Teslimi için cerrahi işlem embriyonik kök hücre elde edilen endotel hücreleri iskemik hindlimb biyoparlaklık görüntüleme ile non-invaziv takibi ile gösterilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri
Bu makalede
Özet
Özet
Bacaklar ve ayaklar, oksijenli kan ve besin kaynağı periferik arterlerin daralması periferik arter hastalığı (PAH), Bu patoloji aralıklı topallama (yürüme ağrısı), ağrılı iskemik ülserasyonlar, hatta ekstremite tehdit eden bir kangren gibi semptomlara neden olur. Genellikle, tüm kan ve lenf damarlarının luminal yüzeyi yatırım endotel hücreleri bir tek tabaka, damar endotel, vasküler homeostazı ve vasküler rejenerasyon baskın bir rol oynadığı düşünülmektedir. Sonuç olarak, endotel hücre tabanlı rejenerasyon kök PAD tedavi için umut verici bir yaklaşım olabilir.
Bu video, embriyonik kök hücre nakli (ESC) göstermektedir elde edilen biyoparlaklık görüntüleme homing hücre ve hayatta kalma non-invaziv izleme takip PAD bir model olarak endotel hücreleri, tek taraflı hindimb iskemi tedavisi için. Hücre teslimat ve görüntüleme için özel malzemeler ve usulleri açıklanan olacaktır. Bu protokol Niiyama ark hindlimb iskemi indüksiyon açıklayan başka bir yayın izler. 1
Protokol
1. Endotel hücreleri içine fare EKH farklılaşma
- Endotel hücreleri EKH ayırt için protokol başka açıklanan ve bu protokol 2,3 odak değildir. Kısaca, hücrelerin ayırt etmek için izin verilir ve floresan aktif hücre sıralama (FACS), CD31 ya da vasküler endotelyal kaderin (VE-kaderin) gibi endotel işaretleri için pozitif hücreler daha sonra arıtılmış.
2. Double Fusion Reporter Gen ve lentiviral İletimi İnşaatı
- Biyoparlaklık ateşböceği lusiferaz (fluc) muhabiri genlerin ifade etmek için değiştirilmiş hücreler izlemek için kullanılabilir. Bu uygulama için, hücreleri bir iç ubikuitin organizatörü kontrol al....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
EKH farklılaşma ve endotel hücreleri de dahil olmak üzere her üç germ tabakasından oluşan hücre soylarının ortaya çıkmasına neden yeteneklerini plastisite nedeniyle doku iskemi tedavisi için umut vaat eden bir hücre kaynağı. EKH ile ilgili etik kaygıları aşmak için, bağlı pluripotent kök hücreleri (iPSCs) etik kaygılar üstesinden alternatif pluripotent kök hücre kaynağı olabilir. EKH yanı sıra, yetişkin kök hücreleri, endotel progenitör hücrelerin (EPC) ve hematopoetik kök hücreleri (HKH'lerin) gibi de kullanılabilir, ancak bu hücre tip.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Yazarlar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Hibe Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, Doktora ve teknik yardım için Stanford Küçük Hayvan Imaging Core teşekkür ederim. Yazarlar ayrıca veteriner ekipman desteği için teşekkür ederiz. AM Bickford, Inc. Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri araştırma hibeler (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743 1K12 HL087746), California University of California (15IT-0257 ve 1514RT-0169) Tütün İlgili Hastalık Araştırma Programı tarafından desteklenen ve Rejeneratif Tıp California Institute (RS1-00.183).
NH bir burs Amerikan Kalp Derneği tarafından desteklenmektedir. Kalp Derneği.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Cerrahi aletler | Alet | Fine Science Tools | ||
| Şırınga iğnesi | Alet | BD Biosciences | 28G insülin şırıngası tercih edilir | |
| Fosfat Tamponlu Salin | Reaktif | Invitrogen | ||
| D-luciferin | Reaktif | Biosynth International, Inc | D-luciferin'i önceden PBS içinde 15 mg/mL'lik filtrelenmiş stok çözeltiler halinde hazırlayın | |
| IVIS 200 Biyolüminesans görüntüleme sistemi ve veri toplama yazılımı | Ekipman |  Xenogen Corporation |
Kaynaklar
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
