Yöntem makalesi

bir (A) Güvenlik Önlemleri ve Çalışma Usul BSL-4 Laboratuvar: 3. Aerobiyoloji

14.2K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/53602

⸱

3 Ekim 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Integrated Research Facility at Frederick, National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID), National Institutes of Health (NIH)

Bu makalede

Özet

Yüksek sonuçlu patojenler, havadaki partiküller yoluyla denekleri potansiyel olarak enfekte edebildiğinden, aerobiyoloji, patogenez araştırmalarında ve tıbbi karşı önlem geliştirmede giderek daha fazla uygulanmaktadır. Bir hayvan biyogüvenlik seviyesi 4 maksimum muhafaza ortamında insan olmayan primatlarda bir aerosol mücadelesi sırasında aerobiyoloji prosedürlerinin ayrıntılı bir görsel gösterimini sunuyoruz.

Özet

Yüksek sonuçlu patojenlerin aerosol veya inhalasyon çalışmaları, kasıtlı aerosol salınımlarının veya beklenmedik doğal aerosol iletiminin algılanan tehdidi nedeniyle son zamanlarda sayıca artmaktadır. Bu deneyleri gerçekleştirmek için tasarlanmış özel laboratuvarlar, güvenli ve emniyetli bir çalışma ortamı sağlamak için muazzam mühendislik kontrolleri ve işlevselliği sürdürmek için sürekli sistem bakımı gerektirir. Torpido gözü olarak da adlandırılan Sınıf III biyogüvenlik dolapları, açılmayan pencerelere sahip gaz geçirmez muhafazalardır. Bu kabinler, çift yüksek verimli partikül hava (HEPA) filtreli egzoz sistemleri ile negatif basınç altında tutulur ve muhafaza aerosolizasyon ekipmanı için ideal birincil muhafazadır. Örneğin, bir hayvan biyogüvenlik seviye-4 (ABSL-4) giysi laboratuvarından ABSL-4 kabin laboratuvarına kadar yüksek koruma altındaki personel üyeleri arasında iyi planlanmış bir iş akışı, başarılı bir deney için çok önemli bir bileşendir. Çalışmanın sorunsuz bir şekilde yürütülmesi için, bir iletişim ağı kurmak, ekipman ve deneklerin taşınması ve ekipmanın kurulması ve yerleştirilmesi, personelin çalışmaya başlamadan önce prosedürleri titizlikle planlamasını gerektirir. Burada, Fort Detrick, Maryland, ABD'deki Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü Entegre Araştırma Tesisi'nde ABSL-4 ortamında aerobiyoloji araştırmalarının nasıl yürütüldüğüne dair bir genel bakış ve görsel bir sunum sunuyoruz.

Giriş

Virüslerin bulaşması genellikle aerosol veya solunum tarafından iletilen patojenlerin neden olduğu doğrudan veya fiziksel temas, ancak birçok önemli viral hastalıklar (örneğin, kızamık, suçiçeği, grip) ile gerçekleşir. Böyle patojenler iş kaybı ile ilişkili yaygın hafif hastalık arasında değişen sonuçları ile bir pandemi neden olma potansiyeline sahip (örneğin, soğuk algınlığı) yüksek öldürücülüğü (örneğin, çiçek) ile ciddi hastalık nadir için. Aerosol veya kasıtlı aerosol salınımı ile doğal yayılan yüksek sonucu patojenler (biyolojik silahlar) aerobiyoloji 1 özel ilgi bulunmaktadır. İnsanlar hızla öksürme ve hapşırma 2, büyük solunum damlacıkları veya küçük parçacık çekirdekleri bu patojenlerin bazı enfekte ve kolayca tükürük salgıları yoluyla başkalarına bu patojenler yayılır hale gelebilir. ABD biyosavunma toplumda, yüksek sonucu patojenler (örneğin, filovirüsler veya diğer NIAID Category AC Öncelik patojenler ve CDC Biyoterörizm Ajanları) ilişkili enfeksiyonların 3,4 yüksek öldürücülüğü nedeniyle aerosol araştırma programlarının odak noktasıdır. Aerobiyoloji alanında önemli bilimsel adımlar nedeniyle aerosol ekipman ve yüksek çevreleme tesislerinde 5,6 teknolojik gelişmeler son on yıl içinde yapılmıştır. Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü (NIH / NIAID), Frederick, MD, ABD (IRF-Frederick) bulunan Fort Detrick'de Entegre Araştırma Merkezi Araştırma hayvan biyo-güvenlik gerektiren yüksek sonucu ortaya çıkan patojenler üzerinde duruluyor seviye 4 (ABSL-4) çevreleme. IRF-Frederick genel misyonu değerlendirmek ve aday aşılar ve terapötik (tıbbi önlemler) gelişimini kolaylaştırmaktır.

IRF-Frederick yüksek-sonuç patojenler ile Araştırma sıkı biyogüvenlik ve hayvan bakımı ve kullanımı gerekliliklerine göre belirlenir. Bu requirEMENTS Mikrobiyolojik ve Biyomedikal Laboratuvarlar (BMBL) kılavuzuna 7 ve federal hayvan refahı düzenlemeler Biyogüvenlik özetlenmiştir. Bu gereklerin yapılabilir araştırma türünü kısıtlamak ve genel çalışma tasarımını etkileyebilir. Biz daha önce bu dergide anlatıldığı gibi, bir ABSL-4 ortamda yapılan tüm araştırmalar, özellikle dikkatli, çok özel eğitim ve sağlam ve yedekli tesis altyapısı 8,9 gerektirir.

IRF-Frederick ABSL-4 takım laboratuvar girmesi takım 8 kapsülleme pozitif basınç giyilmesini gerektirir. takım elbise encapsulating Pozitif basınç ABSL-4 kabin laboratuvar girmek için gerekli değildir. Bir ABSL-4 kabin laboratuarda 7 sertifikalı Sınıf III Biyogüvenlik Kabini (BSC) içinde Risk Grubu 4 bulaşıcı malzeme işlenirken bodur takım elbise, lastik veya nitril eldiven ve yakın parmaklı ayakkabı bir takılma uygundur.

IRF-Frederick at, aerosol ekipmanları, mühendislik monte ve iki hermetik, paslanmaz çelik, hava geçirmez, negatif basınç Sınıf III BSC, Şekil 1 korunur. IRF-Frederick Aerobiyoloji Çekirdek otomatik aerosol yönetim Platformu (istihdam AAMP) kontrol etmek ve bu BSC içinde aerosol deney, Şekil 2 izlemek için. bir önceki yayın IRF-Frederick de Sınıf III BSC ve geçiş portu 5 üzerinden uygun laboratuvara bağlantının özel işlevleri sıraladı. deney öncesinde Sınıf III BSC hazırlanması için prosedürü IRF özgüdür. Diğer kurumlarda kullanılan diğer Sınıf III BSC'ler IRF kullanımda Sınıf III BSC benzer şekilde çalışır, ancak ulaşım, erişim ya da yerleştirme için farklı mekanizmalara sahip olabilir.

ayrıca yüksek sonucu patojenler bulaşıcı kalır anlamak ve aerosol iletim yoluyla yayılması için, güvenli aerobiological deneyler, belirli bir iş akışı prosedüre göre bu Sınıf III BSC'ler yapılmalıdır. Araştırmacılar dikkatle ve iyice güvenli ve tutarlı bir şekilde takip edilir, bu iş akışını sağlamak için eğitim verdi. insan olmayan primat (NSP) aerosol, çeşitli aerosol karakterizasyonu veya sahte aerosol çalışır öncesinde aerosol formunda istikrar ve canlılığı bir ajanın zaman test etmek için yapılır. Aerosol karakterizasyonu proses gerçek aerosol taklit ve araştırmacı aerosol çalışmaları ile ilişkili değişkenleri değerlendirir.

iş akışının diğer bir parçası, her NHP listelerde fiziksel manipülasyonlar, yönetim veya anestezik veya diğer ajanlar, ya da rutin prosedürler kaydetmektir. Bu konu çizelgeleri usul tutarlılık ve standardizasyonun sağlanması için iyice analiz edilir. Denekler poz aerosol önce anestezi yapılır. Örnek anestezi tiletamine / zolazepam, ketamin / asepromazin ve ketami içerirne. Anestezikler solunum bastırma ve kontrol, kararlı durum nefes tanıtımına minimize dayalı seçilir. Ek anestezi malzemeleri, hayvan prosedürü odalarında muhafaza ve aerobiyoloji ABSL-4 kabin laboratuara NHP transfer arabası üzerinde taşınır.

ABSL-4 takım laboratuvar içinde, NHPs iki yöntem (yani, baş-out pletismografi, solunum endüktif pletismografi [RIP]) inspirasyon tidal hacmi belirlemek için birini kullanarak pletismografisi geçmesi ve solunum hızı 10-12 değiştirir. Bu türetilmiş parametreler ya da bir aerosol, pozlama sırasında hemen önce patojenin tahmin solunan dozun doğru bir hesaplaması için kullanılmıştır. Baş-out pletismografi NHP 13 evler uzun, silindirik bölmeyi kullanır. Bir hayvan silindir olduğunda oluşturulan basınç düşüşü alternatif akım / doğru Curren tarafından işlenir, amplifikatör geçirilen, pnömotakog- tarafından yakalanırt dönüştürücü ve yukarıda akciğer parametreleri elde etmek için yazılım içine entegre edilmiştir. RIP kişinin göğüs ve karın 11,12 civarında elastik bantlar gömülü indüktif sarmal bakır tellerden yapılmış sensörleri kullanır. Bir indüktif kapasitör sensörü bir manyetik alan oluşturur. Nefes manyetik alan değişir ve ortaya çıkan gerilim değişimleri kısa dalga boylu ultra yüksek frekanslı radyo dalgaları aracılığıyla bilgisayara bir alıcıya yanında elastik bant bir vericiden aktarılmaktadır. Özel yazılım solunum hızı ve toplam göğüs yerinden gelen tidal hacim belirler.

pletismografi elde edilen dakika hacmi (MV) tahmini solunan doz (D) hesaplanmasında kullanılır. Bir aerosol üretimi ve örnekleme olarak, aerosol yoğunluğu (AC) ortam (V) hacmine biosampler konsantrasyonu (BC) çarpılması ile biosampler (FL) akış hızını çarpılması sonucu ile bölünerek hesaplanırmaruziyet süresi (T). basitleştirilmiş formül AC = M.Ö. x V olarak temsil edilir ÷ FL x T. Buna karşılık, NHPs gerçek aerosol meydan okuma için, D MV ve maruz kalma süresi (zaman = T) tarafından ac çarpılarak hesaplanır. basitleştirilmiş formül D = AC x OG x T. olarak temsil edilir

Bu makalenin amacı, görsel iki bakış açıları, ABSL-4 takım laboratuvar tarafı ve ABSL-4 kabin laboratuvar tarafından NHPs kullanarak tüm aerosol meydan prosedürü göstermektir. Bu işlemler belirtilen çeşitli uygulamalar için doğada genel olabilir rağmen, IRF-Frederick Aerobiyoloji Core özgüdür ve bu kurumda kullanılan gerçek uygulamalar temsil etmektedir. Bu makale güvenle bir aerosol meydan değil, gerçek aerosol meydan kendisi gerçekleştirmek için gereken biyogüvenlik prosedürleri üzerinde duruluyor. Bu prosedürler, biz bir NHP anestezi ile ilişkili riski nedeniyle biyogüvenlik uygulamaları göstermek için bir kukla konuyu kullanıyor. perfo Bununla birlikte, işlemprosedür ne olursa olsun kullanılan yüksek sonucu patojenin aynı olduğundan bir aerosol rming genel bir şekilde yazılmıştır. Biz maksimum çevreleme koşullarında yüksek sonucu patojenlerin aerosol çalışmaları yapmak zorluklarına dair bilim adamlarının bilgi ve anlayışı geliştirmek amaçlanmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu protokol şu hayvan bakımı kurallarına uyar. Hayvanlar Değerlendirme ve laboratuvar Animal Care International Akreditasyon Birliği tarafından akredite bir tesiste yerleştirildiler. Tüm deney prosedürleri Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü, Klinik Araştırma Bölümü, Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış ve Hayvan Refahı Yasası düzenlemelerine, Halk Sağlığı Servisi politikasına uygun olduğunu ve Bakım ve Kullanımı için Kılavuz edildi Laboratuvar Hayvanları öneriler.

1. Aerobiyoloji: Hayvan Biyogüvenlik Seviye 4 (ABSL-4) Takım Laboratuvarı

  1. Laboratuar hazırlanması
    1. (8 detaylı olarak özetlenen) ABSL-4 takım laboratuvar giriş işlemlerini tamamlayın.
    2. Tüm ekipman işlevselliğini sınamak (örneğin, pletismografi aleti, diz üstü, biyolojik tehlikesi çöp kutuları, biyolojik tehlikesi kesici kapları, söz konusu izleme cihazıüreticinin protokolüne uygun olarak ABSL-4 uygun laboratuar içinde oluşan aerobiyoloji işlemlerinde yer s).
    3. Transfer arabası önce Sınıf III BSC) duvar boyunca taşıma arabası bağlayan hızlı aktarım portu (RTP), işlevselliğini test biyolojik temiz olduğundan emin olun.
    4. Kulp ve sadece sertifikalı BSC içinde patojen sulandırmak. Uygun dezenfektanları içeren bir Sınıf II BSC içinde uygun formülasyon içinde patojen hazırlayın. taşıma sepeti ıslak buz üzerinde bir biyolojik tehlike sembolü ile etiketlenmiş hava geçirmez bir ikincil kapta patojen taşıyın. Sınıf ABSL-4 kabin laboratuvarında III BSC, Şekil 1 içine RTP ile patojenin geçirin.

2. Pletismografi: Hayvan Biyogüvenlik Seviye 4 (ABSL-4) Takım Laboratuvarı

  1. Pletismografi Kurulum ve Kalibrasyon
    1. pletismografi edinimi hangi yöntemi belirlemek(Baş-out pletismografi veya solunum indüktans pletismografi [RIP]) kullanılan ve birlikte ekipman bileşenleri bağlamak olacaktır.
    2. üreticinin protokolünü kullanarak deney öncesinde plethysmograph kalibre edin.
  2. pletismografi Edinme
    1. NHPs tutarken, çapraz bulaşmayı önlemek ve güvenli uygulamaları teşvik etmek uygun eldiven üstünden lateks veya nitril eldiven harici çifti yok. NHPs taşıma bittiğinde, bu ekstra eldivenleri çıkarıp ve oda içinde biyolojik olarak tehlikeli çöp tenekesine atın.
    2. Baş-out pletismografisi kullanıyorsanız, silindirin önüne yeni bir kauçuk / diş baraj takın. silindirin üstüne geçebilecek NSP başkanı için baraj küçük bir delik kesin. oturunca, baraj NHP boynuna bir mühür oluşturur.
    3. RIP kullanıyorsanız, RIP bantları düzgün NHP'ın göğüs ve karın çevresinde donatılmıştır ve elektronik bağlantıları tigh tersledi olup olmadığını kontroltly.
    4. ABSL-4 kabin laboratuvarda araştırmacılar pletismografi prosedürü elde edilen tüm verileri gönder. Aerosol sürecinde kullanılmak üzere uyumlu bir program aracılığıyla her hayvan için tidal volüm ve dakika hacmi verilerini dışa aktarın.

3. İnsan Olmayan Primat Ulaşım ve Taşıma: Hayvan Biyogüvenlik Seviye 4 Suit Laboratuvarı

  1. NHP Taşıma
    1. Monitör ve her NHP listelerde herhangi bir fiziksel manipülasyonlar, idareler veya rutin prosedürler kaydedin.
    2. bir aerosol meydan tamamlandığında, ulaşım kabın içine NHP yerleştirin ve hayvan tutma odasında bulunan ev kafesine NHP dönün.
    3. Canlı hayvan tutarken, mevcut olması 2 personeli gerektiren zorunlu kural.
  2. NHP Taşımacılık
    1. anestezi türünü belirlemek, anestezi süresi (ulaşım, pletismografi acquisit kapaklarıiyonu ve aerosol yüklemesi) ile uygulamadan önce anestezi karşılık gelen dozu. Tam Karşılaştırmalı Tıp personeli tarafından seçilen sürecine dayalı NHP uyutmak. Ek anestezi gerekiyorsa, bütün iğneler, kesici, şırıngalar ve kapaklar hayvan prosedürü odaların birinde bulunan bir kesici kapta atılır emin olun. Kullandıktan sonra herhangi bir iğne özetlemek yok.
    2. Ulaşım kutusunun kapak üzerindeki bir mandalla birbirine sabitlenmiş şeffaf kaplarda NHPs anestezi.
    3. Mobil sepeti üzerine yük taşıma kapları tamamen uygun araştırmacılar serbestçe dirençli (APR) kapıları, Şekil 1 nefes hava hatlarını kullanarak ve hava basıncına ilerlemek için izin vermek.
    4. NHP için hiçbir ek solunum hava taşımacılığı konteyner verilir gibi, taşıma süresini en aza indirmek.

4. Aerobiyoloji: ABSL-4 Kabine Laboratuvarı

  1. Sınıf III BSC Kur
    1. Aynı zamanda Karşılaştırmalı Tıp personeli tarafından gerçekleştirilen hayvan hazırlanması, Sınıf III BSC hazırlamak. (; Tavsiye wg 250 Pa veya -1.0 su basıncı (wg) minimum 125 Pa veya -0.5) görsel III BSC Belirtilen aralıkta tutulur Sınıfı o negatif basıncı doğrulayın. Herhangi bir potansiyel sızıntı veya çatlak (Şekil 1) için Sınıf III BSC kontrol edin.
    2. Fiziksel ve görsel Sınıf III BSC sentetik lastik eldiven ve zayıf noktalar için Sınıf III BSC bağlı O-halkalarını kontrol, yırtılma, kopma veya kuru çürüklüğü. Hasarlı Sınıf III sentetik kauçuk eldiven ve / veya kullanımdan hemen önce O-ringleri değiştirin. Bu noktada, Sınıf III BSC kirlenmiş değildir.
    3. Sınıf III BSC kirlenmiş ise bir sızıntı meydana gelirse, ihlal ve uyarı tesis yönetimi ve biyogüvenlik personelinin yerini belirlemek. Bir Sınıf III BSC entegre eldiven yırtılmış veya ihlal edilirse, eğitimli teknik ve İnter takip ederek zarar eldiven hemen değiştirinnal Sınıf III BSC standart işletme yöntemi.
    4. (N-alkil dimetil benzil amonyum klorür, N-alkil dimetil benzil amonyum klorit, etil) dezenfektan önce ikili bir kuaterner amonyum uygun konsantrasyonu ile aşırı gözyaşı ya da ihlali sprey, bir pozlama sırasında küçük yırtığa veya ihlali ihtiva eden entegre bir eldiven değiştirmek için . hava akışında bir artış yaratmak bu süre içinde aşırı hareketler yapmayın.
    5. Dikkatle, hala Sınıf III BSC bağlı hasar entegre eldiven bırakarak dış O-halkalarını (2 tanesi) çıkarın. Entegre eldiven mühür bozulmadan kalır sağlarken biraz limandan uzak hasarlı entegre eldiven manşet taşıyın. mühür ele geçirilirse, bir alarm doğru yapılırsa değildi prosedürü gösteren çalacaktır. İkinci O-ring Sınıf III BSC kaldırıldıktan sonra entegre eldiven manşet portuna bağlı kalmalıdır.
    6. Eski eldiven i üzerinde yeni bir Sınıf III BSC sentetik kauçuk eldiven yerleştirinn Aynı yönelim. Diğer Sınıf III BSC eldiven limanlarına benzer bağlantı noktası üzerinden tam bu yeni eldiveni yerleştirin.
    7. Yeni entegre eldiven üzerinde Sınıf III BSC yakın O halkasını değiştirin. bitişik entegre eldiven bağlantı noktasını kullanarak, dikkatle Sınıf III BSC içinde hasarlı Sınıf III BSC sentetik kauçuk eldiven çekin. Yeni Sınıf III sentetik kauçuk eldiven çevreleme korumak için bariyer olarak hareket edecektir. diğer hasarlı Sınıf III sentetik kauçuk eldiven kaldırıldı (içe doğru çekti) sonra, diğer dış O-ring yerine ve çalışmaya devam edin.
    8. Belirli Sınıf III BSC defterine eldiven gözyaşı / ihlali ile ilgili tüm ayrıntıları kaydedin. Hasarlı entegre eldiven kaldırıldı veya muhafaza içinde bir kırılma gerçekleştiğinde ise, uzlaşma entegre eldiven / port hala 0.47 m 3 / sn içe hava akışını sürdürür. Bu içe hava akımı dolayısıyla Sınıf II ve Sınıf III BSC'ler arasındaki tutarlılığı korumak, Sınıf II BSC ile kullanılan aynı hava akışı.
    9. dunk tankı kontrol edin vedunk tankı dunk tankı, Şekil 1 içinde belirtilen seviyeye dezenfektan ile dolu olduğundan emin olun. dunk tankında dezenfektan konsantrasyonu doğrulayın iletkenlik ölçer kullanılarak 3.500 uS bir minimumdur. Bu iletkenlik dezenfektan% 5 konsantrasyonuna eşittir.
    10. . Sınıf III BSC otoklav Şekil 1, bu nedenle tüm kontamine atık ve ekipmanları otoklava edilebilir fonksiyonel ve operasyonel olduğundan emin olun sterilizasyon sürecinin zorluklarına sürdürmek için bilinen tek donanım Otoklav.
    11. Diğer (örneğin, AAMP bileşenleri, dizüstü bilgisayar) aerobiyoloji ekipman ve deneyde yer alan hava ve vakum hatları, Şekil 2'de işlevselliğini sınamak.
    12. ünitenin mevcut kirlilik durumunu gösteren Sınıf III BSC işaretler koyun.
  2. NHP Baş-sadece Pozlama Odası Meclis ve Sistem Kurulumu
    1. 16-l NSP kafa sadece poz cha birleştirin. paslanmaz çelik teslimat ve egzoz hatları, Şekil 2 takarak lığı bir itme odasına yapılandırma / AAMP uygun hava, vakum ve basınç hatları bağlamak suretiyle, dinamik konfigürasyonunu çekin. Sınıf III BSC (Şekil 1) üst kısmında bulunan hermetik olarak kapatılmış bağlantı noktası üzerinden Sınıf III BSC içinde bir güç kaynağına ve bir dizüstü bilgisayara AAMP bağlayın.
    2. Herhangi bir sızıntı veya çatlak için bir araya NSP kafa sadece poz odasını kontrol edin, ve oda düzgün monte olduğundan emin olun.
    3. NSP kafa sadece pozlama bölmeye bir aerosol üreteci ve aerodinamik parçacık boyutu okuma cihazı takın.
    4. AAMP hava ve vakum kaynağını açın.
    5. dizüstü bilgisayarda aerosol protokol yazılımı başlatın. yazılım menüler halinde uygun NSP kafa sadece poz odası, aerosol üreteci ve biosampler debisini ve idari bilgileri girin.
    6. aerosol hesaplayınpletismografi işlemi sırasında elde edilen verilerden zaman, 2.2.4 adım. Baş-out pletismografisi kullanıyorsanız, aerosol maruz öncesinde doz hesaplamak. RIP kullanıyorsanız, aerosol maruziyeti sırasında aynı anda dozu hesaplar.
    7. patojen ile, aerosol üretecini doldurun.
    8. Aerosol yazılım sayesinde, "üzerinde" aerosol jeneratörü çevirmek ve 10 dakika boyunca meydan malzeme ile NHP kafa sadece poz odasının içine sprey.
    9. Aerosol jeneratörü kapatmak meydan malzemeyi boşaltın ve Sınıf III BSC içinde yer alan bir biyolojik olarak tehlikeli çöp torbasına meydan malzemesini atın.
  3. NHP Head-sadece Pozlama
    1. , NHP kafa sadece poz odasına bir biosampler takın toplama medya ile biosampler doldurun ve biosampler uygun vakum hattını takın.
    2. NHP'ın anestezi derinliğini kontrol edin. anestezi derinliği (yeterli kabul edilirse örneğin, dış uyaranlara, kas tonu, istikrarlı solunum ve kalp atım hızı yanıt vermeyen), Sınıf III BSC içine hızlı aktarım portu (RTP) ile anestezi NHP geçmektedir. Anestezi derinliği yeterli değilse, IV üzerinden ek anestezi, direkt enjeksiyon yönetmek, ya da anestezik pompa ile önceden (uygun laboratuvarında Karşılaştırmalı Tıp personeli) RTP aracılığıyla NHP geçirmeden. RTP yoluyla ek anestezik malzemeleri geçirin.
    3. NHP poz rampaya yatar pozisyonda NHP yerleştirin.
    4. Yavaşça NHP kafa tek maruz kalma odasının baş portala bağlı kauçuk / diş baraj aracılığıyla NHP kafasını geçmektedir. Lastik / diş baraj mühür aerosol maruziyeti sırasında NHP boynuna oluşturulur sağlar.
    5. NHP vital bulguları görsel ve taşınabilir konu monitör ile kararlı olduğundan emin olun.
    6. Adım 4.2.6 hesaplanan aerosol meydan saati girin. başına ve gerekli ekipman tanımlayıcılarıHer aerosol için görmüş resmi aerosol yazılımı çalıştırmak ve aerosol başlar.
    7. İstenen partikül boyutu dağılımı elde edilmektedir sağlamak için aerosol partikül boyutu analizörü ile, her bir aerosol akışı sırasında parçacık büyüklüğü verilerini kontrol edin. maruz boyunca sürekli veya aralıklı Bu doğrulamayı gerçekleştirmek.
    8. Aerosol meydan tamamlandığında, baş-tek maruziyet odasından NHP kaldırmak ve laboratuvar personeli potansiyel kontaminasyonu azaltmak için uygun dezenfektan ile NHP yüzü / kafasını silin.
    9. Aerosol odasına temizleyin veya hava haznesi havayı ve vakum geçirerek 5 dakika kalan ve geri kalmış parçacıkları yıkayın. Bu prosedür "temizlemek" ve müteakip NSP aerosol poz aerosol poz odasından kalan parçacıkları kaldıracaktır.
    10. ABSL-4 aerobiyoloji takım laboratuvar içinde bulunan araştırmacılara geri RTP ile NHP geçirin.
    11. Tüm Keskin aletler u atınBSC kalır belirlenmiş kesici kabında Sınıf III BSC içinde sed. kesici konteyner tam ¾ olduğunda, biyolojik tehlike çöp torbası içine koyun.
    12. Aerosol jeneratörü ve çöp, tek kullanımlık ekipman içeren biyolojik olarak tehlikeli çöp torbası içine zorluk malzemesi kalan herhangi boşaltın ve / veya ¾ dolu kesici kabını varsa.
    13. uygun şekilde etiketlenmiş toplama tüpleri içine aerosol biosampler tahsilat ortamı boşaltın ve ıslak buz üzerinde yerleştirin.
    14. planlanan tüm denekler meydan edilene kadar tekrarlayın 4.3.13 için 4.3.1 adımları.
    15. Aerosol doz ölçümü ve arka titrasyonları için araştırmacılara RTP aracılığıyla tüm aerosol biosampler örnekleri geçirin.
    16. Sınıf III BSC bağlı geçiş otoklav içine aerosol meydan gelen çöp ve ekipmanı yerleştirin ve uygulanabilir bir sterilizasyon döngüsü (Şekil 3) seçin.
    17. NHP kafa sadece c sökünhamber kafa sadece odasını ve biyolojik göstergeler ile doğrulanmış bir paraformaldehid gaz döngüsü ile Sınıf III BSC dekontamine ve.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sınıf III Biyogüvenlik kabini (BSC) bir ABSL-4 kabin laboratuvar içinde negatif basınç altında bir ABSL-4 ortamı içeren hermetik paslanmaz çelik dolap (Şekil 1). Malzemeler bir altı kabine monte edilmiş paslanmaz çelik tank vasıtasıyla ABSL-4 dolabı laboratuarda çalışan personel tarafından BSC sokulabilir 5 ihtiva eden (genellikle ABSL-4 ya da BSL-4 kademeli bir "dunk tank" olarak anılacaktır) % çift dörtlü amonyum (n-alkil dimetil benzil amonyum klorür, n-alki...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Biz son derece tehlikeli (Risk Grubu 4) patojenler ile çalışmak için IRF-Frederick kullanılan aerobiyoloji prosedürleri özetlemektedir. Biyoaerosol prosedürleri görselleştirme amaçlarından biri laboratuvar kökenli enfeksiyonları önlemek için bu tür patojenler ile deney sırasında bir Sınıf III BSC kullanırken personelin güvenliğini vurgulamaktır. Sınıf III BSC'ler patojenler laboratuvar (Şekil 1) içinde bulunan sağlamak için çift HEPA filtre içine egzoz içe yönlü hava akışını sağlamak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu yayının içeriği, ABD Sağlık ve İnsan Hizmetleri Bakanlığı'nın (DHHS) veya yazarlara bağlı kurum ve şirketlerin görüşlerini veya politikalarını yansıtmak zorunda değildir. Bu çalışma kısmen, Battelle Memorial Enstitüsü'nün ABD Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü (NIAID) ile Sözleşme No. kapsamında yaptığı ana sözleşme aracılığıyla finanse edildi. HHSN272200700016I. J.K.B., K.J., M.R.H., D.P., L.B. ve J.W. bu işi Battelle Memorial Enstitüsü'nün çalışanları olarak gerçekleştirdiler. Bu işi yapan Battelle Memorial Enstitüsü'nün alt yüklenicileri şunlardır: Tunnell Government Services, Inc.'in bir çalışanı olan JHK; ve Lovelace Solunum Araştırma Enstitüsü'nün bir çalışanı olan MGL.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Micro-Chem PlusUlusal Kimya Laboratuvarları255
Etanol Balıkçı 
ParaformaldehitSigma-Aldrich441244
Sınıf III BSCGermfreeDGB-10
Entegre BSC eldivenleriPiercan10UY2032-9
Aerosol Yönetim Platformu (AeroMP)Biaera TechnologiesNA
Head-out pletismografiBuxco/Data Sciences InternationalNA
Respriatory indüktif pletismografiVeri Bilimleri InternationalNA
Merkezli akış teğetsel aerosol jeneratörü (CenTAG)CH TechnologiesNA
Collison nebulizatörBGI Inc. CN25
OtoklavGetingeGEB 2404 AMB-2
Sperian pozitif basınçlı giysiHoneywell Güvenlik ÜrünleriBSL 4-2
Dış giysi eldivenleri (lateks, Ansell Konserve Makineleri ve İşleyicileri)Fisher19-019-601
Dış giysi eldivenleri (nitril/kauçuk, MAPA)Fisher2MYU1
ScrubsCintas60975/60976
ÇorapCintas944
Koli bandıPack-N-Tape51131069695
HavlularCintas2720
O-ringlerO-ring depoAS568-343
GaloşAmazonB0034KZE22
Zip yağAmazonB000GKBEJA
BP2818500

Kaynaklar

  1. Alibek, K., Handelman, S. The chilling true story of the largest covert biological weapons program in the world-told from inside by the man who ran it. , Random House. New York, NY. (1999).
  2. Roy, C. J., Pitt, L. M. Infectious disease aerobiology: aerosol challenge methods. Biodefense: research methodology and animal models. Swearingen, J. R. , Taylor & Francis. Boca Raton, FL. 61-76 (2006).
  3. National Institute of Allergy and Infectious Diseases. NIAID Category A, B, and C Priority Pathogens. , National Institutes of Health. Bethesda, MD, USA. Available from: http://www.niaid.nih.gov/topics/biodefenserelated/biodefense/pages/cata.aspx (2014).
  4. National Center for Environmental Health. Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
  5. Lackemeyer, M. G., et al. ABSL-4 aerobiology biosafety and technology at the NIH/NIAID integrated research facility at Fort Detrick. Viruses. 6 (1), 137-150 (2014).
  6. Bohannon, J. K., et al. Generation and characterization of large-particle aerosols using a center flow tangential aerosol generator with a non-human-primate, head-only aerosol chamber. Inhal Toxicol. , (2015).
  7. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Chosewood, L. C., Wilson, D. E., eds, , 5th edn, U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C.. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
  8. Janosko, K., et al. Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL4 Laboratory: 1. Biosafety level 4 suit laboratory suite entry and exit procedures. J Vis Exp. , (2015).
  9. Mazur, S., et al. Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL4 Laboratory: 2. General Practices. J Vis Exp. , (2015).
  10. Mortola, J. P., Frappell, P. B. On the barometric method for measurements of ventilation, and its use in small animals. Can J Physiol Pharmacol. 76 (10-11), 937-944 (1998).
  11. Zhang, Z., et al. Development of a respiratory inductive plethysmography module supporting multiple sensors for wearable systems. Sensors (Basel). 12 (10), 13167-13184 (2012).
  12. Ingram-Ross, J. L., et al. Cardiorespiratory safety evaluation in non-human primates. J Pharmacol Toxicol Meth. 66 (2), 114-124 (2012).
  13. Besch, T. K., Ruble, D. L., Gibbs, P. H., Pitt, M. L. Steady-state minute volume determination by body-only plethysmography in juvenile rhesus monkeys. Lab Anim Sci. 46 (5), 539-544 (1996).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

ABSL 4 LaboratuvarS n f III Biyog venlik KabiniAerobiyoloji Ara t rmasnsan D Primat MaruziyetiH zl Transfer Portu levselli iDald rma Tank DekontaminasyonuSolunumla nd ktif PletismografiAerosol Jenerat r al t rmaBiy rastarlay c Toplama MedyalarNegatif Bas n Korunmas

İlgili makaleler