Yetişkin kullanımı sınırlayıcı faktör Drosophila Göz nörodejenerasyon ve hücre biyolojisi çalışmada, hücre içi süreçlerin zor görüntüleme. Biz, ilaç tedavisi ve ileri görüntüleme konusu olabilir iyi niyetli bir primer nöronal hücre kültürü, oluşturmak için tek ommatidia diseksiyonu açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tek Drosophila Ommatidium Diseksiyon ve Görüntüleme
Bu makalede
Özet
Özet
Meyve sineği Drosophila melanogaster sinirbilim araştırması için çok değerli katkılarda bulunmuştur ve nörodejeneratif hastalıklar için çünkü güçlü genetik 1 bir model olarak yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır. Özellikle sinek göz Drosophila sinir sisteminin en erişilebilir ve yaşam vazgeçilebilir bir parçası olmak, nörodejenerasyon araştırma için tercih organı olmuştur . Ancak sağlam gözleri en önemli uyarı nörodejenerasyon anlamak için her şeyden otofaji dinamikleri 2 hücre içi olaylar gibi görüntüleme, çünkü pigment yoğun otofloresans zorluk.
Biz son zamanlarda Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofi bir sinek modeli (DRPLA) 3, 4 otofajik işlev bozukluklarının anlaşılması için gerekli olan tek ommatidia 3 diseksiyon ve kültür kullandık .
Şimdi nörodejenerasyon için sinek modelleri olasılığını önemli ölçüde genişletmek için muhtemel elektrofizyolojik çalışmalar 5, uyarlanmış bu tekniği (Şekil 1), kapsamlı bir açıklama raporu . Bu yöntem, görüntü, canlı hücre içi olaylar ve fotoreseptör hücrelerinin (Şekil 2) üzerine etkili ilaç yönetimini izlemek için adapte edilebilir. , Mozaik teknikleri 6-8 ile birlikte kullanılması durumunda, hücrelerin genetik olarak farklı tepkiler (Şekil 2) paralel olarak test edilebilir .
Protokol
1. Drosophila retina diseksiyonu
- Bir iyi bir 3-Well Cam Slayt doldurun fosfat tamponlu salin (PBS 1X) ve sonra CO 2 sinekler uyutmak. Hem erkekler hem de bu deney için kullanılabilir.
- Sinekler anestezi sonra, forseps kullanarak tek bir sinek pick up ve PBS küçük bir çanak içine bırakın.
- Diseksiyon kapsamında, forseps ile burnumun çimdik, ve daha sonra ikinci bir forseps kullanarak boyun kesilmesinin vücut baş ayırmak.
- Sol / sağ orta hat beyin ortaya çıkarmak için microscissors sinek kafası boyunca yarıya, burnumun Holding sinek kafası.
- Retina pick up ve iyi bir Schneider orta dolu 3-Well Cam Slide....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada sunulan tek ommatidium diseksiyonu Drosophila göz modellenen nörodejenerasyon gibi süreçleri hakkında derin hücre biyolojik bilgi toplama sağlar. Fotoreseptör nöronlar diğer nöronlarla daha kolay erişilebilir ve onlar sitoplazma, in vivo olarak nörodejenerasyon ölçmek için birçok model yetkin kullanılan çok aynı hücrelerde, özellikle büyük ve böylece vezikül dinamiklerini incelemek için uygun . Diseksiyon kritik yönü ağırlıklı olarak Sabitlenmemiş doku kadar kuru hava veya maruz asla bunu gerçek.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Biz Bernard Charroux tartışmalar için teşekkür ederiz. Bu çalışma KCL Biyomedikal Okulu tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktifin Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar (isteğe bağlı) |
| Taşınabilir CO2 Dispenseri | Flystuff | 59-150 | Bilgiler mevcut |
| DUMONT Cımbız No 5 | Bilimsel AGAR | T5034 | |
| 3-Well Cam Slayt | EMS | 71561-01 | |
| Mikro makas | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider Orta | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Kırmızı DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| SuperFrost Slaytlar | VWR | 631-0108 | |
| DAPI ile Vectashield | Vektör Labs | H-1200 | |
| Lameller | VWR | 631-1336 |
Kaynaklar
- Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
- Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
- Nisoli, I.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
