$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Siyatik Sinir Kronik daraltma
Aseptik teknikler cerrahi işlem için kullanılmalıdır. % 70 etanol ile cerrahi iş yüzeyi dezenfekte edin ve otoklavlayarak önceden steril aletler (örn., ince makas, forseps ve retraktör), tüller, zımba ve bezlerden de hazırlar. Çoklu operasyonlar için, temiz ve% 70 etanol ya da sıçanlar arasında kuru bir boncuk sterilizanlar ile resterilise aletleri. Bir cerrahi maske, saç kaporta ve steril eldiven giyilmelidir.
Sinir daralma için, kurumasını önlemek üzere, steril salin batırılır yaklaşık 3 cm uzunlukta küçük parçalar halinde kesilmesi ile kromik gut kenet hazırlanır. Yaranın kapatılması için, piyasada bulunan steril ipek dikişlerle kullanın.
- O 2 izofluran% 5 kullanan bir indüksiyon odasında sıçan Anaesthetise, sonra yüz maskesi yapılmış özel bir ile O 2 izofluran% 2 sunmak, ve işlem sırasında anestezi hayvan izlemek. Ortak alternatif anestezik halotan veya intraperitoneal sodyum pentobarbital teneffüs edilir. Bu reseptörler nöropatik ağrı geliştirilmesi önemlidir, çünkü ketamin, bir N-metil-D-aspartat (NMDA) reseptör antagonisti olarak, kaçınılmalıdır.
- Sıçan sol arka bacak Tıraş. Sonra, 37 bir termo-regüle ısıtma hasır üzerine hayvan yere ° C ve gözlere yağlama oftalmik merhem uygulayın.
- % 70 izopropil alkol ve iyot solüsyonu üç alternatif uygulamalarında traş alanı sterilize.
- Sıçan onun göğüs / göğüs yatarken ile, sol arka bacak yükseltmek ve ayak maskeleme bandı kullanarak omurga 90 ° femor ile konumda tutun.
- Bir deri paralel insizyon, ama femor altında 3-4 mm ve bağ dokusu ile keserek kesi çevreleyen kas ücretsiz cilt olun.
- Gluteus superficialis ve pazı arasındaki bağ dokusu kesti künt makas, kullanmafemoris kasları.
- Siyatik sinir açıkça görüntülenmesini sağlayan kaslar arasındaki farkın artırılmasına bir retraktörü kullanın.
- Eğri künt uçlu forseps ve mikro-makas, çevresindeki bağ dokusu ile siyatik sinir yavaşça serbest yaklaşık 10 mm (siyatik trifurkasyon proksimalinde) kullanma.
- Mikroskop ve iyi bir ışık kaynağı altında, bir çift düğüm ile siyatik sinir trifurkasyon proksimalinde dışında 1 mm, dört bitişik harfler (kromik katgüt 4.0, Ethicon, ABD) kravat. Her bağ, bir tek gevşek bir döngü başlar, sonra da döngü yakın iki ucu kavramak ve döngü sadece ancak rahat ve bağ sinir boyunca kaymıyorsa kadar sıkın. Kendi doğru pozisyonda döngü tutmak için, düğüm tamamlamak için ilk üstüne ikinci bir döngü koyun. Son olarak, 1mm civarına dikilen ve gevşek uçları kesilir. Sinir daralma en az olması ve kısa bir seğirme görülür ise derhal durdurulması, th tutuklamak önlemek için gerekene epinöral kan akımı. Ligatürleri sıkma fazla aksotomi yol açar ve autotomy (kendini yaralama), başarılı bir ağrı aşırı duyarlılık testlerine engel hem de istenmeyen yan etkiler.
- Cildi sıkıştırmak için kas tabakası ve zımba (AutoCLIP, 9 mm) kapatmak için dikiş (Mersilk 5.0, Ethicon) kullanın. Sonra, yara sterilize etmek (Riodine) iyot çözeltisi kullanın.
- Boğulma bilinçsiz hayvan önlemek için, anestezi iyileşme döneminde yakından sıçan dikkat edin, düz kağıt yataklar (değil standart hayvancılık yatak) ile ayrı bir kafese kurtarmak için izin verir.
Herhangi bir post-operatif analjezi araştırmacılar vermeden önce bu ağrı aşırı duyarlılık testleri etkileyebilir gerçeğini göz önünde bulundurmalıdır. Aslında, yaralanma sırasında anestezi, lidokain, lokal uygulama nöropatik ağrı gelişimi, değiştirebilir ve önceki hafta 7 hiperaljezi derecesini azaltabilir dair kanıtlar vardır. Bu m daha fazla tartışma içinBennett ve arkadaşları 8 tarafından gözden bakın ardıl.
2. Ağrı Davranışları ölçümleri
- Deney başlamadan önce birkaç gün süreyle sıçanlar Günlük kullanım, onların işleyicisi sıçan alıştırmak stres ve ısırma riskini azaltmak için önerilmektedir.
- Davranış testinden önce, sıçanlarda test prosedürü ve hayvan muhafaza etmek habitüe gerekir. Test ortamı sessiz kaldı ve iyi sabit sıcaklık ve nem düzeyleri ile kontrol ve gün benzer bir zaman her test oturumunda yapılmalıdır.
- Ağrı aşırı duyarlılık testi istediğiniz gibi, CCI (bazal) öncesi ve CCİ sonra farklı zaman noktalarında birkaç kez yapılmalıdır.
3. Mekanik Çekme Eşik
- Test gününde, yeri fareler artmış örgü katlı test kafesin içine çekilmesi eşikleri ölçülerek 15-30 dakika önce, kafes arama ve groo izinming faaliyetleri durdurma ve sıçanların rahat ve sabit olmak.
- Doğrudan sıçanın sol arka ayağını orta plantar yüzeyinin altında bir dinamik taban von Frey aesthesiometer (Ugo Basile, İtalya), pozisyon filamanlı dokunmatik stimülatör ünitesi kullanarak metal örgü kaçınarak, ve start tuşuna basın. Bu mekanik olarak artan bir kuvvet ile sıçanın sol arka ayağını plantar uyarmak için filament kaldırır.
Manuel von Frey tüyleri cilde uygulandığında belirli bir kuvveti teşvik için kalibre çapında filamentler artan bir dizi vardır. Bunlar pençe çekme eşiği, daha önce tarif 4 ölçülmesi için bir elektronik dinamik taban von Frey aesthesiometer alternatif olarak kullanılabilir. Elektronik von Frey aesthesiometers (örneğin IITC, ABD ve Somedic, İsveç) birkaç alternatif üreticileri de vardır.
- Yaralı ve elin hem hindpa gelen mekanik çekme eşiği kaydetmekws, bir denge için. Bu cihaz, pençe için basınç uygulayan ve geri çekilmesi üzerine reaksiyon sistemi otomatik kaydeder ve (gram cinsinden) uygulanan maksimum kuvvet gösterir. Belirsiz bir yanıt (veya ambulasyon tüylerini temizleme durumunda örn) oluşursa, uyaran tekrar tekrar eşik kaydedebilir. Yalama veya sıçanın sol arka ayağını aşağıdaki stimülasyon sallayarak ağrı ile ilişkili bir davranış işaretidir.
- Mekanik stimülasyonu uyaranlara arasında yaklaşık 5 dakika arayla 3 kez tekrarlayın, eşikler kaydetmek ve sonra pençe çekme eşikleri ortalamasını hesaplamak.
4. Termal Çekilme Gecikme
Plantar test cihazı ile kızılötesi (IR) ısı yoğunluğu deney başlamadan önce ayarlanmalıdır. Laboratuarımızda, biz naif sıçanlarda yaklaşık 10 saniye ortalama bir pençe çekme gecikme vermek IR yoğunluğunu ayarlayın ve doku zedelenmesine önlemek için 20 saniye kesme gecikme setBir pençe kaldırmak için arıza durumunda yaşı.
- Test gününde, bir yerde 15-30 dakika gecikme ölçümünden önce cam tabanlı test kafesin içine sıçan, kafes arama izin ve durdurma faaliyetleri damat ve sıçanların rahat ve sabit olmak.
- Doğrudan sıçanın sol arka ayağını orta plantar yüzeyinin altında bir termal plantar analjezi cihazı (Ugo Basile, İtalya), pozisyon kızılötesi kaynağı kullanarak, ve start tuşuna basın. Bu şeffaf bir cam yüzeyi sayesinde mükemmel bir ısı ışın sıçanın sol arka ayağını plantar ortaya koyar. Termal plantar analjezi aletler (örn. IITC, ABD ve Stoelting, ABD) alternatif üreticileri de vardır.
- Bir denge için, yaralı ve zarar görmemiş hem hindpaws çekilme gecikme kaydedin. Bu cihaz otomatik olarak ısı kaynağından pençe kesilmesine termal uyaranın başlangıcından (saniyede) geçen süreyi kaydeder. Belirsiz bir yanıtı ortaya çıkarsa (ambula durumunda örnvermekte veya damat), uyarıcı tekrar ve tekrar gecikme kaydedin. Yalama veya sıçanın sol arka ayağını aşağıdaki stimülasyon sallayarak ağrı ile ilişkili bir davranış işaretidir.
- Isı stimülasyonu uyaranlara arasında yaklaşık 5 dakika ara ile en az 3 kez tekrarlayın, gecikmeleri kaydetmek ve sonra pençe çekme gecikmeleri ortalamasını hesaplamak.
4. Temsilcisi Sonuçlar
Wistar sıçanların (yaralanmamış) ipsilateral (yaralı) ve kontralateral pençeleri mekanik çekme eşiği ve termal çekilme gecikme bir örnek, daha önce gösterilmeyen (bazal) ve 2-12 gün Şekil 3A CCİ ve Şekil 3B sonra. Edilir Bu rakamlara bakıldığında CCİ, mekanik ve termal ağrı hipersensitivite varlığını gösteren, mekanik çekme eşikleri ve ipsilateral sıçanın sol arka ayağını termal çekilmesi gecikmeleri hem de önemli bir düşüş neden olduğu görülebilir kronik nöropatik ağrı hem de özellikleri .

Şekil 1. CC modelinde ligatürü konumlandırma açıklayan şematik bir resimdir. Nöropatik ağrı, bu hayvan modelinde orta uyluk düzeyinde siyatik sinir dört gevşek kromik-bağırsak bitişik harfler, yerleştirme içerir. Bu sıçanın sol arka ayağını ayağı ve bunu takip eden ağrı aşırı duyarlılık olacak afferentleri sadece bir kısmını yaralanmasına neden olur.

Şekil 2. Ağrı testi için kullanılan sıçanın sol arka ayağını alanının Diyagramı. Olarak kırmızı noktalı bir daire ile gösterilen ayak yastıklarından sadece posterior orta plantar, ağrı, test için kullanılır. Bu bölge siyatik sinirin terminal dalları çoğunlukla innerve edilir. Topuk ve ayak pedleri diferansiyel cilt hassasiyeti nedeniyle kaçınılmalıdır.
"3.jpg />
Sıçanlarda siyatik sinirin kronik daralma sonrasında Şekil 3. Ağrı aşırı duyarlılık. CC sonra mekanik uyarıcılar (A) ve (B) yaralı termal uyarılara pençe çekme gecikmesi (ipsilateral) ile pençe çekme eşiği önemli bir azalma elin (taraf) sıçanın sol arka ayağını (P <0.01 tekrar ölçümlü 2 ile karşılaştırıldığında vardır sıçanın sol arka ayağını olduğu yönlü ANOVA). Veriler ortalama göstermek ± sem, n = 7 Wistar sıçan.