Biz teslim izleyiciler için pratik bir rehber In vivo Ve farelerde başarılı nöronal devre analizi için gerekli adımları göstermek için bir model sistem olarak spinoserebellar yolu kullanabilirsiniz. Biz Alexa fluorophores konjuge buğday tohumu agglutinin (WGA) yararlanan çok yönlü izleme protokolü ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çok Renkli Sinir Devre Topografya Revealing
Bu makalede
Özet
Özet
Nöral devrelerin fonksiyonel topoğrafik haritalar halinde düzenlenmiştir. Karmaşık devre mimarisi görselleştirmek için, güvenilir bir şekilde birden fazla topografik projeksiyonlar küresel desenlendirme etiket bir yaklaşım geliştirdi. Beyincik nöral devrelerin düzenli düzenlemeyi incelemek için ideal bir model. Örneğin, spinoserebellar yosun tutmuş liflerinin bölmeli örgütü yosun tutmuş fiber desenlendirme eğitim için vazgeçilmez bir sistem olduğu kanıtlanmıştır. Yakın zamanda 555 ve 488 Alexa konjuge buğday tohumu agglutinin (WGA), gelişmekte olan ve erişkin farelerde spinoserebellar yosun tutmuş lif projeksiyonları izleme için kullanılabilir gösterdi (Reeber ark 2011). Biz sinir projeksiyonları etiketleme yapmak için WGA-Alexa tracerlerin arzu araçları üç ana özellikleri bulundu. İlk olarak, Alexa fluorophores yoğun ve parlaklık doğrudan izleme sonra wholemount görüntüleme için izin verir. İkincisi, WGA-Alexa tracerlerin geliştirilmesi ve yetişkin nöral projectio tüm yörünge etiketins. Üçüncüsü, WGA-Alexa izleyiciler, retrograd ve anterograd her iki yönde hızla taşınır. Burada, biz izleyiciler ve diğer gerekli araçlar, spinoserebellar izleme için ameliyat gerçekleştirmek için nasıl ve ne kadar iyi takip projeksiyonları üç boyutlu görüntü nasıl hazırlanacağını detaylı olarak açıklanmaktadır. Özet olarak, biz sadece beyincik değil, aynı zamanda, korteks, beyin sapı ve omurilik fonksiyonel haritaların kurum ve bağlantı deşifre için faydalı olacak bir adım-adım izleme protokolü sağlar.
Protokol
1. Steril cerrahi kullanarak in vivo izleyiciler teslimi (Bölümler 1,1-1,16)
Süreci boyunca standart, steril cerrahi teknikler kullanılması tavsiye ederiz. Bu steril eldiven, önlük, yüz maskesi kullanarak içerir. Araçları kullanmadan önce ya otoklava ya da su ve etanol ile iyice temizlenmelidir. Ameliyat sırasında ve özellikle arasında hayvanlar, sıcak bir boncuk sterilizatör (Steri 250 Kedi # 18.000-45, Güzel Bilim Araçları) araçları ve kuru sterilize aletler kapalı temiz doku parçaları. Buna ek olarak, hayvan hazırlama (tıraş vb), cerrahi ve hayvan kolayca izlenir ısındı, ve gerektiği kadar ağrı kesicilerle temin edilebilir bir k....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz başarılı bir akson ve dendrit, hızla gelişmekte olan ve erişkin farelerde sinir projeksiyonları etiketleme için bir roman floresan dayalı bir yaklaşım kullanarak izleme için gerekli cerrahi ve teknik detayları tarif var. WGA-Alexa kullanarak izleyiciler ve işaretleri, yüksek çözünürlükte desenli devre topoğrafyası ve üç boyutlu olarak analiz etmek için nasıl kullanılabileceğini gösteriyor.
Birçok izleyiciler kolera toksin altbirim B Biocytin, Neurobiotin, Phaseolus vulgaris leucoagglutin.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma, başlangıç fonu Yeshiva Üniversitesi Albert Einstein College of Medicine RVS için yeni bir araştırmacı tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Donanım / Reaktifler | Model / Katalog numarası | Şirket | |
| Boncuk sterilizatör | Model 250 Kedi Steri. # 18.000-45 | Güzel Bilim Araçları | |
| Cauterizer | Cat. # 18.000-00 | Güzel Bilim Araçları | |
| Borosilikat cam kapilerleri | Cat. # 300.056 | Harvard Apparatus | |
| Çift sahne Cam Mikropipet Çektirme | Model 001-PC-10 | Narishige | |
| Mikrometre şırınga | Cat. # GS-1100 | Gilmont Aletleri | |
| Küçük Hayvan Stereotaksik Enstrüman | Model 940-A | Kopf Enstrümantasyon | |
| Elektrot Manipulator | Model 960 | Kopf Enstrümantasyon | |
| Vetcare kamara | Cat. #340508 | Harvard Apparatus | |
| Isıtma Pedi | Cat. # 341.241 | Harvard Apparatus | |
| Leica DFC360 FX kamera | DFC360 FX | Leica | |
| Leica DFC490 kamera | DFC490 | Leica | |
| Leica DM5500 mikroskop | DM5500 | Leica | |
| Leica DFC3000 FX kamera | DFC3000 FX | Leica | |
| Leica MZ16 FA mikroskop | MZ16 FA | Leica | |
| CY3 Filtre | Model # 11600231 | Leica | |
| FITC Filtre | Model # 11513880 | Leica | |
| A4 DAPI / UV filtresi | Model # 11504162 | Leica | |
| Buğday agglutinin, Alexa Fluor 488 konjuge | Cat. # W11261 | Invitrogen | |
| Buğday germ agglutinin, Alexa Fluor 555 konjuge | Cat. # W32464 | Invitrogen |
Kaynaklar
- Apps, R., Hawkes, R. Cerebellar cortical organization: a one-map hypothesis. Nat. Rev. Neurosci. 10, 670-681 (2009).
- Grishkat, H. L., Eisenman, L. M. Development of the spinocerebellar projection in the prenatal mouse. J. Comp. Neurol. 363, 93-108 (1995).....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
