Burada larva ve yetişkin kalp tüplerin farklı unsurları floresan etiketlenmesi için temel bir protokol tanımlamak Drosophila melanogaster. Bu örnekler, floresan veya konfokal mikroskopi ile görüntüleme için çok uygundur. Bu teknik, güçlü bir model organizma kalplerin özellikleri ayrıntılı yapısal analiz izin verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
VE Floresan Etiketleme Drosophila Kalp Yapıları
Bu makalede
Özet
Protokol
Başlamadan önce
- Aşağıdaki çözümleri hazırlayın:
- rahatlatıcı tamponu (10 mM EGTA içeren yapay Drosophila hemolimf (ADH) ("Drosophilia'daki kalpte görselleştirme" bölümüne bakın))
- fiksatif (1x PBS içinde% 4 formaldehit)
- PBSTx (% 0.1 Triton X-100 içeren PBS)
- PBSTx uygun şekilde seyreltilmiş birincil ve türe spesifik floresan etiketli sekonder antikorlar
- Drosophila teşrih kalp tüpleri (erişkin sinek ve / veya larva) maruz
- yarı sağlam Drosophila kalp hazırlanması "Drosophila kalpte görselleşt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada Drosophila melanogaster dorsal damar ve görüntüleme için floresan veya konfokal mikroskopi ile ilgili dokuların hazırlanması ve boyanması için yararlı bir protokol mevcut. Rafine edilmiş ve yaygın olarak larva ve yetişkin Drosophila kalp tüpleri in situ görüntüleme iyi bir çözüme izin verir etkin boyama laboratuarımızda istihdam adımların kısa ve öz bir açıklama sağlamalıdır . Diğerleri kısaltılmış biçim, 2, 3, 4 benzer yöntemler var.
Önemli ek ay.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Yazarlar SI Bernstein (San Diego Eyalet Üniversitesi) Bu yazının hazırlanması ile ilgili eleştirel okuma ve yararlı önerileri için teşekkür ederim. Bu çalışma SI Bernstein, SDSU, R. Bodmer, BIMR NIH hibe programı tarafından desteklenen ve G. Batılı Devletler, Amerikan Kalp Derneği Ortaklık Vogler ve A. Cammarato bir post-doktora bursu.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Etilen glikol-bis (2-amino-etileter) -N,N,N’,N’-tetra-asetik asit (EGTA) | Reaktif | Sigma-Aldrich | E4378 | |
| Formaldehit, %10, metanol içermeyen, Ultra Pure | Reaktif | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reaktif | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 falloidin | Reaktif | Invitrogen | A12381 | |
| DAPI içeren Floresan için Vectashield® Montaj Ortamı | Reaktif | Vector Laboratories | H-1200 | |
| Tungsten iğneler | Reaktif | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| İğne tutucu | Reaktif | Fine Science Tools | 26018-17 |
Kaynaklar
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
