescence signal generert av firefly luciferase under NFAT svar elementet. Feilfelt = standard avvik. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden beskrevet her tillater brukeren å måle hvor en HA-spesifikke monoklonale antistoffer til å engasjere seg i murine FcγRIV. Målet antigen, influensa virus hemagglutinin, er uttrykt på overflaten av cellene etter infeksjon av virus eller hva av plasmider DNA. Analysen er flere mottagelig å bruke ulike overflaten-uttrykt virale proteiner sammen med andre FcγRs (mennesker eller Trouble). I tillegg, vi har brukt sera prøver for å vurdere muligheten av antistoffer i en polyklonale sammenheng å overtale Fc funksjoner effektor (data ikke vist), som kan gi mer relevant informasjon når studere adaptive immunrespons forårsaket av infeksjon eller vaksinasjon. Vi spekulere i tillegg at analysen kan endres for å måle induksjon av antistoffer som gjenkjenner interne virale proteiner av direkte belegg platene med løselig protein. Men er denne metoden ikke grundig testet.
Induksjon av antistoff avhengige effektor funksjoner kan påvirkes av flere faktorer, inkludert men ikke begrenset til effektor målet forhold (antall Effektor celler lagt per brønn), konsentrasjonen av antistoff brukes, lengden på inkubasjon mellom mål og Effektor celler, og konsentrasjonen av lav IgG serum brukt i analysen bufferen.
Historisk innebærer standard analysen måle antistoff-avhengig mobilnettet cytotoksisitet aktiviteten av antistoffer eller polyklonale sera primære naturlig killer () Celler NK høstet fra givere. Engasjement av FcγR og aktivering av den intracellulære veien bestemmes vanligvis av uttrykk for aktivisering markører CD107a og/eller IFN-γ19,23,24,31. Selv om klassisk analysen bruker mer relevante Effektor celler som de ikke har vært genetisk konstruert, kan donor variasjonen skyldes allel forskjeller i FcγR påvirke NK celle aktivering og føre parti til parti variasjon. Alternative analyser brukt som surrogater for ADCC aktivitet omfatter en FcγR dimer-baserte ELISA eller en krom utgivelse drepe analysen25. Selv om bruken av en FcγR dimer-baserte ELISA høy gjennomstrømning, kan analysen ikke være fysiologisk relevante som denne analysen ikke bruker Effektor celler32. Mens krom utgivelsen analysen tiltak direkte drap, det er ikke høy gjennomstrømning og krever primære NK celler som igjen er giver avhengige33. En nyere metode beskriver bruken av murine T-celle hybridomas stabilt uttrykke chimeric FcγR-CD3ζ kjeden molekyler og tiltak aktivisering gjennom utskillelsen av IL-2. Analysen beskrevet ligner beskrevet metoden her, som gjør bruk av en modifisert T-celle som et surrogat for en effektor celle uttrykke en entall aktivere FcγR34. En celle linje (NK92.05-CD16) uttrykker FcγRIIIa kan alternativt brukes som effektor celle- og oppregulering av omfatter degranulering antigen CD107a brukes som en aktivisering markør. Bruk av virions og viral peptider på ELISA plater på sistnevnte protokollen bør imidlertid bemerkes som proteiner belagt på hydrofobe overflater ikke kan alltid er recapitulate fysiologiske strukturen i antigener35.
Metoden beskrevet her er en 96-brønns format analysen, gjør bruk av fysiologisk relevante og innfødt uttrykte viral mål og kan endres for murine eller menneskelig antistoffer. Genmodifisert Jurkat cellene kan opprettholdes i kultur og cryopreserved36. Om tiden Effektor celler uttrykke bare én aktivering FcγR, bør de mange fordelene med å bruke denne protokollen beskrevet i denne studien tas i betraktning når du måler antistoff-avhengig celle-mediert effektor funksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ikke interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette prosjektet har blitt finansiert delvis med føderale midler fra National Institute of Allergy og smittsomme sykdommer, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under CEIRS kontrakt P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A549 cells | ATCC | CCL-185 | Adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells |
| HEK 293T cells | ATCC | CRL-3216 | Human embryonic kidney cells |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668019 | Transfection reagent |
| 1X Opti-MEM Reduced Serum Medium | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| White tissue culture treated 96-well plate | Corning, Inc. | 3917 | Assay plates |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| Jurkat cell expressing murine FcgRIV | Promega | M1201 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIIa | Promega | G7010 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIa | Promega | G9901 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Luminometer | BioTek | Synergy H1 Multi-Mode reader | Luminescence plate reader |
| Bio-Glo Luciferase Assay System | Promega | G7940 | Contains luciferase assay buffer and luciferase assay substrate |
| Madin Darby canine kidney cells | ATCC | CCL-34 | Canine kidney cells |
References
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al. Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells. PloS One. 3 (12), e3942 (2008).
- Ekiert, D. C., et al. Antibody recognition of a highly conserved influenza virus epitope. Science. 324 (5924), 246-251 (2009).
- Ekiert, D. C., et al. A Highly Conserved Neutralizing Epitope on Group 2 Influenza A Viruses. Science. 333 (6044), 843-850 (2011).
- Tan, G. S., et al. A pan-H1 anti-hemagglutinin monoclonal antibody with potent broad-spectrum efficacy in vivo. J Virol. 86 (11), 6179-6188 (2012).
- Tan, G. S., et al. Characterization of a Broadly Neutralizing Monoclonal Antibody That Targets the Fusion Domain of Group 2 Influenza A Virus Hemagglutinin. J Virol. 88 (23), 13580-13592 (2014).
- Friesen, R. H. E., et al. A common solution to group 2 influenza virus neutralization. PNAS. 111 (1), 445-450 (2014).
- Dreyfus, C., et al. Highly Conserved Protective Epitopes on Influenza B Viruses. Science. 337 (6100), 1343-1348 (2012).
- Krammer, F., Palese, P., Steel, J. Advances in Universal Influenza Virus Vaccine Design and Antibody Mediated Therapies Based on Conserved Regions of the Hemagglutinin. Curr Top Microb and Immunol. , Chapter 408 (2014).
- Impagliazzo, A., et al. A stable trimeric influenza hemagglutinin stem as a broadly protective immunogen. Science. , (2015).
- Nachbagauer, R., Krammer, F. Clinical Microbiology and Infection. Clin Microb Infect. , 1-7 (2017).
- Krammer, F. Novel universal influenza virus vaccine approaches. Current opinion in virology. 17, 95 (2016).
- Steel, J., et al. Influenza virus vaccine based on the conserved hemagglutinin stalk domain. mBio. 1 (1), (2010).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Margine, I., Palese, P. Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly protective stalk-specific antibodies. J Virol. 87 (12), 6542-6550 (2013).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Tan, G. S., Palese, P. Hemagglutinin Stalk-Reactive Antibodies Are Boosted following Sequential Infection with Seasonal and Pandemic H1N1 Influenza Virus in Mice. J Virol. 86 (19), 10302-10307 (2012).
- Hai, R., et al. Influenza viruses expressing chimeric hemagglutinins: globular head and stalk domains derived from different subtypes. J Virol. 86 (10), 5774-5781 (2012).
- Dunand, C. J. H., et al. Both Neutralizing and Non-Neutralizing Human H7N9 Influenza Vaccine-Induced Monoclonal Antibodies Confer Protection. Cell Host and Microbe. 19 (6), 800-813 (2016).
- Tan, G. S., et al. Broadly-Reactive Neutralizing and Non-neutralizing Antibodies Directed against the H7 Influenza Virus Hemagglutinin Reveal Divergent Mechanisms of Protection. PLoS Path. 12 (4), e1005578 (2016).
- DiLillo, D. J., Tan, G. S., Palese, P., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing hemagglutinin stalk-specific antibodies require FcγR interactions for protection against influenza virus in vivo. Nat Med. 20 (2), 143-151 (2014).
- DiLillo, D. J., Palese, P., Wilson, P. C., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing anti-influenza antibodies require Fc receptor engagement for in vivo protection. J Clin Invest. 126 (2), 605-610 (2016).
- Potter, C. W., Oxford, J. S. Determinants of immunity to influenza infection in man. Brit Med Bull. 35 (1), 69-75 (1979).
- Memoli, M. J., et al. Evaluation of Antihemagglutinin and Antineuraminidase Antibodies as Correlates of Protection in an Influenza A/H1N1 Virus Healthy Human Challenge Model. mBio. 7 (2), e00417 (2016).
- Jegaskanda, S., et al. Age-associated cross-reactive antibody-dependent cellular cytotoxicity toward 2009 pandemic influenza A virus subtype H1N1. J Infect Dis. 208 (7), 1051-1061 (2013).
- Jegaskanda, S., et al. Cross-Reactive Influenza-Specific Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Antibodies in the Absence of Neutralizing Antibodies. J Immunol. 190 (4), 1837-1848 (2013).
- Jegaskanda, S., Wheatley, A. K., Kent, S. J. ScienceDirectAntibody-dependent cellular cytotoxicity and influenza virus. Curr Opin Virol. 22 (C), 89-96 (2017).
- Srivastava, V., et al. Identification of Dominant Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity Epitopes on the Hemagglutinin Antigen of Pandemic H1N1 Influenza Virus. J Virol. 87 (10), 5831-5840 (2013).
- He, W., et al. Epitope specificity plays a critical role in regulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza A virus. PNAS. 113 (42), 11931-11936 (2016).
- Leon, P. E., et al. Optimal activation of Fc-mediated effector functions by influenza virus hemagglutinin antibodies requires two points of contact. PNAS. , 201613225 (2016).
- Benjamin, E., et al. A Broadly Neutralizing Human Monoclonal Antibody Directed against a Novel Conserved Epitope on the Influenza Virus H3 Hemagglutinin Globular Head. J Virol. 88 (12), 6743-6750 (2014).
- Ekiert, D. C., Kashyap, A. K., et al. Cross-neutralization of influenza A viruses mediated by a single antibody loop. Nature. 488 (7417), 526-532 (2013).
- He, W., et al. Broadly Neutralizing Anti-Influenza Virus Antibodies: Enhancement of Neutralizing Potency in Polyclonal Mixtures and IgA Backbones. J Virol. 89 (7), 3610 (2015).
- Kristensen, A. B., et al. Antibody Responses with Fc-Mediated Functions after Vaccination of HIV-Infected Subjects with Trivalent Influenza Vaccine. J Virol. 90 (12), 5724-5734 (2016).
- Greenberg, S. B., Criswell, B. S., Six, H. R., Couch, R. B. Lymphocyte cytotoxicity to influenza virus-infected cells. II. Requirement for antibody and non-T lymphocytes. J Immunol (Baltimore, Md. : 1950). 119 (6), 2100-2106 (1977).
- Corrales-Aguilar, E., Trilling, M., et al. A novel assay for detecting virus-specific antibodies triggering activation of Fcγ receptors. J Immunol Meth. 387 (1-2), 21-35 (2013).
- de Vries, R. D., et al. Influenza virus-specific antibody dependent cellular cytoxicity induced by vaccination or natural infection. Vaccine. 35 (2), 238-247 (2017).
- Cheng, Z., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Meth. 414 (1), 69-81 (2014).
