Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Geleneksel subkutan bir tümör modeli kolorektal kanser eğitimi için ideal daha az. Kolorektal kanser özelliği, doğal bir yerde çoğalan kanser hücrelerini, Ortotopik fare modelleri, yüksek sadakat, insan hastalık yineler. Bu modeli kurmak için iki teknik kullanılabilir. Her iki teknikte de benzer ve çekum maruz kalma fare anestezi ve laparotomi gerektirir. Bir teknik çekal duvar içine kolorektal kanser hücre süspansiyonu enjeksiyon içerir. Kanser hücreleri kültürde yetişen zaman akışkan hasat ve tek bir hücre süspansiyonu olarak hazırlanmıştır. Hücrelerin küçük bir ses sızıntısını önlemek için yavaş yavaş enjekte edilir. Diğer teknik çekum üzerine subkutan bir tümör bir parça nakli içerir. Önceden belirlenmiş subkutan kolorektal tümör ile bir fare ötenazi ve steril tekniği kullanarak tümör kaldırılır. Tümör parçasının başka bir fare nakli için küçük parçalara ayrılır. Nakli için, önce çekal duvara hafifçe tümör hücre infiltrasyonu kolaylaştırmak için zarar görmüştür. Birincil tümörleri ve karaciğer metastazlarının geliştirmek için zaman, tekniği, hücre hattı ve kullanılan fare türlerinin bağlı olarak değişecektir. Bu ortotopik fare modelinde, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.
Protokol
I. Hücre Hazırlık
- Kolorektal kanser hücrelerinin kültür ortamında yetişen ve akışkan hasat.
- Bir tek hücre süspansiyonu fosfat hazırlanan tamponlu tuz ve buz üzerinde tutulmalıdır.
II. Tümör Hazırlık
- Önceden belirlenmiş subkutan kolorektal tümör ile bir fare ötenazi.
- Subkutan bir tümör 2-3 mm'lik parçalar steril tekniği kullanarak kaldırıldı ve bölünmüş
- Tümör adet fosfat tutulur buz üzerinde tamponlu salin.
III. Fare Hazırlık
Not: Laboratuarımızda fare uyutmak için izofluran inhale kullanır; alternatif olarak, aynı etkiyi elde etmek için enjektabl anestezikler kullanabilirsiniz
- Anestezi derinliği ayak tutam kullanılarak değerlendirilir. Ayak tutam refleks çekilme yoktur olmalıdır.
- Antibiyotikler bu noktada verilebilir.
- Daha önce traş anestezi fare, düzgün bir şekilde konumlandırılmış.
- Karın betadin çözümü ile prepped.
- Karın ve cerrahi alan steril bir moda dökümlü.
IV. Laparotomi
- Küçük bir nick cilt yapılır
- Karın duvarı kas kavradı ve kaldırdı
- Karın boşluğuna girilir ve makas, tek bir bıçak uzak intraabdominal içeriğini itmek için kullanılır.
- Kesi 2-3 cm uzatıldı
Çekum V. Pozlama
- Kör biten çantası ile birlikte çekum tespit ve exteriorized
- Çekum önceden kesilmiş, steril gazlı bez kullanarak fare geri kalanından izole
- Ilık tuzlu su çekum nemli tutmak için kullanılır.
VI. Hücreler Çekal Duvar içine enjeksiyon
- A 27 G veya ince iğne çekal duvarın içine 50 mcL hacmi bir hücre enjekte etmek için kullanılır.
- Iğne kaldırıldı.
- Enjeksiyon yerinde, herhangi bir kaçak olmak üzere kontrol
- Çekum karın boşluğuna geri döndü
VII. Çekum üzerine Tümör Nakli
Not: çekal duvar içine hücreleri enjekte ek olarak, alternatif bir yaklaşım çekum üzerine tümör nakli için
- 8 dikiş bir rakam, 6-0 veya 7-0 ölçekli sütür kullanarak çekum üzerine yerleştirilir.
- Çekal duvara hafifçe hasar görmüş
- Ardından, tümörün parça konumlandırılmış
- Dikiş bağlı
- Çekum karın boşluğuna geri döndü
VIII. Fare Karın Duvarı Kapatma ve Kurtarma
- Fare karın duvarı, 3-0 veya 4-0 ölçekli sütür kullanarak üç kesintiye dikiş kullanılarak kapalı
- Alternatif olarak, bir çalışan basit bir dikiş kullanabilirsiniz
- Post-operatif ağrı kesiciler ve bu noktada bir sıvı bolus verilebilir
- Fare anestezi kurtarmak için izin verilir.
Not: inhale anestezikler bu genellikle 30 saniye sürer
IX. Sonuçlar - İlköğretim Tümör ve Karaciğer Metastaz
Primer Tümör - yerinde gösterilir (A) ve (B) neovaskülarizasyon kanıt, H & E boyama, tümörler, lokal olarak invaziv (C)
Karaciğer Metastaz gösterilen ex vivo (D)
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Fare subkutan bir tümör modelleri oluşturmak ve izlemek için kolay olmasına rağmen, bu model, kolorektal kanser orijinal anatomik site çoğaltmak olamayacağını açıktır. Mikroçevresinin farkı nedeniyle, deri altında büyüyen kolorektal kanser hücrelerinin fenotipi değiştirmek ve hemen hemen her zaman ilerleme ve metastaz 1,2 başarısız gösterilmiştir. Aslında, tedaviye tümör yanıtı, kanser hücrelerinin ektopik (subkutan) karşı ortotopik konumu 3 implante olup olmadığına bağlı olarak önemli ölçüde değişebilir. Kolorektal ka...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Cerrahi Anabilim Dalı, University of California, San Francisco
Raymond Shaheen, MD
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Hücre kültürü medyaları ve bileşenleri | kullanılan hücre hattına göre değişiklik gösterecektir | ||
| Fosfat Tamponlu Salin | BioWhittaker | 17-512F | birçok diğer satıcı tarafından da satılmaktadır |
| 15 mL santrifüj tüpleri, polipropilen | Corning | 430790 | |
| Kapaklı 6 kuyucuklu plakalar | BD Biosciences | 353046 | |
| Iris pensi, düz, tırtıklı uçlu | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | bu aletlerden bir çift bulundurmak en iyisidir |
| Iris diseksiyon makası, düz, keskin | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| İğne tutucu (standart) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| İğne tutucu (Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | aletler periyodik olarak otoklavlanmalı, ancak Cidex içinde bekleterek de sterilize edilebilir |
| 6-0 veya 7-0 sütür | çekum için; UCSF Cerrahi Bölümü'nün katkılarıyla | ||
| 3-0 veya 4-0 sütür | karın duvarı için; UCSF Cerrahi Bölümü'nün katkılarıyla | ||
| Anestezi cihazı / İzofluran | J.A. Baulch and Associates | 3206 | birçok diğer satıcı tarafından da satılmaktadır |
| Isıtma pedi, tek kullanımlık, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| Bant, turuncu, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | anestezize edilmiş fareyi sabitlemek için |
| Pro-Cord/Kablosuz Tıraş Makinesi | Oster Professional Products | 78997-010 | fare tüylerini tıraş etmek için |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-027132 | herhangi bir tıbbi malzeme mağazasından da satın alınabilir |
| 2 x 2 gazlı bez, 3 katlı | Johnson & Johnson | 7635 | herhangi bir tıbbi malzeme mağazasından da satın alınabilir |
| Steril Alan, Bariyer, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | herhangi bir tıbbi malzeme mağazasından da satın alınabilir |
| Pamuk uçlu aplikatörler, 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | herhangi bir tıbbi malzeme mağazasından da satın alınabilir |
| Şırınga, 10 cc, Luer lock uçlu | BD Biosciences | 309604 | |
| Şırınga, 1 cc, tüberkülozini, slip uçlu | BD Biosciences | 309602 | |
| 27 1/2 G iğne | BD Biosciences | 305109 | |
| 30 G iğne | BD Biosciences | 305106 |
Kaynaklar
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans. Comp Med. 50, 16-26 (2000).
- Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil. Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).
- Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer. Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
